色譜法氣相與液相

關(guān)于色譜法氣相與液相1.生化項目檢測

分離分析氨基酸、蛋白質(zhì)、核糖核酸、維生素、肽、酶、抗原抗體2.臨床檢驗

體液或者尿液中的有機酸、糖、激素等3.藥物檢測

藥物成分成分測定、含量分析色譜方法臨床應(yīng)用第2頁,共57頁，星期六，2024年，5月檢測器色譜柱（固定相）樣品組分1＋2＋3流動相流動相流動相流動相流動相流動相時間（t）響應(yīng)R圖5.1色譜分離原理示意圖進樣峰123112223333第3頁,共57頁，星期六，2024年，5月第四節(jié)氣相色譜儀第4頁,共57頁，星期六，2024年，5月試樣各組分在氣相和固定相間的分配系數(shù)不同被分離分離后的組分按保留時間的先后順序進入檢測器記錄信號信號經(jīng)放大后，在記錄器上描繪出各組分的色譜峰定性分析：保留時間（出峰位置）定量分析：峰高或峰面積一、氣相色譜儀的工作原理第5頁,共57頁，星期六，2024年，5月注射器氣路系統(tǒng)二、氣相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)載氣源減壓閥凈化器穩(wěn)壓閥穩(wěn)流閥進樣氣化色譜柱檢測器放大器記錄儀溫度控制系統(tǒng)進樣系統(tǒng)檢測系統(tǒng)

分離系統(tǒng)

溫控系統(tǒng)

記錄系統(tǒng)

第6頁,共57頁，星期六，2024年，5月（一）氣路系統(tǒng)：作用：向色譜柱提供質(zhì)地潔凈、流動平穩(wěn)的流動相。組成：載氣源、減壓閥、凈化器、穩(wěn)壓閥、穩(wěn)流閥、柱子及全部連接管道構(gòu)成。常用的載氣：氮氣、氫氣、氦氣、氬氣和空氣。第7頁,共57頁，星期六，2024年，5月（二）進樣系統(tǒng)：進樣器、氣化室1．進樣器微量注射器適用于液體樣品規(guī)格：有1

l、5

l、10

l和50

l。六通閥適用于氣體樣品。2．氣化室

第8頁,共57頁，星期六，2024年，5月（三）分離系統(tǒng)

色譜柱主要有兩類：填充柱和毛細(xì)管柱。第9頁,共57頁，星期六，2024年，5月1．濃度型檢測器

熱導(dǎo)檢測器電子捕獲檢測器2．質(zhì)量流速型檢測器氫火焰離子化檢測器火焰光度檢測器（四）檢測系統(tǒng)第10頁,共57頁，星期六，2024年，5月（五）溫度控制系統(tǒng)

控制溫度：對色譜柱、氣化室、檢測器三處的溫度控制。

程序升溫：改善寬沸程樣品的分離效果并縮短分析時間。第11頁,共57頁，星期六，2024年，5月（六）放大與記錄系統(tǒng)放大信號、自動記錄電信號第12頁,共57頁，星期六，2024年，5月1.噪聲和漂移（低）

噪音(mV

)：無樣品通過檢測器，由于儀器本身和工作條件等的偶然因素引起的基線起伏。漂移(mV/h)：基線在單位時間內(nèi)單方向緩慢變化的幅值。

三、氣相色譜儀的性能2.響應(yīng)時間（短）3.線性范圍（寬）4.靈敏度（高）5.檢出限（低）第13頁,共57頁，星期六，2024年，5月（一）氣相色譜儀的使用四、氣相色譜儀的的使用與維護第14頁,共57頁，星期六，2024年，5月裝柱開機參數(shù)設(shè)置基線調(diào)節(jié)樣品測定關(guān)機結(jié)果分析裝好實驗所需柱子，柱子連接部份保證不漏氣依次打開氣體發(fā)生器、氣體凈化器、儀器主機、電腦開關(guān)，進入WINDOWS界面，啟動工作站，連接主機，待儀器自動進行初始化自檢結(jié)束后，即可開始工作進入菜單，設(shè)置實驗所需的各種參數(shù)按已設(shè)定的參數(shù)和程序，使基線走平根據(jù)要求給儀器進樣，按開始鍵儀器自動檢測根據(jù)實驗所得結(jié)果進行分析，產(chǎn)生報告退出工作站，關(guān)掉電腦、主機電源，按要求關(guān)閉氣體發(fā)生器（或氣體鋼瓶）開關(guān)氣相色譜儀的操作流程第15頁,共57頁，星期六，2024年，5月（二）氣相色譜儀的維護1.氣源檢查管線泄漏檢查氣化室的維護檢測器的維護柱溫箱的維護維護周期（3個月）

