《N-芴甲氧羰基-谷氨酸-γ-叔丁酯一水合物》

T/XXXX—XXXX

N-芴甲氧羰基-谷氨酸-γ-叔丁酯一水合物

1范圍

本文件規(guī)定了N-芴甲氧羰基-谷氨酸-γ-叔丁酯一水合物的技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、

包裝、運(yùn)輸、貯存、有效期。

本文件適用于多肽藥物固相合成中使用的N-芴甲氧羰基-谷氨酸-γ-叔丁酯一水合物。

分子式：C24H27NO6·H2O

結(jié)構(gòu)式：

相對(duì)分子量：443.49（按2019年國(guó)際相對(duì)原子質(zhì)量）

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件,

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志

《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件無(wú)術(shù)語(yǔ)和定義。

4技術(shù)要求

應(yīng)符合表1的要求。

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T/SCAS12—2023

表1技術(shù)要求

項(xiàng)目要求

外觀白色至類白色粉末

溶解性1mmol在2mlDMF中溶解后應(yīng)澄清透明

鑒別（IR）供試品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與結(jié)構(gòu)式一致

純度（HPLC）≥99.0%

游離氨基酸(TLC)≤0.1%

異構(gòu)體(Fmoc-D-Glu（OtBu)-OH)（HPLC）≤0.2%

水分（KF)≤5.0%

比旋光度[20/D]-8.5°±2.0°（c=1，甲醇）

含量（滴定）≥98.0%

5試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)所用試劑和水除特殊注明外，均為分析純?cè)噭┖图兓?/p>

5.1外觀

采用目視法測(cè)定。

5.2溶解性

5.2.1儀器

50ml具塞比色管。

5.2.2試劑

DMF。

5.2.3操作方法

稱取本品約4.4g，置于一個(gè)干燥潔凈的50ml具塞比色管中，加DMF20ml，超聲溶解后應(yīng)澄清透

明。

5.3鑒別（IR）

5.3.1儀器

紅外光譜儀、電子天平。

2

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5.3.2測(cè)定方法

取供試品適量，按照紅外光譜儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定，本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與結(jié)構(gòu)式一致。

5.4純度（HPLC）

5.4.1儀器

高效液相色譜儀、電子天平。

5.4.2試劑

乙腈（色譜級(jí)）、甲醇（色譜級(jí)）、三氟醋酸、高純水。

5.4.3色譜條件

5.4.3.1色譜條件應(yīng)符合表2的要求。

表2色譜條件

設(shè)定參數(shù)設(shè)定值

型號(hào)：ZORBAXSB-C18（或等效的色譜柱）

色譜柱

規(guī)格：4.6mm*25cm，5um

A：0.1%三氟醋酸-水（v/v）

流動(dòng)相

B：0.1%三氟醋酸-乙腈（v/v）

洗脫方式梯度

流速1.0ml/min

進(jìn)樣體積20μl

柱溫30℃

檢測(cè)波長(zhǎng)220nm

運(yùn)行時(shí)間35min

稀釋劑甲醇

供試品濃度0.5mg/ml

5.4.3.2梯度洗脫方案應(yīng)符合表3要求。

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T/SCAS12—2023

表3梯度洗脫方案

時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）

04555

300100

30.14555

354555

5.4.3.3保留時(shí)間應(yīng)參考表4。

表4保留時(shí)間

品名保留時(shí)間（min)相對(duì)保留時(shí)間備注

Fmoc-Glu-OH4.0180.38雜質(zhì)

Fmoc-β-Ala-OH5.1470.49雜質(zhì)

芴甲醇6.3650.61雜質(zhì)

Fmoc-β-Ala-Glu(OtBu)-OH7.0660.67雜質(zhì)

Fmoc-Osu8.9440.85雜質(zhì)

Fmoc-Glu-OtBu9.5390.91雜質(zhì)

Fmoc-Glu(OtBu)-OH10.4961.00主峰

Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH13.5761.29雜質(zhì)

Fmoc-Glu(OtBu)-OMe15.5321.48雜質(zhì)

5.4.4試驗(yàn)步驟

5.4.4.1供試品溶液的配制

取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。

5.4.4.2測(cè)定

分別進(jìn)稀釋劑空白和供試品溶液各1針，按照5.4.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

5.4.5定量方法

以峰面積歸一化法計(jì)算純度和雜質(zhì)。

5.5游離氨基酸(TLC)

5.5.1儀器

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硅膠G薄層板、層析缸。

5.5.2試劑

正丁醇、冰醋酸、甲醇、2%茚三酮丙酮溶液。

5.5.3分析步驟

5.5.3.1對(duì)照品溶液的配制

取L-谷氨酸約0.02g，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加適量水溶解后定容至刻度，搖勻，做為

