臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)主管技師考試輔導(dǎo)《臨床免疫學(xué)和免疫檢驗(yàn)》第十三章 免疫組織化學(xué)技術(shù)講義

第十三章免疫組織化學(xué)技術(shù)

第一節(jié)概述

第二節(jié)免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)

第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)

第四節(jié)親和組織化學(xué)染色

第五節(jié)免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)

第六節(jié)免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用

第一節(jié)概述

免疫組織化學(xué)技術(shù)又稱免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，是指用標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞幽通過(guò)抗原抗體反

應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)免疫檢測(cè)方法。

它把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見(jiàn)性和分子生物學(xué)技術(shù)的敏感性等巧妙地結(jié)合在一起，為疾病

的診斷、鑒別診斷和發(fā)病機(jī)制的研究提供了強(qiáng)有力的手段。

免疫組織化學(xué)（簡(jiǎn)稱免疫組化）技術(shù)中根據(jù)標(biāo)志物的不同，可分為免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)、酶免疫組

織化學(xué)技術(shù)、免疫金（銀）組織化學(xué)技術(shù)、親和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫電子顯微鏡技術(shù)。

免疫組織化學(xué)的基本過(guò)程包括：

①抗原的提取與純化；

②免疫動(dòng)物或細(xì)胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化；

③將標(biāo)志物與抗體結(jié)合形成標(biāo)記抗體；

④標(biāo)本的處理與制備；

⑤抗原抗體免疫學(xué)反應(yīng)以及標(biāo)志物呈色反應(yīng)；

⑥觀察結(jié)果

一、標(biāo)本的處理

（-）標(biāo)本的主要來(lái)源

1.活體組織；

2.各種體液、穿刺液；

3.培養(yǎng)細(xì)胞。

（二）標(biāo)本的固定與保存

1.標(biāo)本固定的目的；

2.固定劑的選擇；

3.制片方法的評(píng)價(jià)；

冷凍和石蠟切片是免疫組化最常用的制片方法。

二、抗原的保存與修復(fù)

1.酶消化法無(wú)花果蛋白酶為輕度消化酶；胰蛋白酶為中度消化酶；胃蛋白酶為強(qiáng)消化酶。

2.鹽酸水解法操作中應(yīng)注意掌握鹽酸濃度、水解溫度及水解時(shí)間，以最大限度暴露抗原而又不破壞抗

原性為目的。

3.微波法將石蠟切片置于緩沖液中，憑借微波輻射產(chǎn)生的高熱效應(yīng)及高速分子運(yùn)動(dòng)能量解開(kāi)交聯(lián)蛋

白，暴露被掩蓋的抗原決定簇。

4.高壓鍋法利用加熱暴露抗原,經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)單，適用于大批切片的加熱處理。

5.煮沸法也是利用熱效應(yīng)恢復(fù)抗原性。

實(shí)際操作中，不同的方法可能適用于不同類別抗原的修復(fù)，需通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)探索適用的抗原修復(fù)方法及

實(shí)驗(yàn)條件，如溫度、酶濃度等。

三、抗體的處理與保存

（一）抗體的選擇

選擇抗體時(shí)應(yīng)注意選擇具有高度特異性和穩(wěn)定的優(yōu)質(zhì)抗體，根據(jù)需要決定采用單克隆或多克隆抗體。

多克隆抗體廣泛用于石蠟包埋的組織切片，假陰性幾率低，但特異性不如單克隆抗體，有時(shí)會(huì)造成抗體的

交叉反應(yīng)。單克隆抗體特異性強(qiáng)，但敏感性不夠高。

（二）抗體的稀釋

抗原抗體反應(yīng)要求有正確的比例，過(guò)量或不足均不能達(dá)到預(yù)期結(jié)果。實(shí)際操作中需進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索