第16頁,共57頁，星期六，2024年，5月進樣口：

清洗、更換硅膠墊

3.氣化室的維護進養(yǎng)室螺帽隔墊吹掃出口載氣入口分流器出口1進樣襯管2第17頁,共57頁，星期六，2024年，5月18（三）常見故障處理3.峰型：變寬、變尖、拖尾、前突、平頂4.樣品不能分離、不出峰、怪峰1.FID不能點火2.基線不穩(wěn)、出現(xiàn)噪聲第18頁,共57頁，星期六，2024年，5月19（四）色譜柱性能下降的癥狀切勿劃傷柱子堵上柱子兩端第19頁,共57頁，星期六，2024年，5月1.在氣相色譜分析中,用于定量分析的參數(shù)是()A保留時間B保留體積C半峰寬D峰面積D2.良好的氣-液色譜固定液為()A.蒸氣壓低、穩(wěn)定性好

B.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定

C.溶解度大,對相鄰兩組分有一定的分離能力

D.A、B和CD第20頁,共57頁，星期六，2024年，5月4.色譜體系的最小檢測量是指恰能產(chǎn)生與噪聲相鑒別的信號時()A進入單獨一個檢測器的最小物質(zhì)量

B進入色譜柱的最小物質(zhì)量

C組分在氣相中的最小物質(zhì)量

D組分在液相中的最小物質(zhì)量

3.試指出下列說法中,哪一個不正確?氣相色譜法常用的載氣是()A.氫氣B.氮氣C.氧氣D.氦氣

CB第21頁,共57頁，星期六，2024年，5月6.熱導(dǎo)池檢測器是一種()A濃度型檢測器

B質(zhì)量型檢測器

C只對含碳、氫的有機化合物有響應(yīng)的檢測器D只對含硫、磷化合物有響應(yīng)的檢測器

5.在氣-液色譜分析中,良好的載體為()A粒度適宜、均勻,表面積大B表面沒有吸附中心和催化中心C化學(xué)惰性、熱穩(wěn)定性好,有一定的機械強度DA、B和CDA第22頁,共57頁，星期六，2024年，5月8.下列因素中,對色譜分離效率最有影響的是()A柱溫B載氣的種類C柱壓D固定液膜厚度7.使用氫火焰離子化檢測器,選用下列哪種氣體作載氣最合適？()AH2BHeCArDN2DA9．如果試樣中組分的沸點范圍很寬，分離不理想，可采取的措施為:A.選擇合適的固定相；B.采用最佳載氣線速；C.程序升溫；D.降低柱溫C第23頁,共57頁，星期六，2024年，5月1．試樣中各組分能夠被相互分離的基礎(chǔ)是各組分具有不同的熱導(dǎo)系數(shù)。2．組分的分配系數(shù)越大，表示其保留時間越長。3．分離溫度提高，保留時間縮短，峰面積不變。4．某試樣的色譜圖上出現(xiàn)三個色譜峰，該試樣中最多有三個組分。

第24頁,共57頁，星期六，2024年，5月5．分析混合烷烴試樣時，可選擇極性固定相，按沸點大小順序出峰。6．組分在流動相和固定相兩相間分配系數(shù)的不同及兩相的相對運動構(gòu)成了色譜分離的基礎(chǔ)。7．氣液色譜分離機理是基于組分在兩相間反復(fù)多次的吸附與脫附，氣固色譜分離是基于組分在兩相間反復(fù)多次的分配。

