農(nóng)業(yè)部2122號(hào)公告-16-2014 轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè) 抗蟲玉米MON810及其衍生品種定性PCR方法

農(nóng)業(yè)部2122號(hào)公告一16—2014轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)抗蟲玉米MON810及其衍生品種定性PCR方法I農(nóng)業(yè)部2122號(hào)公告—16—2014本標(biāo)準(zhǔn)代替農(nóng)業(yè)部869號(hào)公告—9—2007《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)抗蟲玉米MON810及——修改了原理中關(guān)于預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物的表述(見4,2007年版的4);——-修改了定性PCR方法的引物序列(見5.12～5.13,2007年版的5.12);——修改了定性PCR方法的反應(yīng)體系(見表1,2007年版的表1);——增加了資料性附錄(見附錄A)。-—農(nóng)業(yè)部869號(hào)公告—9—2007。1抗蟲玉米MON810及其衍生品種定性PCR方法農(nóng)業(yè)部1861號(hào)公告—3—2012轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)玉米農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告—19—2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)抽樣zSSIIb基因zSSIbgene25.12zSSIIb基因PCR引物：zSSIIb-F:5'-CTCCCAATCCTTTGAzSSIIb-R:5'-TCGATTTCTCTCTTGGMON810-F:5'-ACCTCGAGATTTACCMON810-R:5'-TGCTGCAGGTGGTCT5.17定性PCR反應(yīng)試劑盒37.5.1.2.1每個(gè)試樣PCR反應(yīng)設(shè)置3次平行。終濃度水10×PCR緩沖液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)25mg/LDNA模板總體積“—”表示體積不確定。如果PCR緩沖液中含有氯化鎂，則不加氯化鎂溶液。根據(jù)TaqDNA聚合酶的濃度確定其體積，并相應(yīng)調(diào)整水的體積，使反應(yīng)體系總體積達(dá)到25.0μL。分?jǐn)?shù)為0.1%～1.0%的玉米基因組DNA,或采用MON810轉(zhuǎn)化體特異性序列與非轉(zhuǎn)基因玉米基因組4農(nóng)業(yè)部2122號(hào)公告—16—2014增片段是否為目的DNA片段，按照7.8和7.9的規(guī)定執(zhí)行。將回收的PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序，與轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米MON810轉(zhuǎn)化體特異性序列(參見附錄A)進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照PCR反應(yīng)中，zSSIb內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因和MON810轉(zhuǎn)化體特異性序列得到擴(kuò)增，且擴(kuò)增片段8.2.2zSSIIb內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因片段得到擴(kuò)增本標(biāo)準(zhǔn)PCR方法的檢出限為1g/kg。5農(nóng)業(yè)部2122號(hào)公告—16—20141ACCTCGAGATTTACCTGATCCGCTACAACGCCAAGC71CTGGCCGCTGAGCGCCCCCAGCCC141GATGTGGGCTGCACCGACCTGAACGAGGACTTTCGG2