土壤和沉積物 氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定 柱后衍生-高效液相色譜法(HJ 960-2018)

目次

前言.................................................................................................................................................ii

1適用范圍.......................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件...........................................................................................................................1

3方法原理.......................................................................................................................................1

4干擾和消除...................................................................................................................................2

5試劑和材料...................................................................................................................................2

6儀器和設(shè)備...................................................................................................................................3

7樣品...............................................................................................................................................3

8分析步驟.......................................................................................................................................4

9結(jié)果計算與表示...........................................................................................................................5

10精密度和準(zhǔn)確度.........................................................................................................................7

11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制.................................................................................................................7

12廢物處理.....................................................................................................................................7

附錄A（規(guī)范性附錄）方法檢出限和測定下限.........................................................................8

附錄B（資料性附錄）方法精密度和準(zhǔn)確度.............................................................................9

i

前言

為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護(hù)法》，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，保障人體健康，規(guī)范土壤和沉

積物中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定方法，制定本標(biāo)準(zhǔn)。

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定土壤和沉積物中10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的柱后衍生-高效液相色譜

法。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄，附錄B為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。

本標(biāo)準(zhǔn)由環(huán)境監(jiān)測司、科技標(biāo)準(zhǔn)司組織制訂。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江省環(huán)境監(jiān)測中心。

本標(biāo)準(zhǔn)驗證單位：江蘇省環(huán)境監(jiān)測中心、杭州市環(huán)境監(jiān)測中心站、紹興市環(huán)境監(jiān)測中心

站、蘇州市環(huán)境監(jiān)測中心站、浙江環(huán)境監(jiān)測工程有限公司和中檢集團(tuán)理化檢測有限公司。

本標(biāo)準(zhǔn)生態(tài)環(huán)境部2018年7月29日批準(zhǔn)。

本標(biāo)準(zhǔn)自2019年1月1日起實施。

本標(biāo)準(zhǔn)由生態(tài)環(huán)境部解釋。

ii

土壤和沉積物氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定

柱后衍生-高效液相色譜法

警告：實驗中使用的溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液對人體健康有害，溶液配制及樣品前處理過程應(yīng)在

通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；操作時應(yīng)按要求佩戴防護(hù)器具，避免直接接觸皮膚和衣物。

1適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定土壤和沉積物中10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的柱后衍生-高效液相色譜

法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于土壤和沉積物中涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、3-羥基克百威、涕滅威、

殘殺威、克百威、甲萘威、異丙威、甲硫威等10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定。

當(dāng)取樣量為10g，試樣定容體積為1.0ml，進(jìn)樣體積為15μl時，10種氨基甲酸酯類農(nóng)

藥的方法檢出限為1～3μg/kg，測定下限為4～12μg/kg。詳見附錄A。

2規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本適用于本

標(biāo)準(zhǔn)。

GB17378.3海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分：樣品采集、貯存與運(yùn)輸

GB17378.5海洋監(jiān)測規(guī)范第5部分：沉積物分析

HJ494水質(zhì)采樣技術(shù)指導(dǎo)

HJ613土壤干物質(zhì)和水分的測定重量法

HJ783土壤和沉積物有機(jī)物的提取加壓流體萃取法

HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

3方法原理

土壤或沉積物中的氨基甲酸酯類農(nóng)藥經(jīng)有機(jī)溶劑提取、固相萃取柱凈化、濃縮、定容、

用液相色譜柱分離后，在堿性條件下水解生成甲胺（式1），與衍生化試劑反應(yīng)生成具有強(qiáng)

熒光物質(zhì)（式2），用熒光檢測器測定。根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)法定量。

（1）

（2）

1

4干擾和消除

具有相近保留時間的物質(zhì)對測定產(chǎn)生干擾，可通過改變流動相梯度洗脫程序、標(biāo)準(zhǔn)添加

法、定量定性波長吸收比等方法消除干擾。

5試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實驗用水為新制備的不含目

標(biāo)物的純水。

5.1乙腈（CH3CN）：液相色譜級。

5.2甲醇（CH3OH）：液相色譜級。

5.3二氯甲烷（CH2Cl2）：液相色譜級。

5.4氫氧化鈉（NaOH）。

5.5四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）。

5.62-巰基乙醇（HSC2H4OH）或2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽（C4H11NS·HCl）。

