醫(yī)用級蛋黃卵磷脂(供注射用)藥用輔料級別

第第頁醫(yī)用級蛋黃卵磷脂（供注射用）藥用輔料級別本品系以雞蛋黃或蛋黃粉為原材料子，經(jīng)適當(dāng)溶劑提取精制而得的磷脂混合物。按無水物計(jì)算，含氮（N）應(yīng)為1.75%～1.95%，磷（P）應(yīng)為3.5%～4.1%，磷脂酰膽堿不得少于68%，磷脂酰乙醇胺不得過20%，磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺的總量不得少于80%?！拘誀睢勘酒窞槿榘咨虻S色粉末狀或蠟狀固體；具有細(xì)小的特臭。本品在乙醇、石油醚（沸程40～60℃）中溶解，在丙酮和水中將近不溶。酸值本品的酸值（通則0713）應(yīng)不大于20.0.碘值本品的碘值（通則0713）應(yīng)為60～73.過氧化值取本品2.0g，精密稱定，置250ml碘瓶中，依法測定（通則0713），過氧化值應(yīng)不大于3.0.皂化值本品的皂化值（通則0713）應(yīng)為195～212.【判別】（1）取本品0.1g，置坩堝中，加碳酸鈉—碳酸鉀（2:1）3g，混勻，微火加熱，產(chǎn)生的氣體能使?jié)櫇竦募t色石蕊試紙變藍(lán)。（2）取判別（1）項(xiàng)下遺留的殘?jiān)s100mg，緩緩灼燒至炭化物全部消失，放冷，加水30ml，微熱使殘?jiān)芙?，濾過，濾液置試管中，滴加硫酸至無氣泡產(chǎn)生，再加硫酸4滴，加鉬酸鉀少許，加熱，應(yīng)呈黃綠色。（3）在磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保管時(shí)間應(yīng)與對照品溶液主峰的保管時(shí)間全都?！緳z查】游離脂肪酸對照品溶液的制備稱取棕櫚酸0.512g，置50ml量瓶中，加正庚烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置50ml量瓶中，用正庚烷稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取本品約1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加異丙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法精密量取供試品溶液和對照品溶液各1ml，分別置20ml具塞試管中，各加異丙醇—正庚烷—0.5mol/L硫酸溶液（40∶10∶1）混合溶液5.0ml，振搖1分鐘，放置10分鐘。供試品溶液管精密加正庚烷3ml和水3ml，對照品溶液管精密加正庚烷2ml和水4ml，密塞，上下翻轉(zhuǎn)10次，靜置至少15分鐘，使分層。分別精密量取上層液3ml，置10ml離心管中，加尼羅藍(lán)指示液（取尼羅藍(lán)0.04g，加水200ml，使溶解后，加正庚烷100ml振搖，棄去上層正庚烷。反復(fù)操作4次。取下層水溶液20ml，加無水乙醇180ml，混勻。本液置棕色瓶中，室溫下可存放1個(gè)月）lml，在通氮條件下，用氫氧化鈉滴定液（0.01mol/L）滴定至溶液顯淡紫色。供試品溶液消耗氫氧化鈉滴定液（0.01mol/L）的毫升數(shù)不得大于對照品溶液消耗氫氧化鈉滴定液（0.01mol/L）的毫升數(shù)（1%）。甘油三酸酯、膽固醇與棕櫚酸取本品適量，加正己烷—異丙醇—水（40∶50∶8）混合溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中含20mg的溶液，作為供試品溶液；另取甘油三酸酯、膽固醇與棕櫚酸對照品各適量，精密稱定，用上述混合溶液分別溶解并定量稀釋制成每1ml中各含0.6mg、0.4mg、0.2mg的甘油三酸酯、膽固醇、棕櫚酸的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、甘油三酸酯對照品溶液與膽固醇對照品溶液各5μl，棕櫚酸對照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷—冰醋酸（70∶30∶1）為打開劑，置內(nèi)壁貼有打開劑濕潤濾紙的層析缸中，打開后，取出，晾干，噴以10%（W/V）硫酸銅稀磷酸（8%，W/V）溶液，熱風(fēng)吹干，在170℃干燥10分鐘，趕忙檢視。