DB21∕T 2592.1-2016 雞傳染性疾病檢測方法 第1部分：雞傳染性法氏囊病毒實時熒光RT-PCR 檢測方法

DB21DB21/T2592.1—2016雞傳染性疾病檢測方法第1部分：雞傳染性法氏囊病毒實時熒光RT-PCR檢測方法TestingmethodofchickeninfectiousdiseasePart1：Thetestingmethodofreal-timefluorescentRT-PCRforchickeninfectiousbursaldiseasevirus遼寧省質量技術監(jiān)督局發(fā)布1 2 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 6 6 6 6 6 6 6 6 7 82——雞傳染性法氏囊病毒實時熒光RT-PCR檢測方法；——雞傳染性支氣管炎病毒實時熒光RT-PCR檢測方——雞馬立克氏病毒實時熒光PCR檢測方法。本標準負責起草單位：遼寧省動物醫(yī)學研究院、遼寧省動物疫3本標準規(guī)定了雞傳染性法氏囊病毒熒光RT-PCR檢測的樣品采集、件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用GB/T6682—2008分析實驗室用水RT-PCR：反轉錄—聚合酶鏈式反應(reversetranscription-polymerasechainreactiRNA：核糖核酸(ribonucleicacDEPC：焦碳酸乙二酯（diethypyrocarbonatePBS：磷酸鹽緩沖鹽水(phosphatebuffersali4材料與試劑4.1.3混勻器、冰箱（2℃~8℃和-20℃兩種特別說明以外，本標準所用試劑均為分析純，44.2.575%乙醇：用新開啟的無水乙醇和DEPC水（符合GB6682－2008要求4.2.11SYBRGreen試劑盒（Eppendorf管、研缽。5次取咽喉分泌液；取泄殖腔拭子時將拭子深1.0mLPBS(見附錄A)的1.5mLEppendorf管中，加蓋、編號。采集肌肉或組織臟器。待檢樣品裝入一次性塑料袋或其它滅菌容器，5樣品在混合器上充分混合后，用高壓滅菌鑷子將拭子中的液體擠出，室溫放置30min，取上清液轉入無菌的1.5mLEppendorf心15min，取上清液轉入無菌的1.5mLEppendorf管中，編號備用。制備的樣品在2℃~8℃條件下保存應不超過24h，若需長期保存應置-70℃以下，但應避免反復凍6.2.1取n個滅菌的1.5mLEppendorf管，其中n為被檢樣品、陽性對照與陰性對照的和，編號。67磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）配方A.1A液NaH2PO4Na2HPO4A.30.01mol/L、pH7.2磷酸鹽緩沖鹽水的配制0.2mol/LB液36mL8實驗室應分為三個相對獨立的工作區(qū)域：樣品制備區(qū)、反各工作區(qū)域有明確標記，須有專用的儀器設備，不同工作區(qū)域內的設備實驗室清潔時應按樣品制備區(qū)、反應體系配2℃~8℃冰箱；2℃~8℃冰箱；9樣品的保存，核酸提取、貯存及其加入至擴增反應管在樣品為避免樣品間的交叉污染，加入待測核酸后，必須立即蓋次工作后都要清潔，實