5.7鄰苯二甲醛（C8H6O2）。

5.8無水硫酸鈉（Na2SO4）。

馬弗爐中450℃灼燒4h，稍冷卻后置于干燥器中備用。

5.9水解液：氫氧化鈉溶液，c(NaOH)=0.05mol/L。

稱取2.0g氫氧化鈉（5.4），用水溶解并稀釋至1L，經(jīng)濾膜（5.19）過濾。也可直接購

買市售商品。

5.10四硼酸鈉溶液：c(Na2B4O7·10H2O)=0.05mol/L。

稱取19.1g四硼酸鈉（5.5），用水溶解并稀釋至1L，經(jīng)濾膜（5.19）過濾。也可直接

購買市售商品。

5.11衍生化試劑。

稱取0.1g鄰苯二甲醛（5.7），溶于10ml甲醇（5.2）。移取200μl2-巰基乙醇（5.6）或

稱取2.0g2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽（5.6），溶于10ml四硼酸鈉溶液（5.10）。將上述2種

溶液混合后用四硼酸鈉溶液（5.10）稀釋至1L。

5.12甲醇-二氯甲烷混合溶劑：1+2。

用甲醇（5.2）和二氯甲烷（5.3）按1:2體積比混合。

5.13甲醇-二氯甲烷混合溶劑：1+9。

用甲醇（5.2）和二氯甲烷（5.3）按1:9體積比混合。

5.14氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100mg/L。

直接購買市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，按標(biāo)準(zhǔn)溶液證書要求保存。

5.15氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=10mg/L。

取500μl氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.14）于5ml容量瓶中，用甲醇（5.2）定容，

混勻，置于-18℃冰箱，密封、避光保存，保存期為6個月。

5.16固相萃取柱：石墨化炭黑/N-丙基乙二胺復(fù)合填料萃取柱（500mg/6ml）或其它性能

相近的固相萃取柱。

2

5.17硅藻土：0.6～0.9mm（30目～20目）。

5.18石英砂：150～830μm（200目～100目）。

馬弗爐中450℃灼燒4h，稍冷卻后置于潔凈干燥器中備用。

5.19濾膜：0.45μm聚醚砜或其它等效材質(zhì)。

5.20濾膜：0.45μm聚四氟乙烯或其它等效材質(zhì)。

5.21氮?dú)猓杭兌取?9.99%。

6儀器和設(shè)備

6.1高效液相色譜儀。

6.1.1具有熒光檢測器、梯度洗脫功能。

6.1.2具有柱后衍生系統(tǒng)，能自動完成衍生反應(yīng)。

6.1.3色譜柱：填料粒徑為5μm，柱長為25.0cm，內(nèi)徑為4.0mm的C8色譜柱或其它性能

相近的色譜柱。

6.2冷凍干燥儀。

6.3提取裝置：加壓流體萃取儀（配有50ml以下萃取池）、索氏提取裝置、自動索氏提取

儀或其他性能相當(dāng)?shù)奶崛⊙b置。

6.4濃縮裝置：氮吹濃縮儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或其他性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。

6.5分析天平：感量為0.01g。

6.6一般實驗室常用儀器和設(shè)備。

7樣品

7.1樣品采集和保存

按照HJ/T166的相關(guān)要求采集和保存土壤樣品，按照HJ494的相關(guān)要求采集水體沉積

物樣品，按照GB17378.3的相關(guān)要求采集海洋沉積物樣品。樣品采集后，0～4℃密封、避

光保存，7d內(nèi)完成萃取。

7.2樣品的制備

除去樣品中的異物（枝棒、葉片、石子等），將樣品完全混勻。如樣品水分含量較高，

應(yīng)先用冷凍干燥儀（6.2）干燥。稱取兩份約10g（精確至0.01g）的樣品。

土壤樣品一份用于測定干物質(zhì)含量；另一份用于提取。使用加壓流體萃取法提取時，加

入適量硅藻土（5.17），裝入萃取池中。使用索氏提取時，加入適量無水硫酸鈉（5.8），裝入

提取管中。

沉積物樣品一份用于測定含水率；另一份用于提取，提取方法參照土壤樣品。

7.3水分的測定

按照HJ613測定土壤樣品干物質(zhì)含量，按照GB17378.5測定沉積物樣品含水率。

3

7.4試樣的制備

7.4.1提取

7.4.1.1加壓流體萃取

采用甲醇-二氯甲烷混合溶劑（5.12）提取樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥，壓力10.34Mpa，