供試品溶液如顯與對照品溶液相應(yīng)位置的雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對照品溶液所顯的主斑點(diǎn)比較，不得更深（即甘油三酸酯不得過3%，膽固醇不得過2%，棕櫚酸不得過0.2%）。有關(guān)物質(zhì)取本品約125mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加三LV甲烷—甲醇（2∶1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取溶血磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、溶血磷脂酰膽堿與磷脂酰肌醇對照品各適量，精密稱定，加三LV甲烷—甲醇（2∶1）溶解并定量稀釋制成每1ml約含溶血磷脂酰乙醇胺10μg、20μg、40μg、60μg、100μg，約含鞘磷脂50μg、100μg、200μg、300μg、400μg，約含溶血磷脂酰膽堿50μg、100μg、200μg、300μg、400μg，含磷脂酰肌醇10μg、20μg、60μg、100μg、200μg的溶液，作為對照品溶液。照磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺含量測定項(xiàng)下的色譜條件，精密量取對照品溶液20μl注入液相色譜儀，以對照品溶液濃度的對數(shù)值與相應(yīng)峰面積的對數(shù)值計(jì)算回歸方程。精密量取供試品溶液20μl注入液相色譜儀，用回歸方程計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的含量。含磷脂酰肌醇（PI）不得過5.0%，溶血磷脂酰乙醇胺（LPE）不得過1%，鞘磷脂（SPM）不得過3.0%，溶血磷脂酰膽堿（LPC）不得過3.5%，溶血磷脂酰乙醇胺（LPE）和溶血磷脂酰膽堿（LPC）總量不得過4.0%，上述有關(guān)物質(zhì)總量不得過8.0%。殘留溶劑取本品0.2g，置20ml頂空瓶中，加水2ml，密封，作為供試品溶液；另取乙醇、丙酮、石油醚與正己烷各適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中分別約含200μg、200μg、200μg、50μg、27μg的溶液，作為對照品溶液。照殘留溶劑測定法（通則0861）試驗(yàn)，用聚苯乙烯—二乙烯基苯為固定液（或極性相近）的毛細(xì)管柱（HP—PLOT/Q，30m×0.53mm，40/m）為色譜柱；起始溫度為160℃，維持8分鐘，以每分鐘5℃的速率升溫至190℃，維持6分鐘；氫火焰離子化檢測器（FID）；進(jìn)樣口溫度為250℃，檢測器溫度260℃。頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時(shí)間為45分鐘。各色譜峰的分別度應(yīng)符合要求。取供試品溶液與對照品溶液，分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，含乙醇、丙酮均不得過0.2%，石油醚不得過0.05%，正己烷不得過0.02%，總殘留溶劑不得過0.5%。水分取本品，照水分測定法（通則0832第一法1）測定，含水分不得過3%。蛋白質(zhì)取本品1.0g，加正己烷10ml，微溫使溶解，溶液應(yīng)澄明；如有不溶物，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心5分鐘，棄去上清液，殘留物加正己烷5ml，攪拌使溶解，同法操作2次，殘留物經(jīng)減壓干燥除掉正己烷后，加水lml，振搖使溶解，加縮二脲試液（取硫酸銅1.5g和酒石酸鉀鈉6.0g，加水500ml使溶解，邊攪拌邊加入10%氫氧化鈉溶液300ml，用水稀釋至1000ml，混勻）4ml，放置30分鐘，溶液應(yīng)不呈藍(lán)紫色或紅紫色。重金屬取本品2.0g，緩緩灼燒炭化，加硝酸2ml，小心加熱至干，加硫酸2ml，加熱至炭化，在500～600℃灼燒至灰化，放冷，依法檢查（通則0821第二法），含重金屬不得過百萬分之五、砷鹽取本品1.0g，置凱氏燒瓶中，加硫酸5ml，用小火消化使炭化（必需時(shí)可添加硫酸，總量不超出10ml），小心逐滴加入濃過氧化氫溶液，俟反應(yīng)停止，連續(xù)加熱，并滴加濃過氧化氫溶液至溶液無色，冷卻，加水10ml，蒸發(fā)至濃煙發(fā)生使除盡過氧化氫，加鹽酸5ml與水適量，依法檢查（通則0822第一法），應(yīng)符合規(guī)定（0.0002%）。