甘肅省地方標準-馬鈴薯種薯莖尖脫毒和組培苗繁育技術(shù)規(guī)程

DB62ICS：65.020DB62B61備案號：甘肅省地方標準DB62/T1703—2009 2009—04—20發(fā)布2009—05—15實施甘肅省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布前言本標準由甘肅省農(nóng)牧廳提出。本標準起草單位：甘肅省種子管理總站、定西市旱作農(nóng)業(yè)科研推廣中心、甘肅省農(nóng)科院馬鈴薯研究所。本標準主要起草人：常宏、第紅君、蒲育林、王一航、戴錚、王瑞英、楊培達、齊恩芳馬鈴薯種薯莖尖脫毒和組培苗繁育技術(shù)規(guī)程1范圍本標準規(guī)定了馬鈴薯種薯的定義、有害生物、生產(chǎn)體系、質(zhì)量要求、莖尖脫毒流程和組培苗繁育技術(shù)要求。本標準適用于馬鈴薯種薯莖尖脫毒和組培苗的生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB7331馬鈴薯種薯產(chǎn)地檢疫規(guī)程GB18133馬鈴薯脫毒種薯NY/T1212—2006馬鈴薯脫毒種薯繁育技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標準。3.1馬鈴薯種薯符合GB18133規(guī)定相應質(zhì)量要求的原原種、原種和大田用種。3.2組培苗馬鈴薯優(yōu)良品種的塊莖，經(jīng)莖尖剝離病毒、組織培養(yǎng)獲得的，經(jīng)質(zhì)量檢測后不帶有PVX、PVY、PVS、PLRV、PVA、PVM和馬鈴薯紡錘塊莖類病毒，用于生產(chǎn)原原種或原種的再生苗。3.3原原種pre-elite用育種家種子、脫毒組培苗或試管薯，在防蟲網(wǎng)、溫室等隔離條件下生產(chǎn)，經(jīng)質(zhì)量檢測達到GB18133要求的馬鈴薯種薯。3.4原種elite用原原種作種薯，在良好隔離環(huán)境中生產(chǎn)的，經(jīng)質(zhì)量檢測達到GB18133要求的種薯。3.5一級種薯（大田用種）qualifiedⅠ在相對隔離環(huán)境中，由原種作種薯生產(chǎn)的，經(jīng)質(zhì)量檢測后達到GB18133要求的，用于生產(chǎn)二級種薯或商品薯的種薯。3.6二級種薯（大田用種）qualifiedⅡ在相對隔離環(huán)境中，由一級種薯作種薯生產(chǎn)的，經(jīng)質(zhì)量檢測后達到GB18133要求的，用于生產(chǎn)商品薯的種薯。3.7外部缺陷畸形、次生、龜裂、蟲害和機械損傷的薯塊。4有害生物4.1非檢疫性限定有害生物4.1.1病毒馬鈴薯X病毒馬鈴薯Y病毒馬鈴薯A病毒馬鈴薯S病毒馬鈴薯M病毒馬鈴薯卷葉病毒4.1.2細菌馬鈴薯青枯病菌馬鈴薯濕腐病馬鈴薯軟腐病馬鈴薯黑脛病菌4.1.3放線菌馬鈴薯普通瘡痂病4.1.4真菌馬鈴薯晚疫病馬鈴薯干腐病馬鈴薯黑痣病4.1.5蟲馬鈴薯塊莖蛾4.2檢疫性有害生物4.2.1類病毒馬鈴薯紡錘塊類病毒4.2.2細菌馬鈴薯環(huán)腐病菌4.2.3植原體馬鈴薯叢枝植原體4.2.4馬鈴薯白線蟲馬鈴薯金線蟲4.2.5蟲馬鈴薯甲蟲種薯生產(chǎn)體系種薯生產(chǎn)體系包括兩個階段：即在設施條件下生產(chǎn)組培苗、原原種和在田間自然條件下生產(chǎn)原種、一級種薯和二級種薯。種薯（苗）的質(zhì)量檢驗將針對上述兩個階段不同環(huán)節(jié)產(chǎn)出的產(chǎn)品進行。種薯生產(chǎn)體系流程見圖1。