抗體的最佳稀釋度，以便達(dá)到最小背景染色下的最強(qiáng)特異性染色。

（三）抗體的保存

抗體是一種具有生物活性的蛋白質(zhì)，在保存抗體時(shí)，要特別注意保持抗體的生物活性，防止抗體蛋白

質(zhì)變性，否則會(huì)降低抗體效價(jià)，甚至失效。

四、免疫組化的結(jié)果判斷

（-）對(duì)照的設(shè)立

設(shè)立對(duì)照的目的在于證明和肯定陽(yáng)性結(jié)果的特異性，主要針對(duì)第一抗體進(jìn)行，常用的對(duì)照有陽(yáng)性對(duì)照

和陰性對(duì)照。

（二）陽(yáng)性結(jié)果

陽(yáng)性細(xì)胞的顯色分布有三種類型：①細(xì)胞質(zhì)；②細(xì)胞核；③細(xì)胞膜表面。

（三）陰性結(jié)果及抗原不表達(dá)

陰性結(jié)果不能簡(jiǎn)單地認(rèn)為具有否定意義，因?yàn)殛?yáng)性表達(dá)有強(qiáng)弱、多少之分，哪怕只有少數(shù)細(xì)胞陽(yáng)性（只

要是在抗原所在部位）也應(yīng)視為陽(yáng)性表達(dá)。

（四）特異性和非特異性顯色的鑒別

1.特異性反應(yīng)常分布于特定抗原部位，如細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核和細(xì)胞表面，具有結(jié)構(gòu)性。非特異性反應(yīng)

無(wú)一定的分布規(guī)律，常為切片邊緣、刀痕或皺褶部位，壞死或擠壓的細(xì)胞區(qū)域，常成片均勻著色。

2.非特異性反應(yīng)由于細(xì)胞內(nèi)抗原含量不同，特異性反應(yīng)的顯色強(qiáng)度不一。如果細(xì)胞之間顯色強(qiáng)度相

同或者細(xì)胞和周圍結(jié)締組織無(wú)明顯區(qū)別的著色，常提示為非特異性反應(yīng)。

3.其他在過(guò)大的組織塊，中心固定不良也會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，有時(shí)可見(jiàn)非特異性顯色和特異性顯

色同時(shí)存在，過(guò)強(qiáng)的非特異性顯色背景可影響結(jié)果判斷。

（五）免疫組化結(jié)果與HE切片結(jié)果

五、質(zhì)量控制

試劑和操作步驟的質(zhì)量控制是取得滿意的免疫組化染色結(jié)果的必要條件。

第二節(jié)免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)

免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)是采用熒光素標(biāo)記的已知抗體（或抗原）作為探針，檢測(cè)待測(cè)組織、細(xì)胞標(biāo)本

中的靶抗原（或抗體），形成的抗原抗體復(fù)合物上帶有熒光素，在熒光顯微鏡下，可以分辨出抗原（或抗

體）的所在位置及其性質(zhì)，并可利用熒光定量技術(shù)計(jì)算其含量，以達(dá)到對(duì)抗原（或抗體）物質(zhì)定位、定性

和定量測(cè)定的目的。

一、組織處理

（-）標(biāo)本的類型

1.涂片和印片血液、細(xì)菌培養(yǎng)物、腦脊液、體腔滲出液和細(xì)胞懸液等均可簡(jiǎn)單地涂抹在玻片上，干

燥固定后就可用于熒光抗體染色。腦脊液、臟器（肝、脾、淋巴結(jié)等）、細(xì)菌菌落或尸體病變組織可把新

鮮切面壓印于玻片上做成印片，經(jīng)固定后再染色。

2.組織切片這是組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)最常用的顯微鏡標(biāo)本片。主要有以下兩種：①冷凍切片：為了使抗

原最大量地保存，首選的制片方法是冷凍切片，其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，組織的抗原性保存好，自發(fā)熒光較少，

特異熒光強(qiáng)，同時(shí)適用于不穩(wěn)定的抗原，缺點(diǎn)是組織結(jié)構(gòu)欠清晰；②石蠟切片：是研究形態(tài)學(xué)的主要制片

