前列泰膠囊中扁蓄藥材的薄層鑒別方法研究

前列泰膠囊中萹蓄藥材的薄層鑒別方法研究

[摘要]目的：建立前列泰膠囊中萹蓄的薄層鑒別方法。方法：以山奈素有效成分作為對照品，先采用萃取辦法除雜，后用雙相酸水解的方法提取前列泰膠囊中萹蓄的山奈素成分，對萹蓄藥材進(jìn)行薄層鑒別，并考察不同展開介質(zhì)、不同點(diǎn)樣量、不同廠家薄層板、不同溫度、不同濕度對該藥中萹蓄藥材薄層色譜的影響。結(jié)果：以山奈素為對照品，甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8:3:1）為展開系統(tǒng)，對萹蓄藥材薄層鑒別特征明顯，專屬性強(qiáng)。結(jié)論：經(jīng)過試驗,該方法可行，重復(fù)性好，可作為前列泰膠囊中萹蓄藥材的薄層鑒別方法。關(guān)鍵詞：前列泰膠囊；萹蓄；山奈素；薄層鑒別前列泰膠囊是由益母草、萹蓄、紅花、油菜蜂花粉、知母(鹽炒)、黃柏(鹽炒)、六味藥材，經(jīng)水提濃縮等工藝制備的膠囊固體制劑。具有清熱利濕、活血散結(jié)的功效［1］，臨床上對濕熱挾淤的慢性前列腺炎癥有較好的療效。該品種全國有11家生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)，但目前執(zhí)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可控性較低，還有待于完善。目前，萹蓄作為該處方的臣藥，萹蓄為蓼科植物萹蓄PolygonumaviculareL.的干燥地上部分,收載于2010年版中國藥典(一部),具有補(bǔ)腎、清肝明目、利尿的功能[2]。山奈素、楊梅苷和萹蓄苷等黃酮類是其主要的有效活性成分[3]，在目前標(biāo)準(zhǔn)中，并未見到關(guān)于萹蓄的定性或定量的方法，因此，本實(shí)驗將選取山奈素作為指標(biāo)性成分，對前列泰膠囊的萹蓄通過薄層色譜鑒別方法進(jìn)行研究，為保證標(biāo)準(zhǔn)的可控性更加有效可控。1儀器、試劑和樣品KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），DGG-9246A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司），十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司），甲醇(分析純20130411,上海申博化工有限公司)。三氯甲烷(分析純20140528,上海申博化工有限公司)，濃鹽酸(分析純20130721,上海申博化工有限公司)，山奈素對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，編號為111532-201402），前列泰膠囊（20140304、20140201、20140202，貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥股份有限公司）。2方法與結(jié)果2.1供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物2g，加甲醇30ml，超聲處理30min，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加水30ml溶解，靜置，傾取上層液，水液以三氯甲烷提取四次，每次25ml，三氯甲烷液棄去，水液加濃鹽酸1ml，三氯甲烷40ml，水浴回流提取1h，分取三氯甲烷層，水浴濃縮至5ml，作為供試品溶液。2.2對照品溶液的制備取山奈素對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。2.3陰性對照品溶液的制備按處方比例及制備工藝，配制缺少萹蓄藥材的陰性樣品，按“2.1”同法制備陰性對照品溶液，2.4顯色劑5%三氯化鋁乙醇溶液。2.5展開劑甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8:3:1）[4]展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，105℃下加熱5分鐘，于紫外燈下365nm檢視。2.6薄層色譜條件的考察2.6.1薄層板的選擇分別吸取供試品溶液2μl和對照品溶液2μl，以薄層硅膠G板和聚酰胺薄膜2種不同類型材料薄層板，進(jìn)行展開，取出，晾干，噴以顯色劑，105℃加熱5min，于紫外燈下365nm檢視。見圖1、2。123SS123S（1、2、3為樣品3批次，S為山奈素對照品）（1、2、3為樣品3批次，S為山奈素對照品）圖1聚酰胺薄膜圖2硅膠G板由圖1、2可得，聚酰胺薄膜板并未將供試品分離；硅膠G板分離效果良好，斑點(diǎn)圓整，與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。故選取硅膠G板展開。2.6.2最佳點(diǎn)樣量考察分別吸取供試品溶液和對照品溶液1、2、3、4、5、6μl，分別點(diǎn)于不同薄層硅膠G板上，進(jìn)行考察，展開，取出，晾干，噴以顯色劑，105℃加熱5min，于紫外燈下365nm檢視。見圖3、4。1234561234567圖3供試品不同點(diǎn)樣量的考察圖4對照品不同點(diǎn)樣量的考察由圖3、4可得，供試品2μl點(diǎn)樣量效果最佳。