細(xì)菌內(nèi)毒素取本品，以無水乙醇充分溶解，進(jìn)一步使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋至試驗(yàn)所需濃度（該溶液中乙醇濃度應(yīng)小于20%），依法檢查（通則1143），每1g中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于2.0EU。微生物限度取本品，依法檢查（通則1105與通則1106），每1g供試品中需氧菌總數(shù)不得過102cfu，霉菌和酵母菌總數(shù)不得過102cfu，不得檢出大腸埃希菌；每10g供試品中不得檢出沙門菌。【含量測定】氮取本品約0.1g，依法測定（通則0704）計(jì)算，即得。磷對照品溶液的制備取105℃干燥至恒重的磷酸二氫鉀約0.13g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取10ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，每1ml中含磷（P）約為30μg。供試品溶液的制備取本品約0.1g，精密稱定，置坩堝中，加三LV甲烷2ml溶解，加氧化鋅2g，蒸去三LV甲烷，緩緩熾灼使樣品炭化，然后在600℃熾灼1小時(shí)，放冷，加鹽酸溶液（1→2）10ml，煮沸5分鐘使殘?jiān)芙?，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。測定法精密量取對照品溶液0ml、2ml、4ml、6ml、10ml，分別置25ml量瓶中，依次分別加水10ml，鉬酸銨硫酸溶液（取鉬酸銨5g，加0.5mol/L硫酸溶液100ml）1ml，對苯二酚硫酸溶液（取對苯二酚0.5g，加0.25mol/L硫酸溶液100ml，臨用前配制）lml和50%醋酸鈉溶液3ml，并用水稀釋至刻度，搖勻，放置5分鐘。照紫外—可見分光光度法（通則0401），以第一瓶為空白，在720nm的波優(yōu)點(diǎn)測定吸光度，以測得吸光度與其對應(yīng)的濃度計(jì)算回歸方程。另精密量取供試品溶液4ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自“依次分別加水10ml”起同法操作，測得吸光度，由回歸方程計(jì)算含磷（P）量，即得。磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺照高效液相色譜法（通則0512）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用硅膠為填充劑（色譜柱Allt1maSillica，250mmX4.6mm，5μm或效能相當(dāng)?shù)纳V柱）；以甲醇—水—冰醋酸—三乙胺（85∶15∶0.45∶0.05）為流動(dòng)相A，以正己烷—異丙醇—流動(dòng)相A（20∶48∶32）為流動(dòng)相B；按下表進(jìn)行梯度洗脫；柱溫為40℃，用蒸發(fā)光散射檢測器檢測（參考條件：漂移管溫度為72℃；載氣流量為每分鐘2.0L）。取磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰乙醇胺、蛋黃磷脂酰膽堿、鞘磷脂、溶血磷脂酰膽堿對照品各適量，用三LV甲烷—甲醇（2∶1）溶解并稀釋制成每1ml中含上述對照品分別為50μg、100μg、100μg、200μg、200μg、200μg的混合溶液，取20μl注入液相色譜儀，各成分按上述次序依次洗脫，各成分分別度應(yīng)符合要求，理論板數(shù)按蛋黃磷脂酰膽堿峰與磷脂酰乙醇胺峰計(jì)算均不低于1500.測定法取蛋黃磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺對照品各適量，精密稱定，加三LV甲烷—甲醇（2∶1）溶解并定量稀釋制成含蛋黃磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺6個(gè)不同濃度溶液作為對照品溶液，對照品溶液中蛋黃磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺的濃度范圍應(yīng)涵蓋供試品溶液中蛋黃磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺含量的60%～