方法，它不但是觀察組織結(jié)構(gòu)的理想方法，而且可進(jìn)行回顧性研究。其優(yōu)點(diǎn)是組織細(xì)胞的精細(xì)結(jié)構(gòu)顯現(xiàn)清

楚，但對(duì)抗原的保存量不如冷凍切片，并有組織自發(fā)熒光和非特異性熒光，需加酶消化處理。

3.細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)本比如用Hep-2細(xì)胞或HeLa細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞在玻片上形成單層，固定后用作抗核抗

體等檢測(cè)的抗原片。還可使細(xì)胞單層生長(zhǎng)在玻片上，再用病毒或患者標(biāo)本感染，然后固定，用熒光抗體染

色法檢測(cè)病毒。

4.活細(xì)胞染色檢查淋巴細(xì)胞表面抗原以及免疫球蛋白受體、癌細(xì)胞表面抗原、血清中抗癌細(xì)胞抗體

等，均可用活細(xì)胞熒光抗體染色法。當(dāng)同時(shí)觀察細(xì)胞表面兩種抗原的分布和相互關(guān)系時(shí)，可用雙標(biāo)記法進(jìn)

行染色。

（二）標(biāo)本的保存

標(biāo)本在固定干燥后，最好立即進(jìn)行熒光抗體染色及鏡檢。如必須保存時(shí)，則應(yīng)保持干燥，置以下保

存。一般細(xì)菌涂片或器官組織切片經(jīng)固定后可保存1個(gè)月以上。但病毒和某些組織抗原標(biāo)本抗原性喪失很

快，數(shù)天后就失去其抗原性，需在一20C以下保存。

第三節(jié)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)

酶免疫組化技術(shù)是在一定條件下，應(yīng)用酶標(biāo)抗體（抗原）與組織或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原（抗體）發(fā)生反

應(yīng)，催化底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，通過(guò)顯微鏡識(shí)別標(biāo)本中抗原（抗體）的分布位置和性質(zhì)，也可通過(guò)圖像分析

技術(shù)達(dá)到定量的目的。

一、組織處理

（一）標(biāo)本的類型

1.涂片和印片

2.組織切片

3.細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)本

與熒光免疫技術(shù)相比，酶免疫組織化學(xué)技術(shù)具有染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，可用普通光鏡觀察結(jié)果，可觀

察組織細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)等優(yōu)點(diǎn)，尤其是非標(biāo)記抗體酶免疫組化法的敏感性更優(yōu)于熒光免疫技術(shù)。

酶免疫組化技術(shù)可分為酶標(biāo)記抗體免疫組化技術(shù)和非標(biāo)記抗體酶免疫組化技術(shù)兩種類型。

二、酶標(biāo)記抗體免疫組化染色

借助交聯(lián)劑共價(jià)鍵將酶直接連接在抗體上，酶標(biāo)抗體與靶抗原反應(yīng)后，通過(guò)酶對(duì)底物的特異性催化作

用，生成不溶性有色產(chǎn)物，沉淀在靶抗原位置，達(dá)到對(duì)抗原定性、定量、定位檢測(cè)的目的.

（-）直接法

將酶直接標(biāo)記在特異性抗體上，與組織細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原進(jìn)行特異性反應(yīng)，形成抗原-抗體-醐復(fù)合物,

最后用酶底物顯色。直接法的優(yōu)點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)便及特異性強(qiáng)，缺點(diǎn)是敏感性低，制備的抗體種類有限。

（二）間接法

將酶標(biāo)記在第二抗體上，先將第一抗體（特異性抗體）與相應(yīng)的組織抗原結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物,

再用第二抗體（酶標(biāo)記的抗體）與復(fù)合物中的特異性抗體結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，最后用

底物顯色劑顯色。間接法的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)敏感性高，制備一種酶標(biāo)二抗可用于檢測(cè)多種抗原或抗體。