萃取溫度80oC，加熱時間5min，靜態(tài)萃取時間5min，沖洗量80%，萃取后氮?dú)獯祾?0s，

循環(huán)萃取3次。或按照HJ783進(jìn)行萃取條件的設(shè)置和優(yōu)化。

7.4.1.2索氏提取

將濾筒置于索氏提取器回流管中，在圓底溶劑瓶中加入200ml甲醇-二氯甲烷混合溶劑

（5.12），提取12h，回流速度控制在4～6次/h。提取完畢，取出圓底溶劑瓶，待濃縮。

注：若經(jīng)過驗證也可使用其它等效提取方法。

7.4.2濃縮

用濃縮裝置（6.4）將萃取液（7.4.1）濃縮至近1.0ml，待凈化。

7.4.3凈化

用5.0ml甲醇-二氯甲烷混合溶劑（5.13）以2ml/min的速度活化固相萃取柱（5.16），

在填料即將暴露于空氣之前，將濃縮液（7.4.2）轉(zhuǎn)移至柱頭，在填料即將暴露于空氣之前，

用5.0ml甲醇-二氯甲烷混合溶劑（5.13）洗脫萃取柱，收集洗脫液于刻度管中。

注：使用不同批次萃取柱凈化樣品時，需通過實驗確定洗脫溶劑用量。

7.4.4凈化后濃縮

用氮吹濃縮儀（6.4）將洗脫液（7.4.3）30oC以下濃縮至近干，用甲醇（5.2）定容至1.0

ml，過濾膜（5.20），待測。

處理好的試樣應(yīng)于-18℃以下冰箱冷凍保存，在30d完成分析。

7.5空白試樣的制備

用石英砂（5.18）代替實際樣品，按照與試樣的制備（7.4）相同的步驟制備空白試樣。

8分析步驟

8.1參考測量條件

8.1.1柱后衍生條件

反應(yīng)器溫度：100oC，衍生泵流速：0.3ml/min。

8.1.2色譜條件

流動相：流動相A乙腈（5.1），流動相B水，梯度洗脫程序見表1。流速：0.8ml/min；

4

進(jìn)樣體積：15μl；柱溫：37oC；熒光檢測器：激發(fā)波長330nm，定量發(fā)射波長460nm，定

性發(fā)射波長435nm。

表1梯度洗脫程序

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）

01288

21288

426634

451000

481288

8.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

移取適量的氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.15）至5ml容量瓶，用甲醇（5.2）稀釋

至標(biāo)線，配制至少5個濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為0.05μg/ml、0.50μg/ml、1.00

μg/ml、2.50μg/ml和5.00μg/ml（此為參考濃度）。由低濃度到高濃度依次對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液

進(jìn)樣，按照測量條件（8.1）分析，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中各氨基甲酸酯農(nóng)藥的濃度為橫坐標(biāo)，

以其對應(yīng)的峰面積（或峰高）為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

8.3試樣測定

按照與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立（8.2）相同的步驟進(jìn)行試樣（7.4）的測定。

8.4空白試驗

按照與試樣測定（8.3）相同的步驟進(jìn)行空白試樣（7.5）的測定。

9結(jié)果計算與表示

9.1定性分析

根據(jù)試樣中目標(biāo)物和標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)物的保留時間進(jìn)行定性。必要時還可采用標(biāo)準(zhǔn)添加

法、定量定性波長吸收比等方法輔助定性。

在本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的測量條件（8.1）下，標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1。

5

LU

160

140

8

120

367910

4

100

25

80

1

60

40

20

0

05101520253035min

1-涕滅威亞砜；2-涕滅威砜；3-滅多威；4-3-羥基克百威；5-涕滅威；

6-殘殺威；7-克百威；8-甲萘威；9-異丙威；10-甲硫威。

圖1標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

9.2結(jié)果計算

土壤樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度按照公式（3）進(jìn)行計算：

1iV11000

w1i（3）

m1wdm

式中：w1i—土壤樣品中第i種目標(biāo)物濃度，μg/kg；

1i—土壤試樣中第i種目標(biāo)物濃度，mg/L；

V

1—土壤試樣定容體積，ml；

m

1—土壤樣品濕重，g；

w

dm—土壤干物質(zhì)含量，%；

沉積物樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度按照公式（4）進(jìn)行計算：

2iV21000

w（4）

2im(1w)