第25頁,共57頁，星期六，2024年，5月8．在色譜分離過程中，單位柱長內(nèi)，組分在兩相向的分配次數(shù)越多，分離效果越好。9．氣液色譜固定液通常是在使用溫度下具有較高熱穩(wěn)定性的大分子有機化合物。10．柱效隨載氣流速的增加而增加。11．控制載氣流速是調(diào)節(jié)分離度的重要手段，降低載氣流速，柱效增加，當(dāng)載氣流速降到最小時，柱效最高，但分析時間較長。

第26頁,共57頁，星期六，2024年，5月12．有人測試色譜柱效時，發(fā)現(xiàn)增加載氣流速，柱效下降，減小載氣流速，柱效增加，故得出結(jié)論：柱效與載氣流速成反比。13．當(dāng)用苯測定某分離柱的柱效能時，結(jié)果表明該柱有很高的柱效，用其分離混合醇試樣時，一定能分離完全。14．當(dāng)用一支極性色譜柱分離某烴類混合物時，經(jīng)多次重復(fù)分析，所得色譜圖上均顯示只有3個色譜峰，結(jié)論是該試樣只含有3個組分。

第27頁,共57頁，星期六，2024年，5月31．色譜外標(biāo)法的準(zhǔn)確性較高，但前提是儀器穩(wěn)定性高和操作重復(fù)性好。32．FID檢測器對所有的化合物均有響應(yīng)，故屬于廣譜型檢測器。

33．電子俘獲檢測器對含有S,P元素的化合物具有很高的靈敏度。

第28頁,共57頁，星期六，2024年，5月34．毛細(xì)管氣相色譜分離復(fù)雜試樣時，通常采用程序升溫的方法來改善分離效果。35．毛細(xì)管色譜的色譜柱前需要采取分流裝置是由于毛細(xì)管色譜柱對試樣負(fù)載量很?。恢蟛捎谩拔泊怠毖b置是由于柱后流出物的流速太慢。

第29頁,共57頁，星期六，2024年，5月第30頁,共57頁，星期六，2024年，5月第五節(jié)高效液相色譜儀第31頁,共57頁，星期六，2024年，5月用高壓輸液泵將流動相泵入裝有固定相的色譜柱進樣閥注入測定樣品，由流動相帶入柱內(nèi)在色譜柱內(nèi)分離各組分組分分離后依次進入檢測器，記錄儀記錄色譜峰定性：色譜峰的位置定量：峰高(或峰面積)

一、高效液相色譜儀工作原理第32頁,共57頁，星期六，2024年，5月高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)框圖廢液分離柱檢測器數(shù)據(jù)處理進樣裝置溫度控制流量控制梯度裝置高壓泵記錄儀脫氣裝置儲液槽第33頁,共57頁，星期六，2024年，5月檢測器色譜柱（固定相）樣品組分1＋2＋3流動相流動相流動相流動相流動相流動相時間（t）響應(yīng)R圖5.1色譜分離原理示意圖進樣峰123112223333第34頁,共57頁，星期六，2024年，5月輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)。

二、高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)第35頁,共57頁，星期六，2024年，5月（一）輸液系統(tǒng)

提供流動相

貯液器過濾器和脫氣裝置高壓輸液泵梯度洗脫裝置流量控制注意：高壓輸液泵是HPLC最重要的部件,其性能對分離及檢測均有十分明顯的影響。第36頁,共57頁，星期六，2024年，5月（二）進樣系統(tǒng)注射器：

優(yōu)點：簡單、方便

缺點：重現(xiàn)性差、耐壓力差（高壓下溶液漏液）自動進樣：

優(yōu)點：簡單、方便、重現(xiàn)性好閥進樣：第37頁,共57頁，星期六，2024年，5月六通閥

六通閥進樣裝置進樣量可由樣品管控制，進樣準(zhǔn)確，重復(fù)性好。第38頁,共57頁，星期六，2024年，5月（三）分離系統(tǒng)