三、非標(biāo)記抗體免疫酶組化染色

（一）酶橋法

抗酶抗體作為第三抗體，通過(guò)橋抗體（第二抗體），將特異性識(shí)別組織抗原的第一抗體與第三抗體連

接起來(lái)，形成酶聯(lián)的抗原-抗體復(fù)合物，加底物顯色。

（二）PAP法

PAP法是在酶橋法基礎(chǔ)上的改良。PAP法首先將酶橋法的第三抗體（抗酶抗體）與酶組成可溶性復(fù)合物

（PAP復(fù)合物）?該復(fù)合物由2個(gè)抗酶抗體和3個(gè)過(guò)氧化物酶分子組成，呈五角形結(jié)構(gòu)，非常穩(wěn)定。通過(guò)橋

抗體（第二抗體），將特異性識(shí)別組織抗原的第一抗體與PAP復(fù)合物的抗酶抗體連接起來(lái)，此時(shí)要求特異

性第一抗體與第三抗體的動(dòng)物種屬相同。

（三）雙橋PAP法

在PAP法中通過(guò)兩次連接橋抗體和PAP復(fù)合物而建立起來(lái)的，通過(guò)雙橋可結(jié)合更多的PAP復(fù)合物于抗

原分子上，以增強(qiáng)敏感性。這種放大方式重復(fù)使用橋抗體，使橋抗體與PAP復(fù)合物中抗酶抗體的未充分飽

和Fc段結(jié)合，或橋抗體與特異性第一抗體尚未飽和的Fc段結(jié)合。如此對(duì)抗原有明顯放大作用，對(duì)于組織

細(xì)胞微量抗原的檢測(cè)有實(shí)用價(jià)值。

（四）堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶法（APAAP法）

辣根過(guò)氧化物酶（HRP）是免疫組化的首選用酶，但有些組織細(xì)胞含內(nèi)源性過(guò)氧化物酶限制了HRP的廣

泛應(yīng)用，盡管用甲醇過(guò)氧化氫進(jìn)行處理可以抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，但同時(shí)也會(huì)影響抗原的顯示。APAAP

法就是用堿性磷酸酶代替HRP建立的堿性磷酸酶（AP）-抗堿性磷酸酶（AAP）法，即簡(jiǎn)稱APAAP。

四、酶免疫組化染色中常用的酶及顯色底物

醵免疫組化技術(shù)中最常用的酶是辣根過(guò)氧化物酶，常用的供氫體有二氨基聯(lián)苯胺（DAB）,反應(yīng)產(chǎn)物呈

棕色；氨基乙基卡巴理（AEC）,反應(yīng)產(chǎn)物呈橘紅色；4-氯-1-蔡酚，反應(yīng)產(chǎn)物為灰藍(lán)色。

堿性磷酸酶為磷酸酯的水解酶，可通過(guò)兩種反應(yīng)顯色。

其他標(biāo)記酶還有葡萄糖氧化酶（GO）,B-半乳糖酶等，前者底物為葡萄糖，配以NBT和PMS,呈藍(lán)色

沉淀。

第四節(jié)親和組織化學(xué)染色

親和組織化學(xué)是利用兩種物質(zhì)之間的高度親和力而建立的方法。

一、生物素-親和素法

（-）親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物技術(shù)

按一定比例將親和素與酶標(biāo)生物素結(jié)合，形成可溶性親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）。當(dāng)其