2H2O

式中：w2i—沉積物樣品中第i種目標(biāo)物濃度，μg/kg；

2i—沉積物試樣中第i種目標(biāo)物濃度，mg/L；

V

2—沉積物試樣定容體積，ml；

m

2—沉積物樣品濕重，g；

w

H2O—沉積物水分含量，%。

9.3結(jié)果表示

測定結(jié)果小數(shù)點(diǎn)位數(shù)與方法檢出限保持一致，最多保留3位有效數(shù)字。

6

10精密度和準(zhǔn)確度

10.1精密度

六家實驗室分別對含氨基甲酸酯類農(nóng)藥加標(biāo)濃度為500μg/kg和5μg/kg的統(tǒng)一沉積物

樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測定，實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍分別為：1.6%～7.6%，2.4%～13%；

實驗室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍分別為：4.1%～12%，4.9%～19%；重復(fù)性限范圍分別為：56～

73μg/kg，1～2μg/kg；再現(xiàn)性限范圍分別為：79～161μg/kg，2～3μg/kg。

精密度結(jié)果參見附錄B。

10.2準(zhǔn)確度

六家實驗室對含氨基甲酸酯類農(nóng)藥均小于方法檢出限的統(tǒng)一沉積物樣品進(jìn)行了加標(biāo)分

析測定，加標(biāo)量分別為500μg/kg和5μg/kg，加標(biāo)回收率范圍分別為：78.7%～106%，82.6%～

141%；加標(biāo)回收率最終值分別為：（86.7±20）%～（102±8.2）%，（93.8±10）%～（111±28）%。

準(zhǔn)確度結(jié)果參見附錄B。

11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

11.1空白試驗

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）至少分析1個實驗室空白，空白測試結(jié)果

應(yīng)低于方法檢出限。

11.2校準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r≥0.995。

選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間濃度點(diǎn)進(jìn)行連續(xù)校準(zhǔn)，每分析20個樣品或每批次（少于20個樣品

/批）進(jìn)行1次連續(xù)校準(zhǔn)，測定結(jié)果相對偏差應(yīng)≤20%，否則需重新建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

11.3平行樣

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）至少分析1個平行樣，平行樣相對偏差≤

30%。

11.4基體加標(biāo)

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）至少分析1個基體加標(biāo)樣，加標(biāo)回收率應(yīng)

在60%～145%之間。

12廢物處理

實驗中產(chǎn)生的廢液和廢物應(yīng)集中收集，并做好相應(yīng)標(biāo)識，委托有資質(zhì)的單位進(jìn)行處理。

7

附錄A

（規(guī)范性附錄）

方法檢出限和測定下限

當(dāng)取樣量為10g，試樣定容體積為1.0ml，進(jìn)樣體積為15μl時，10種氨基甲酸酯類農(nóng)