分離系統(tǒng)是高效液相色譜儀的重要部件，其核心是色譜柱。

第39頁,共57頁，星期六，2024年，5月（四）檢測系統(tǒng)1.紫外-可見光檢測器固定波長檢測器可變波長檢測器（190nm-800nm）光電二極管陣列檢測器1.低壓汞燈；2.透鏡；3與6.遮光板；4.參比池；5.測量池；7.紫外濾光片；8.雙子外光敏電阻56782.熒光檢測器3.電化學(xué)檢測器第40頁,共57頁，星期六，2024年，5月（五）數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)

記錄儀、積分儀或色譜工作站

記錄儀記錄色譜流出曲線積分儀的作用主要用于求色譜峰的面積（定量）。

第41頁,共57頁，星期六，2024年，5月（一）高效液相色譜儀的使用三、高效液相色譜儀的使用與維護第42頁,共57頁，星期六，2024年，5月裝柱開機參數(shù)設(shè)置基線調(diào)節(jié)樣品測定關(guān)機結(jié)果分析裝好實驗所需柱子，保證連接部分要不漏液依次打開電腦、儀器各模塊電源，待自檢完成后，啟動工作站并聯(lián)機，打開“Purge”閥趕走管內(nèi)氣泡進入菜單，設(shè)置實驗所需的各種參數(shù)按已設(shè)定的參數(shù)和程序，使基線走平根據(jù)要求給儀器進樣，按開始鍵，儀器自動檢測根據(jù)實驗所得結(jié)果進行分析，獲得相關(guān)的信息，產(chǎn)生報告先關(guān)燈，用相應(yīng)溶劑充分沖洗系統(tǒng)。退出工作站，依提示關(guān)泵及其他窗口，關(guān)閉計算機和儀器各模塊電源開關(guān)高效液相色譜儀的操作流程第43頁,共57頁，星期六，2024年，5月四、日常維護與常見故障處理1.輸液泵腐蝕溶劑：不可過夜；沖洗時用水→水-甲醇→甲醇流動相：使用前脫氣；避免揮發(fā)性大的溶劑用保護柱（尤其是血樣、生物制品）長時間不用檢測器可以關(guān)掉燈，以4小時為限不要讓緩沖液長期停滯在檢測室內(nèi)，用純水沖洗2.進樣閥3.色譜柱4.檢測器（一）維護第44頁,共57頁，星期六，2024年，5月保護柱位置：在進樣器和分析柱之間作用：保護并延長分析柱使用壽命填料：一般和分析柱相同長度：一般1-2cm清洗：首先要拆下分析柱，以免洗脫物進入分析柱；然后選擇適當(dāng)?shù)牧鲃酉噙M行沖洗。第45頁,共57頁，星期六，2024年，5月1.異常峰和噪聲2.基線漂移3.紫外吸收響應(yīng)值出現(xiàn)負(fù)峰（二）檢測器常見故障第46頁,共57頁，星期六，2024年，5月(三）色譜柱性能下降的癥狀HPLC等級流動相，濾膜過濾，超聲脫氣用在線過濾器用保護柱（尤其是血樣、生物制品）色譜柱反壓升高色譜峰拖尾保留值降低第47頁,共57頁，星期六，2024年，5月思考題氣相色譜儀的工作原理和基本結(jié)構(gòu)是什么？高效液相色譜儀的工作原理和基本結(jié)構(gòu)是什么？？第48頁,共57頁，星期六，2024年，5月491.高效液相色譜儀中高壓輸液系統(tǒng)不包括A、貯液器

B、高壓輸液泵

C、過濾器

D、梯度洗脫裝置

E、進樣器

2.在高效液相色譜儀中保證流動相以穩(wěn)定的速度流過色譜柱的部件是

A、貯液器B、輸液泵C、檢測器D、溫控裝置E

B第49頁,共57頁，星期六，2024年，5月503.高效液相色譜儀與氣相色譜儀比較增加了A、恒溫箱

B、進樣裝置

C、程序升溫

D、梯度淋洗裝置4.在液相色譜中,某組分的保留值大小實際反映了哪些部分的分子間作用力A、組分與流動相B、組分與固定相C、