與檢測(cè)反應(yīng)體系中的生物素化抗體（直接法）或生物素化第二抗體（間接法）相遇時(shí)，ABC中未飽和的親和

素結(jié)合部位即可與抗體上的生物素結(jié)合，使抗原抗體反應(yīng)體系與ABC標(biāo)記體系連成一體進(jìn)行檢測(cè)。

ABC法的優(yōu)點(diǎn)：敏感性高。生物素與親和素的結(jié)合十分牢固，并且1個(gè)分子親和素有4個(gè)生物素結(jié)合

位點(diǎn)，可以分別和生物素化的抗體和酶結(jié)合，1個(gè)過(guò)氧化物酶或免疫球蛋白分子又可結(jié)合多個(gè)生物素分子，

從而形成網(wǎng)絡(luò)狀復(fù)合物。此外，ABC法尚具有親和力強(qiáng)、特異性高、第一抗體和第二抗體工作濃度低、操作

時(shí)間短、可以多重標(biāo)記等特點(diǎn)。

（二）橋聯(lián)親和素-生物素技術(shù)（BRAB技術(shù)）

是以游離的親和素作為橋聯(lián)劑，利用親和素的多價(jià)性，將檢測(cè)反應(yīng)體系中抗原、生物素化抗體復(fù)合物

與標(biāo)記生物素（如酶標(biāo)生物素）聯(lián)結(jié)起來(lái)，達(dá)到檢測(cè)反應(yīng)分子的目的。

（三）標(biāo)記親和素-生物素技術(shù)（LAB技術(shù)）

LAB法是以標(biāo)記親和素直接與免疫復(fù)合物中的生物素化抗體連接進(jìn)行檢測(cè)。該法具有相當(dāng)高的靈敏度，

由于省略了加標(biāo)記生物素步驟，操作較BRAB法簡(jiǎn)便。間接LAB法采用的是生物素化的第二抗體，可以進(jìn)

一步提高檢測(cè)靈敏度。

二、葡萄球菌A蛋白法

葡萄球菌A蛋白技術(shù)是根據(jù)SPA能與多種動(dòng)物IgG的Fc段結(jié)合的原理，用SPA標(biāo)志物（酶、熒光素、

放射性物質(zhì)等）顯示抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。SPA常用HRP標(biāo)記，可應(yīng)用于間接法。SPA法的

染色程序基本同酶標(biāo)抗體法，僅第二抗體改用SPA-HRPo

三、凝集素法

凝集素可采用直接法和間接法進(jìn)行細(xì)胞化學(xué)染色。①直接法：將標(biāo)志物直接結(jié)合在凝集素上，使其與

組織細(xì)胞相應(yīng)的糖蛋白或糖脂相結(jié)合；②間接法：先將凝集素與組織細(xì)胞膜糖基結(jié)合，然后再用標(biāo)記的抗

凝集素抗體（即用凝集素免疫動(dòng)物制備抗凝集素抗體）與結(jié)合在細(xì)胞上的凝集素反應(yīng)。

四、鏈霉親和素-生物素法

鏈霉親和素（SA）是從鏈霉菌培養(yǎng)物提取的一種純蛋白，不含糖基，有4個(gè)生物素結(jié)合位點(diǎn)，并且具

有高度的親和力，其功能類似親和素。利用生物素結(jié)合的第二抗體與酶標(biāo)記的鏈霉親和素蛋白就構(gòu)成了酶

標(biāo)鏈霉親和素-生物素方法（LSAB）o

1.敏感性高

2.低背景著色

3.第一抗體工作濃度低

4.操作簡(jiǎn)便

第五節(jié)免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)

一、免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)的原理

免疫電子顯微鏡（IEM）技術(shù)是利用高電子密度的顆粒性標(biāo)志物（如膠體金、鐵蛋白等）標(biāo)記抗體，或

用經(jīng)免疫組織/細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)能產(chǎn)生高電子密度產(chǎn)物者如辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體，在電子顯微鏡下對(duì)抗