當(dāng)點(diǎn)樣量大于2μl時，供試品山奈素位置斑點(diǎn)出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象；對照品最佳點(diǎn)樣量2~7μl皆可，故選擇2μl。結(jié)合上述2種因素實(shí)驗結(jié)果，可確定薄層板為硅膠G板，供試品和對照品最佳點(diǎn)樣量皆為2μl。經(jīng)預(yù)實(shí)驗驗證，確定鑒別萹蓄的薄層鑒別的方法，并按照《中國藥典》2010版一部附錄ⅩⅧA中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則進(jìn)行方法學(xué)驗證。2.7方法學(xué)驗證2.7.1專屬性考察用三個批次的樣品，照上述方法進(jìn)行專屬性實(shí)驗，結(jié)果見圖5。123SS1（1、2、3為前列泰膠囊三批次樣品，S為山奈素對照品，S1為缺萹蓄陰性對照）圖5供試品山奈素專屬性考察經(jīng)專屬性試驗考察圖片，陰性樣品無干擾，山奈素Rf值約為0.42。在與對照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色清晰斑點(diǎn)，斑點(diǎn)圓整，分離效果好。說明該法專屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)顯色清晰。2.7.2耐用性試驗用三個批次的樣品，分別進(jìn)行3個不同廠家薄層板對比，3種不同溫度及濕度作為變動因素，照上述鑒別方法進(jìn)行實(shí)驗。2.7.2.1不同廠家薄層板試驗圖片見5、6、7。123S123S(1、2、3為樣品3批，S為山奈素對照品)(1、2、3為樣品3批，S為山奈素對照品)圖片6廠家1圖片7廠家2123S(1、2、3為樣品3批，S為山奈素對照品)圖片8廠家3經(jīng)3不同廠家耐用性實(shí)驗結(jié)果表明，前列泰膠囊中山奈素的薄層鑒別圖斑點(diǎn)分離效果均表現(xiàn)好，斑點(diǎn)圓整，但不同廠家薄層板對山奈素斑點(diǎn)影響不大，重復(fù)性較好。2.7.2.2不同溫度及濕度試驗不同溫濕度設(shè)定參數(shù)，見表1。圖譜見9、10、11。表1不同溫度及相對濕度的考察項目序號溫度（℃）相對濕度（％）120502255533570123S123S123S(1、2、3為樣品3批，S為山奈素對照品)(1、2、3為樣品3批，S為山奈素對照品)(1、2、3為樣品3批，S為山奈素對照品)圖9溫度20℃濕度50%的考察圖10溫度25℃濕度55%的考察圖10溫度35℃濕度70%的考察通過上述不同溫度及相對濕度的考察實(shí)驗，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。斑點(diǎn)清晰，分離效果好，Rf值適中，陰性對照無干擾。細(xì)小的變動，該鑒別方法仍有效。2.8結(jié)果經(jīng)過上述中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證，確定該方法為：取本品2g，加甲醇30ml，超聲處理30min，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加水30ml溶解，靜置，傾取上層液，水液以三氯甲烷提取四次，每次25ml，三氯甲烷液棄去，水液加濃鹽酸1ml，三氯甲烷40ml，水浴回流提取1h，分取三氯甲烷層，水浴濃縮至5ml，作為供試品溶液。另取山奈素對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VIB）試驗，吸取上述兩種溶液2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8:3:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，105℃下加熱5分鐘，于紫外燈下365nm檢視。2.9討論本研究在選定供試品處理方法及展開系統(tǒng)之后，選取不同薄層板作為實(shí)驗考查因素，對2種薄層板進(jìn)行了考查，確定硅膠G板作為展開介質(zhì)。在確認(rèn)整個薄層方法后，首先進(jìn)行了系統(tǒng)預(yù)試驗，對供試品和對照品進(jìn)行最佳點(diǎn)樣量的考查，找出最佳點(diǎn)樣量，最后，進(jìn)行該薄層系統(tǒng)方法學(xué)驗證試驗，考察不同溫度、不同濕度和不同廠家薄層板對此展開系統(tǒng)的影響，結(jié)果表明該薄層鑒別方法可行，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性良好?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1]王聰慶，陳娟，師彥平等．高效液相色譜法測定前列泰片中山柰素的含量［J］.分析測試與儀器，2008,14(1):50~53.[2]許福泉，管華詩，劉紅兵等．萹蓄化學(xué)成分及其歸經(jīng)藥性初探［J］.中國海洋大學(xué)學(xué)報，2010,40(3):101~104.[3]吳呈祥，李萍，陳君等．中藥萹蓄的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.藥學(xué)與臨床研究，2009,17(5):365~369.[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:314.[5]國家藥典委員會.