藥的方法檢出限和測定下限見表A.1。

表A.1方法檢出限和測定下限

檢出限測定下限

序號化合物英文名稱

CASNo.（μg/kg）（μg/kg）

1涕滅威亞砜AldicarbSulfoxide1646-87-328

2涕滅威砜AldicarbSulfone1646-88-428

3滅多威Methomyl16752-77-528

43-羥基克百威3-Hydroxycarbofuran16655-82-628

5涕滅威Aldicarb116-06-328

6殘殺威Propoxur114-26-128

7克百威Carbofuran1563-66-214

8甲萘威Carbaryl63-25-2312

9異丙威Isoprocarb2631-40-528

10甲硫威Mercaptodimethur2032-65-728

8

附錄B

（資料性附錄）

方法精密度和準(zhǔn)確度

采用加壓流體萃取、固相萃取凈化，測定實際加標(biāo)樣品的精密度和準(zhǔn)確度。表B.1給出

方法精密度指標(biāo)，表B.2給出方法準(zhǔn)確度指標(biāo)。

表B.1方法精密度

平均值實驗室內(nèi)相對實驗室間相對重現(xiàn)性限r(nóng)再現(xiàn)性限R

序號化合物

（μg/kg）標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）（μg/kg）（μg/kg）

加標(biāo)濃度：500μg/kg

1涕滅威亞砜5101.7～7.64.17388

2涕滅威砜4523.0～5.47.060104

3滅多威4482.5～6.26.25693

43-羥基克百威4463.2～6.24.56683

5涕滅威4492.0～6.51267161

6殘殺威4422.9～7.58.264117

7克百威4451.6～6.07.757109

8甲萘威4442.9～5.54.75979

9異丙威4332.3～7.61168152

10甲硫威4472.5～6.25.45886

加標(biāo)濃度：5μg/kg

1涕滅威亞砜64.4～121313

2涕滅威砜54.2～8.11012

3滅多威53.6～9.01012

43-羥基克百威54.0～8.51913

5涕滅威52.9～7.21112

6殘殺威52.4～6.39.112

7克百威53.8～6.51112

8甲萘威53.8～9.38.012

9異丙威53.5～6.91713

10甲硫威55.6～134.922

9

表B.2方法準(zhǔn)確度

樣品濃度加標(biāo)回收率范圍

序號化合物S加標(biāo)回收率最終值

P（）P(%)P(%)

（μg/kg）%（）

P2SP%

加標(biāo)濃度：500μg/kg

1涕滅威亞砜<294.1～1061024.1102±8.2

2涕滅威砜<284.9～10190.36.390.3±13

3滅多威<284.3～97.189.55.589.5±11

43-羥基克百威<285.0～93.089.24.089.2±8.0

5涕滅威<279.8～10489.81189.8±22

6殘殺威<280.4～97.788.47.388.4±15

7克百威<182.3～10289.06.989.0±14

8甲萘威<384.6～93.888.74.288.7±8.4

9異丙威<278.7～10586.71086.7±20

10甲硫威<284.8～97.989.54.989.5±9.8

加標(biāo)濃度：5μg/kg

1涕滅威亞砜<299.428

2涕滅威砜<290.9～11910010100±20

3滅多威<290.7～11598.39.198.3±18

43-羥基克百威<288.638

5涕滅威<282.7～10694.81094.8±20

6殘殺威<286.0～11096.68.996.6±18

7克百威<187.4～11898.41198.4±22

8甲萘威<388.2～10998.07.998.0±16

9異丙威<282.6～12898.71798.7±34

10甲硫威<285.0～10093.85.093.8±10

10

中華人民共和國國家環(huán)境保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)

HJ960-2018

土壤和沉積物氨基甲酸酯類農(nóng)藥的

測定柱后衍生-高效液相色譜法

Soilandsediment—Determinationofcarbamatepesticides—

Post-columnderivatization-highperformanceliquidchromatography

（發(fā)布稿）

本電子版為發(fā)布稿。請以中國環(huán)境出版社出版的正式標(biāo)準(zhǔn)文本為準(zhǔn)。

土壤和沉積物氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定

柱后衍生-高效液相色譜法

警告：實驗中使用的溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液對人體健康有害，溶液配制及樣品前處理過程應(yīng)在

通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；操作時應(yīng)按要求佩戴防護(hù)器具，避免直接接觸皮膚和衣物。

1適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定土壤和沉積物中10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的柱后衍生-高效液相色譜

法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于土壤和沉積物中涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、3-羥基克百威、涕滅威、

殘殺威、克百威、甲萘威、異丙威、甲硫威等10種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定。

當(dāng)取樣量為10g，試樣定容體積為1.0ml，進(jìn)樣體積為15μl時，10種氨基甲酸酯類農(nóng)

藥的方法檢出限為1～3μg/kg，測定下限為4～12μg/kg。詳見附錄A。

2規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本適用于本

標(biāo)準(zhǔn)。

GB17378.3海洋監(jiān)測規(guī)范第3部分：樣品采集、貯存與運(yùn)輸

GB17378.5海洋監(jiān)測規(guī)范第5部分：沉積物分析

HJ494水質(zhì)采樣技術(shù)指導(dǎo)

HJ613土壤干物質(zhì)和水分的測定重量法

HJ783土壤和沉積物有機(jī)物的提取加壓流體萃取法

HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

3方法原理

土壤或沉積物中的氨基甲酸酯類農(nóng)藥經(jīng)有機(jī)溶劑提取、固相萃取柱凈化、濃縮、定容、

用液相色譜柱分離后，在堿性條件下水解生成甲胺（式1），與衍生化試劑反應(yīng)生成具有強(qiáng)

熒光物質(zhì)（式2），用熒光檢測器測定。根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)法定量。