原抗體反應(yīng)中的高電子密度標(biāo)記的抗原（抗體）進(jìn)行亞細(xì)胞水平定位的技術(shù)。

IEM較之免疫組織化學(xué)在光鏡下的定位更為精確，可定位至細(xì)胞膜、細(xì)胞器，在探索病因、發(fā)病機(jī)制、

組織發(fā)生等方面有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。

二、免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)標(biāo)本制備的要求

在免疫染色方面，又分為包埋前染色、包埋后染色和超薄切片免疫染色三種。

1.包埋前染色優(yōu)點(diǎn)是切片染色前不經(jīng)過(guò)鍬酸固定、脫水及樹(shù)脂包埋等過(guò)程，抗原未被破壞，易于獲得

良好的免疫反應(yīng)；可在免疫反應(yīng)陽(yáng)性部位定位做超薄切片，提高電鏡下的檢出率。特別適用于含抗原量較

少的組織。

2.包埋后染色優(yōu)點(diǎn)是超微結(jié)構(gòu)保存較好，方法簡(jiǎn)便，陽(yáng)性結(jié)構(gòu)有高度的可重復(fù)性，還能在同一張切片

上進(jìn)行多重免疫染色。但抗原活性在電鏡生物樣品處理過(guò)程中可能減弱，甚至喪失或者抗原性質(zhì)發(fā)生改變。

3.超薄切片免疫染色是將組織置于2.3mol/L蔗糖液中，以液氮速凍，在冷凍超薄切片機(jī)上切片，切

片厚度可略厚于常規(guī)樹(shù)脂切片。冷凍超薄切片由于不需經(jīng)固定、脫水、包埋等步驟，直接進(jìn)行免疫染色，

所以抗原性保存較好，兼有包埋前和包埋后染色的優(yōu)點(diǎn).

三、常用的免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)

（一）免疫膠體金染色法

免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體檢測(cè)的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。

不同的膠體金水溶膠因粒子大小不同，顏色亦不同。顆粒在5?20nm之間，吸收波長(zhǎng)為520nm時(shí)，呈

葡萄酒紅色；顆粒在20?40nm之間，吸收波長(zhǎng)為530nm時(shí)，呈深紅色：顆粒為60nm,吸收波長(zhǎng)為600nm時(shí)，

呈藍(lán)紫色；若離心去掉較大的金顆粒后，溶膠呈紅色。

膠體金在電鏡的應(yīng)用中，既可用于透射電鏡（TEM）,又可用于掃描電鏡（SEM）,其最大的優(yōu)點(diǎn)就是

可以通過(guò)應(yīng)用不同大小的顆?；蚪Y(jié)合酶標(biāo)進(jìn)行雙重或多重標(biāo)記。

1.在TEM中，根據(jù)染色步驟，可將膠體金標(biāo)記方法分為直接法和間接法；根據(jù)標(biāo)記與包埋前后的關(guān)系,

可分為包埋前標(biāo)記法和包埋后標(biāo)記法。

2.在SEM中，由于膠體金顆粒有很強(qiáng)的發(fā)射二次電子的能力，用作標(biāo)志物尤為合適。到目前為止，膠

體金SEM標(biāo)記技術(shù)，主要應(yīng)用于細(xì)胞表面成分的標(biāo)記，它是研究細(xì)胞表面成分的理想方法。

在電鏡水平，膠體金技術(shù)還可與其他技術(shù)結(jié)合，更充分地展示了它廣泛的應(yīng)用范圍。如膠體金技術(shù)與

冷凍蝕刻技術(shù)結(jié)合，可對(duì)細(xì)胞膜不同膜蛋白顆?；蚣?xì)胞膜表面的其他成分進(jìn)行精細(xì)定位；與熒光技術(shù)結(jié)合,

可將熒光素和膠體金同時(shí)結(jié)合于某種生物大分子，制成探針，同時(shí)進(jìn)行熒光顯微鏡和電鏡定位，使定位方

便、準(zhǔn)確，提高了工作效率：與分子雜交技術(shù)相結(jié)合，產(chǎn)生了電鏡原位雜交技術(shù)，在超微結(jié)構(gòu)水平上精確

定位基因位點(diǎn)，為深入研究生物體功能提供了有利的工具。

（-）免疫膠體鐵細(xì)胞