對(duì)照品溶液。濃度：0.2mg/ml。

5.5.3.2供試品溶液的配制

取本品約2.0g，精密稱定，置于10ml容量瓶中，加適量甲醇溶解后定容至刻度，搖勻，做為供試

品溶液。濃度：200mg/ml。

5.5.3.3點(diǎn)板

精密吸取上述2種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用正丁醇：冰醋酸：水(2：1：1）

（v/v/v)為展開劑，展開，晾干。

5.5.3.4顯色

噴以2%茚三酮丙酮溶液，在105℃烘烤加熱至斑點(diǎn)出現(xiàn)，立即檢視。

5.5.3.5結(jié)果判定

對(duì)照品溶液應(yīng)顯一個(gè)清晰的斑點(diǎn)，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)比較，

不得更深。

5.6異構(gòu)體(HPLC)

5.6.1儀器

高效液相色譜儀、電子天平。

5.6.2試劑

乙腈（色譜級(jí)）、甲醇（色譜級(jí)）、三氟醋酸、高純水。

5.6.3色譜條件

5.6.3.1色譜條件應(yīng)符合表5的要求。

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T/SCAS12—2023

表5色譜條件

設(shè)定參數(shù)設(shè)定值

型號(hào)：PhenomenexLux5umCellulose-2

色譜柱

規(guī)格：4.6mm*25cm，5um

流動(dòng)相0.1%TFA-水：乙腈=55：45(v/v)

洗脫方式等度

流速1.0ml/min

進(jìn)樣體積5μl

柱溫30℃

檢測(cè)波長(zhǎng)254nm

運(yùn)行時(shí)間40min

稀釋劑甲醇

供試品濃度0.5mg/ml

5.6.3.2保留時(shí)間應(yīng)參考下列要求：

——Fmoc-L-Glu（OtBu)-OH：19.9min

——Fmoc-D-Glu（OtBu)-OH：20.0min

5.6.4試驗(yàn)步驟

5.6.4.1對(duì)照品溶液的配制

取消旋體（Fmoc-DL-Glu（OtBu)-OH）約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋

劑溶解后定容至刻度，搖勻。

5.6.4.2供試品溶液的配制

取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。

5.6.4.3測(cè)定

取稀釋劑溶液、供試品溶液和對(duì)照品溶液各進(jìn)1針，按照5.6.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

5.6.5定量方法

以峰面積歸一化法計(jì)算異構(gòu)體（Fmoc-D-Glu（OtBu)-OH）的含量。

5.7水分（KF)

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5.7.1儀器

分析天平、自動(dòng)水分測(cè)定儀。

5.7.2試劑

卡爾費(fèi)休氏試劑、無(wú)水甲醇。

5.7.3操作方法

取本品約0.2~0.5g，按照水分測(cè)定儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定。

5.8比旋光度

5.8.1儀器

旋光儀、電子天平。

5.8.2試劑

甲醇。

5.8.3操作方法

稱取本品約1.0g，精密稱定，溫度為20℃，置于100ml的容量瓶中，加適量甲醇溶解后定容至刻

度，搖勻。按照旋光測(cè)定儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定。

5.8.4計(jì)算公式

100α

比旋度[20/D]=---------------

lc

式中:

α——為測(cè)得的旋光度；

l——為測(cè)定管的長(zhǎng)度，dm；

c——為100ml溶液中含有被測(cè)物質(zhì)的重量，g/100ml。

5.9含量（滴定）

5.9.1試劑和溶液

應(yīng)包含下列試劑和溶液：

——中性甲醇：取甲醇500ml，加入2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液

顯淡紅色，保持30s不褪。

——?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mol/L)

——酚酞指示劑

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T/SCAS12—2023

5.9.2操作方法

取本品約0.9g，精密稱定，置于一個(gè)干燥潔凈的150ml錐形瓶中，加入50ml中性甲醇，振搖使供

試品溶解后加2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液顯粉紅色，并保持30s不褪

色；記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。

5.9.3計(jì)算公式

c×V×0.44349

含量%=-------------------------×100

m

式中：

c——為氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；

V——為供試品消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；

0.44349——為1.00ml氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1000mol/L]相當(dāng)于Fmoc-Glu（OtBu)-OH·H2O的質(zhì)量；

m——為供試品的重量，g。

5.9.4允許誤差

取兩次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值為測(cè)定結(jié)果，兩次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果之間的RSD不得大于0.3%。

6檢驗(yàn)規(guī)則

6.1檢驗(yàn)分類

產(chǎn)品的檢驗(yàn)分為出廠檢驗(yàn)和型式檢驗(yàn)。

6.2組批

以相同材料、相同生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批，每批產(chǎn)品不應(yīng)超

過150t。

6.3抽樣

6.3.1固體產(chǎn)品按《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》執(zhí)行。

6.3.2將采樣品置于干燥清潔，取固體樣品1000g,分別裝于2個(gè)潔凈、干燥的容器瓶中，密封并貼上

標(biāo)簽，注明生產(chǎn)廠名稱、產(chǎn)品名稱、批量、取樣日期等，一份檢測(cè)使用，一份用于留樣。

6.4出廠檢驗(yàn)

