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文檔簡介

肽類藥品含量測定方法背景:多肽類藥品及其主要優(yōu)勢人體生長和發(fā)育都離不開多肽,多肽是調(diào)整系統(tǒng)功效和細(xì)胞生長基礎(chǔ)。多肽類藥品作為藥品開發(fā)主要方向,它包含各種類型,常見多肽類藥品有以下幾個(gè).多肽類疫苗:多肽類疫苗研制為人類攻克肝炎、艾滋病等疾病帶來了希望。.抗腫瘤多肽類藥品:腫瘤危害人類生存,其產(chǎn)生是多方面原因共同作用結(jié)果,但歸根到底是癌基因表示問題。多肽類抗癌藥品因?yàn)槠淠軌虺蔀槟[瘤基因表示時(shí)調(diào)控因子,因而成為了抗癌藥品研究新希望。.抗病毒類多肽藥品:普通來說,病毒感染細(xì)胞過程包含以下幾個(gè)主要階段:吸附、自我復(fù)制、重新組合、釋放病毒等。??共《径嚯耐ǔW饔糜诓《疚胶筒《緩?fù)制兩個(gè)階段,經(jīng)過與宿主細(xì)胞特異性結(jié)合或者病毒蛋白酶結(jié)合來發(fā)揮作用。多肽藥物的含量測定方法專家講座第1頁一、酸堿滴定法示例:苯酪酞測定測定方法:取本品約0.5g精密稱定,加中性乙醇(對酚酞指示液呈中性)60ml,振搖,溶解后加酚酞指示液數(shù)滴,用氫氧化鈉滴定(0.1mol/L),即可。多肽藥物的含量測定方法專家講座第2頁二、

紫外分度光度法

示例:五肽胃泌素含量測定五肽胃泌素為白色或類白色粉末。本品能促進(jìn)胃酸、胃蛋白酶及內(nèi)因子分泌,其促胃酸分泌作用相當(dāng)于內(nèi)源性胃泌素1/4,作用可連續(xù)10~40分鐘。臨床上主要用于胃酸分泌機(jī)能檢驗(yàn)。多肽藥物的含量測定方法專家講座第3頁方法原理:供試品加0.01mol/L氨溶液定量稀釋,制成供試液,置紫外可見分光光度計(jì),于280nm波優(yōu)點(diǎn)測定吸收度,計(jì)算出其含量。試劑:氨溶液(0.01mol/L)標(biāo)準(zhǔn)品:E1%1cm