組培苗組培苗原原種原原種原種原種一級種薯一級種薯二級種薯二級種薯圖1種薯生產(chǎn)體系流程圖質(zhì)量要求6.1種薯分級種薯級別分為原原種、原種、一級種薯和二級種薯。6.2質(zhì)量要求種薯生產(chǎn)產(chǎn)地檢疫應符合GB7331規(guī)定。一旦發(fā)現(xiàn)檢疫性病蟲害，應立即向檢疫部門報告，并由其根據(jù)病蟲害種類采取相應措施。同時該地塊所有馬鈴薯不能作為種薯。組培苗經(jīng)質(zhì)量檢測后不帶有PVX、PVY、PVS、PLRV、PVA、PVM和馬鈴薯紡錘塊莖類病毒。7脫毒流程7.1培養(yǎng)基制備7.1.1培養(yǎng)基分裝：培養(yǎng)基分裝于7.1.2消毒：器皿置于0.8kg/cm2～1.1kg/cm2消毒鍋120℃高壓滅菌20min7.2材料的選擇和處理7.2.1取材于經(jīng)審（認）定品種的健康腋芽或休眠芽。7.2.2在生長季節(jié)選擇具有原品種典型特征的單株材料，收獲并通過休眠后，將薯塊在溫室或培養(yǎng)箱內(nèi)進行催芽處理。莖尖脫毒7.3.1無菌工作條件：組培室用甲醛溶液熏蒸后，用紫外線燈照射40min。工作人員用肥皂水洗手，75%酒精擦拭消毒，操作用具置烘箱180℃7.3.2病毒鈍化：將馬鈴薯薯塊在36℃條件下處理4～6周后制取脫毒材料，用紫外線照射脫毒材料10min，7.3.3莖尖消毒：待芽萌發(fā)至2cm～3cm時，選取粗壯的芽，用解剖刀切下，芽段用無菌水沖洗20min，再用75%的酒精浸蘸一下，放入無菌杯內(nèi)用0.1%的Hgcl水浸泡5min或10％的次氯酸鈉浸泡15min，用無菌水沖洗2～7.3.4莖尖剝離及接種：將莖尖放在無菌濾紙上吸干水分，在30～40倍解剖鏡下用解剖刀、解剖針剝?nèi)б粋€葉原基的莖尖（0.2mm～0.4mm），7.4組培苗培養(yǎng)7.4.1溫度15℃～25℃，光照強度2000Lx～7.4.2當看到明顯生長的小莖，葉原基形成可見的小葉，轉(zhuǎn)入無生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中。7.4.3小苗繼續(xù)生長并形成根系，發(fā)育成3～4個葉片的小植株，就可繼續(xù)擴繁。7.4.4病毒檢測：以單株為系進行擴繁，苗數(shù)達150～200株時，隨機抽取3～4個樣本，每個樣本10～15株，進行病毒檢測，采用GB18133附錄A：酶聯(lián)免疫吸附試驗法和附錄B：往復雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳法確認不帶有PVX、PVY、PVS、PLRV、PVA、PVM和馬鈴薯紡錘塊莖類病毒。8組培苗的繁育8.1組培苗的繁育8.1.1培養(yǎng)基制備：將MS培養(yǎng)基配制成液，裝入器皿（MS培養(yǎng)基配方見NY/T1212—2006附錄L表L.1），置于0.8kg/cm2～1.1kg/cm2消毒鍋120℃高壓滅菌20min8.1.2組培苗處理：將組培苗置于超凈工作臺上，器皿表面用75%的酒精8.1.3組培苗培養(yǎng)條件：溫度15℃～25℃，光照強度2000Lx～3000Lx，光照時間168.2組培苗的快速繁育8.2.1基礎苗繁育8.2.1.1按8.1.1、8.1.2配制培養(yǎng)基和處理組培苗。8.2.1.2切段底部（根部）不作為基礎苗，直接轉(zhuǎn)入移栽用苗培養(yǎng)。其他各段作為基礎苗進行繁殖。8.2.1.3培養(yǎng)溫度15℃～20℃，光照強度2000Lx～3000Lx，光照時間10h/d～148.2.1.4培養(yǎng)周期30d～40d。8.2.2移栽用苗的繁育8.2.2.1按