6.4.1產(chǎn)品應(yīng)經(jīng)本公司質(zhì)檢部門按本標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后方可出廠。

6.4.2出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目為感官要求、溶解性、鑒別、純度、游離氨基酸、異構(gòu)體、水分、比旋光度、含

量（滴定）。

6.5型式檢驗(yàn)

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6.5.1每年進(jìn)行一次型式檢驗(yàn)，有下列情況之一時(shí)，亦須進(jìn)行型式檢驗(yàn)：

——更換主要設(shè)備或主要工藝；

——長(zhǎng)期停產(chǎn)再恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；

——出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)有較大差異時(shí);

——國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督機(jī)構(gòu)進(jìn)行抽查時(shí)。

6.5.2型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為要求中的全部項(xiàng)目。

6.6判定規(guī)則

6.6.1出廠檢驗(yàn)時(shí)，檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。如有不合格項(xiàng)，允許加倍抽樣對(duì)不合格項(xiàng)進(jìn)行復(fù)驗(yàn)，

若仍不合格，則判定產(chǎn)品為不合格，產(chǎn)品不得出廠。

6.6.2型式檢驗(yàn)時(shí)，若有2項(xiàng)不合格，判為不合格；若有1項(xiàng)不合格，允許加倍抽樣進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。復(fù)驗(yàn)

合格，判定為合格；若加倍檢驗(yàn)中仍有一項(xiàng)不合格，則判定該批產(chǎn)品不合格。

7標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存、有效期

7.1標(biāo)志

7.1.1銷售包裝上應(yīng)至少標(biāo)有以下內(nèi)容：

——產(chǎn)品名稱；

——產(chǎn)品批號(hào)；

——商品責(zé)任單位名稱及地址；

——產(chǎn)品凈重；

——產(chǎn)品生產(chǎn)日期和復(fù)檢期；

——執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)號(hào)；

——產(chǎn)品合格標(biāo)識(shí)。

7.1.2包裝箱上的包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志按GB/T191的規(guī)定選擇使用。

7.1.3標(biāo)志應(yīng)清晰、牢固，不應(yīng)因運(yùn)輸條件和自然條件而褪色、變色、脫落。

7.2包裝

產(chǎn)品包裝應(yīng)保證產(chǎn)品不受損傷，應(yīng)防塵、防震，便于運(yùn)輸和貯存。如客戶有特殊要求，按合同有關(guān)

規(guī)定進(jìn)行。

7.3運(yùn)輸

產(chǎn)品運(yùn)輸應(yīng)避免沖擊、擠壓、日曬、雨淋及化學(xué)品的腐蝕。

7.4貯存

產(chǎn)品應(yīng)在-15℃以下的環(huán)境內(nèi)貯存，不得與有毒、有害、有異味、易揮發(fā)、易腐蝕的物品同處貯存。

7.5有效期

產(chǎn)品在符合規(guī)定的條件下，包裝完整未經(jīng)啟封的產(chǎn)品，自生產(chǎn)之日有效期不低于12個(gè)月。

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ICS

T/XXXX

XXXX團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/XXXX—XXXX

N-芴甲氧羰基-谷氨酸-γ-叔丁酯一水合物

Fmoc-Glu(OtBu)-OH·H2O

2023-11-1發(fā)布2023-11-1實(shí)施

XXXX發(fā)布

T/XXXX—XXXX

N-芴甲氧羰基-谷氨酸-γ-叔丁酯一水合物

1范圍

本文件規(guī)定了N-芴甲氧羰基-谷氨酸-γ-叔丁酯一水合物的技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、

包裝、運(yùn)輸、貯存、有效期。

本文件適用于多肽藥物固相合成中使用的N-芴甲氧羰基-谷氨酸-γ-叔丁酯一水合物。

分子式：C24H27NO6·H2O

結(jié)構(gòu)式：

相對(duì)分子量：443.49（按2019年國(guó)際相對(duì)原子質(zhì)量）

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件,

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志

《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件無(wú)術(shù)語(yǔ)和定義。

4技術(shù)要求

應(yīng)符合表1的要求。

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T/SCAS12—2023

表1技術(shù)要求

項(xiàng)目要求

外觀白色至類白色粉末

溶解性1mmol在2mlDMF中溶解后應(yīng)澄清透明

鑒別（IR）供試品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與結(jié)構(gòu)式一致

純度（HPLC）≥99.0%

游離氨基酸(TLC)≤0.1%

異構(gòu)體(Fmoc-D-Glu（OtBu)-OH)（HPLC）≤0.2%

水分（KF)≤5.0%

比旋光度[20/D]-8.5°±2.0°（c=1，甲醇）

含量（滴定）≥98.0%

5試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)所用試劑和水除特殊注明外，均為分析純?cè)噭┖图兓?/p>

5.1外觀

采用目視法測(cè)定。

5.2溶解性

5.2.1儀器

50ml具塞比色管。

5.2.2試劑

DMF。

5.2.3操作方法

稱取本品約4.4g，置于一個(gè)干