（1）

（2）

1

4干擾和消除

具有相近保留時間的物質(zhì)對測定產(chǎn)生干擾，可通過改變流動相梯度洗脫程序、標(biāo)準(zhǔn)添加

法、定量定性波長吸收比等方法消除干擾。

5試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實驗用水為新制備的不含目

標(biāo)物的純水。

5.1乙腈（CH3CN）：液相色譜級。

5.2甲醇（CH3OH）：液相色譜級。

5.3二氯甲烷（CH2Cl2）：液相色譜級。

5.4氫氧化鈉（NaOH）。

5.5四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）。

5.62-巰基乙醇（HSC2H4OH）或2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽（C4H11NS·HCl）。

5.7鄰苯二甲醛（C8H6O2）。

5.8無水硫酸鈉（Na2SO4）。

馬弗爐中450℃灼燒4h，稍冷卻后置于干燥器中備用。

5.9水解液：氫氧化鈉溶液，c(NaOH)=0.05mol/L。

稱取2.0g氫氧化鈉（5.4），用水溶解并稀釋至1L，經(jīng)濾膜（5.19）過濾。也可直接購

買市售商品。

5.10四硼酸鈉溶液：c(Na2B4O7·10H2O)=0.05mol/L。

稱取19.1g四硼酸鈉（5.5），用水溶解并稀釋至1L，經(jīng)濾膜（5.19）過濾。也可直接

購買市售商品。

5.11衍生化試劑。

稱取0.1g鄰苯二甲醛（5.7），溶于10ml甲醇（5.2）。移取200μl2-巰基乙醇（5.6）或

稱取2.0g2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽（5.6），溶于10ml四硼酸鈉溶液（5.10）。將上述2種

溶液混合后用四硼酸鈉溶液（5.10）稀釋至1L。

5.12甲醇-二氯甲烷混合溶劑：1+2。

用甲醇（5.2）和二氯甲烷（5.3）按1:2體積比混合。

5.13甲醇-二氯甲烷混合溶劑：1+9。

用甲醇（5.2）和二氯甲烷（5.3）按1:9體積比混合。

5.14氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100mg/L。

直接購買市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，按標(biāo)準(zhǔn)溶液證書要求保存。

5.15氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=10mg/L。

取500μl氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.14）于5ml容量瓶中，用甲醇（5.2）定容，

混勻，置于-18℃冰箱，密封、避光保存，保存期為6個月。

5.16固相萃取柱：石墨化炭黑/N-丙基乙二胺復(fù)合填料萃取柱（500mg/6ml）或其它性能

相近的固相萃取柱。

2

5.17硅藻土：0.6～0.9mm（30目～20目）。

5.18石英砂：150～830μm（200目～100目）。

馬弗爐中450℃灼燒4h，稍冷卻后置于潔凈干燥器中備用。

5.19濾膜：0.45μm聚醚砜或其它等效材質(zhì)。

5.20濾膜：0.45μm聚四氟乙烯或其它等效材質(zhì)。

5.21氮?dú)猓杭兌取?9.99%。

6儀器和設(shè)備

6.1高效液相色譜儀。

6.1.1具有熒光檢測器、梯度洗脫功能。

6.1.2具有柱后衍生系統(tǒng)，能自動完成衍生反應(yīng)。

6.1.3色譜柱：填料粒徑為5μm，柱長為25.0cm，內(nèi)徑為4.0mm的C8色譜柱或其它性能

相近的色譜柱。

6.2冷凍干燥儀。

6.3提取裝置：加壓流體萃取儀（配有50ml以下萃取池）、索氏提取裝置、自動索氏提取

儀或其他性能相當(dāng)?shù)奶崛⊙b置。

6.4濃縮裝置：氮吹濃縮儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或其他性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。