為70計(jì)算儀器設(shè)備:紫外可見分光光度計(jì)注:分光光度法應(yīng)以配制供試品同批溶劑為對照,采取1cm石英吸收池。以吸收度最大波長作為測定波長,普通供試品吸收度讀數(shù),以在0.3-0.7之間誤差較小。儀器狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶半寬度,不然測得吸收度偏低。狹縫寬度選擇,應(yīng)以降低狹縫寬度時(shí)供試品吸收度不再增加為準(zhǔn)。因?yàn)槲粘睾腿軇┍旧砜赡苡锌瞻孜眨詼y定供試品吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù),再計(jì)算含量。多肽藥物的含量測定方法專家講座第4頁三、效價(jià)測定法實(shí)例(1):抑肽酶效價(jià)測定抑肽酶(Trasylol,別名:抑胰肽酶、屈來密多)能抑制胰蛋白酶及糜蛋白酶,阻止胰臟中其它活性蛋白酶原激活及胰蛋白酶原本身激活。臨床用于預(yù)防和治療急性胰腺炎、纖維蛋白溶解引發(fā)出血及彌漫性血管內(nèi)凝血。還可用于抗休克治療。在腹腔手術(shù)后,直接注入腹腔可預(yù)防腸粘連。抑肽酶經(jīng)過酶上絲氨酸活性部分,形成抑肽酶-蛋白酶復(fù)合物而到達(dá)抑制作用。然而與不一樣蛋白酶結(jié)合,顯示出不一樣離解常數(shù)。與胰蛋白酶結(jié)合最牢靠.與人體纖溶酶結(jié)合不很牢靠。多肽藥物的含量測定方法專家講座第5頁(1)底物溶液制備(2)胰蛋白酶稀釋溶液制備精密量取胰蛋白酶溶液1ml,用硼砂-氯化鈣緩沖液(pH8.0)稀釋成20ml,室溫放置10min,置于冰浴中。取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽171.3mg,加水溶解并稀釋至25ml。臨用時(shí)配制。胰蛋白酶溶液制備取胰蛋白酶對照品適量,精密稱定,加鹽酸滴定液(0.001mol/L)溶解并制成每1ml中約含0.8單位(每1ml中約含1mg)溶液,臨用時(shí)配制并置于冰浴中。(3)供試品溶液制備取本品適量,精密稱定,加硼砂一氯化鈣緩沖液(pH8.0)溶解并制成每1ml中約含1.67單位(每1ml中約含0.6mg)溶液,精密量取0.5ml與胰蛋白酶溶液2ml,再用硼砂一氯化鈣緩沖液(pH8.0)稀釋成20ml,反應(yīng)10分鐘,置冰浴中(2小時(shí)內(nèi)使用)。多肽藥物的含量測定方法專家講座第6頁(4)測定法取硼砂-氯化鈣緩沖液(pH8.0)9.0ml與底物溶液1.0ml,置25ml燒杯中,于25℃±0.5℃恒溫水浴中放置3~5分鐘,在攪拌下滴加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)調(diào)整pH值為8.0,精密加入供試品溶液(經(jīng)25℃保溫3~5分鐘)1ml,并馬上計(jì)時(shí),用1ml微量滴定管以氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定釋放出酸,使溶液pH值一直保持在7.9~8.1。每隔60秒讀取pH值恰為8.0時(shí)所消耗氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)體積(ml),共6分鐘。另精密量取胰蛋白酶稀釋溶液1ml,按上法操作,作為對照(重復(fù)一次)。以時(shí)間為橫坐標(biāo),消耗氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)為縱坐標(biāo)作圖,應(yīng)為一條直線。供試品和對照兩條直線應(yīng)基本重合,求出每秒鐘消耗氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)體積(ml),按下式計(jì)算。每1mg抑肽酶效價(jià)(單位)式中4000為系數(shù);W為抑肽酶制成每1ml中約含1.67單位時(shí)酶量,mg;n1為對照測定時(shí)每秒鐘消耗氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)體積,ml;n2為供試品溶液每秒鐘消耗氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)體積,ml;2為供試品溶液中所加入胰蛋白酶量為對照測定時(shí)2倍;f為氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)校正因子。多肽藥物的含量測定方法專家講座第7頁效價(jià)單位定義能抑制一個(gè)胰蛋白酶單位[每秒鐘能水解1μmolN-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)為一個(gè)胰蛋白酶單位(microkatal)]活力稱為一個(gè)抑肽酶活力單位(EPU)。每1EPU抑肽酶相當(dāng)于1800KIU。注意事項(xiàng):(1)本試驗(yàn)測定原理:在一定條件下(pH8.0,25℃),胰蛋白酶可使N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯水解為N-苯甲酰-L-精氨酸,使溶液pH下降,當(dāng)加入氫氧化鈉滴定后,使溶液pH又回到8.0,水解繼續(xù)進(jìn)行。(2)當(dāng)胰蛋白酶中加入抑肽酶后,使50%胰蛋白酶活性被抑制,剩下胰蛋白酶繼續(xù)與底物進(jìn)行水解反應(yīng),用氫氧化鈉滴定釋放出酸,使pH一直維持7.9~8.0,在一定時(shí)間內(nèi),依據(jù)依據(jù)樣品消耗氫氧化鈉(0.1mol/L)體積(ml)算出活力單位。多肽藥物的含量測定方法專家講座第8頁實(shí)例(2)桿菌肽效價(jià)測定:

利用桿菌肽能夠抑制微生物生長特征,進(jìn)行

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