6.5分析天平：感量為0.01g。

6.6一般實驗室常用儀器和設(shè)備。

7樣品

7.1樣品采集和保存

按照HJ/T166的相關(guān)要求采集和保存土壤樣品，按照HJ494的相關(guān)要求采集水體沉積

物樣品，按照GB17378.3的相關(guān)要求采集海洋沉積物樣品。樣品采集后，0～4℃密封、避

光保存，7d內(nèi)完成萃取。

7.2樣品的制備

除去樣品中的異物（枝棒、葉片、石子等），將樣品完全混勻。如樣品水分含量較高，

應(yīng)先用冷凍干燥儀（6.2）干燥。稱取兩份約10g（精確至0.01g）的樣品。

土壤樣品一份用于測定干物質(zhì)含量；另一份用于提取。使用加壓流體萃取法提取時，加

入適量硅藻土（5.17），裝入萃取池中。使用索氏提取時，加入適量無水硫酸鈉（5.8），裝入

提取管中。

沉積物樣品一份用于測定含水率；另一份用于提取，提取方法參照土壤樣品。

7.3水分的測定

按照HJ613測定土壤樣品干物質(zhì)含量，按照GB17378.5測定沉積物樣品含水率。

3

7.4試樣的制備

7.4.1提取

7.4.1.1加壓流體萃取

采用甲醇-二氯甲烷混合溶劑（5.12）提取樣品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥，壓力10.34Mpa，

萃取溫度80oC，加熱時間5min，靜態(tài)萃取時間5min，沖洗量80%，萃取后氮?dú)獯祾?0s，

循環(huán)萃取3次?；虬凑誋J783進(jìn)行萃取條件的設(shè)置和優(yōu)化。

7.4.1.2索氏提取

將濾筒置于索氏提取器回流管中，在圓底溶劑瓶中加入200ml甲醇-二氯甲烷混合溶劑

（5.12），提取12h，回流速度控制在4～6次/h。提取完畢，取出圓底溶劑瓶，待濃縮。

注：若經(jīng)過驗證也可使用其它等效提取方法。

7.4.2濃縮

用濃縮裝置（6.4）將萃取液（7.4.1）濃縮至近1.0ml，待凈化。

7.4.3凈化

用5.0ml甲醇-二氯甲烷混合溶劑（5.13）以2ml/min的速度活化固相萃取柱（5.16），

在填料即將暴露于空氣之前，將濃縮液（7.4.2）轉(zhuǎn)移至柱頭，在填料即將暴露于空氣之前，

用5.0ml甲醇-二氯甲烷混合溶劑（5.13）洗脫萃取柱，收集洗脫液于刻度管中。

注：使用不同批次萃取柱凈化樣品時，需通過實驗確定洗脫溶劑用量。

7.4.4凈化后濃縮

用氮吹濃縮儀（6.4）將洗脫液（7.4.3）30oC以下濃縮至近干，用甲醇（5.2）定容至1.0

ml，過濾膜（5.20），待測。

處理好的試樣應(yīng)于-18℃以下冰箱冷凍保存，在30d完成分析。

7.5空白試樣的制備

用石英砂（5.18）代替實際樣品，按照與試樣的制備（7.4）相同的步驟制備空白試樣。

8分析步驟

8.1參考測量條件

8.1.1柱后衍生條件

反應(yīng)器溫度：100oC，衍生泵流速：0.3ml/min。

8.1.2色譜條件

流動相：流動相A乙腈（5.1），流動相B水，梯度洗脫程序見表1。流速：0.8ml/min；

4

進(jìn)樣體積：15μl；柱溫：37oC；熒光檢測器：激發(fā)波長330nm，定量發(fā)射波長460nm，定

性發(fā)射波長435nm。

表1梯度洗脫程序

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）

01288

21288

426634

451000

481288

8.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

移取適量的氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.15）至5ml容量瓶，用甲醇（5.2）稀釋

至標(biāo)線，配制至少5個濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為0.05μg/ml、0.50μg/ml、1.00

μg/ml、2.50μg/ml和5.00μg/ml（此為參考濃度）。由低濃度到高濃度依次對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液

進(jìn)樣，按照測量條件（8.1）分析，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中各氨基甲酸酯農(nóng)藥的濃度為橫坐標(biāo)，

以其對應(yīng)的峰面積（或峰高）為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

8.3試樣測定

按照與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立（8.2）相同的步驟進(jìn)行試樣（7.4）的測定。

8.4空白試驗

按照與試樣測定（8.3）相同的步驟進(jìn)行空白試樣（7.5）的測定。

9結(jié)果計算與表示

9.1定性分析

根據(jù)試樣中目標(biāo)物和標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)物的保留時間進(jìn)行定性。必要時還可采用標(biāo)準(zhǔn)添加

法、定量定性波長吸收比等方法輔助定性。

在本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的測量條件（8.1）下，標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