實(shí)驗(yàn)五.總糖的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)五、總糖和還原糖的測(cè)定費(fèi)林試劑比色法一、實(shí)驗(yàn)意義掌握還原糖和總糖的測(cè)定原理，學(xué)習(xí)用直接滴定法測(cè)定還原糖的方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

將一定量的堿性酒石酸銅甲液和乙液等體積混合時(shí)，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)，生成氫氧化銅沉淀：

2NaOH

+

CuSO4

=

Cu(OH)2↓+

Na2SO4所生成的氫氧化銅沉淀與酒石酸鈉反應(yīng)，生成可溶性的酒石酸鉀鈉銅：

在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，酒石酸鉀鈉銅被還原糖還原，產(chǎn)生紅色氧化亞銅沉淀，還原糖則被氧化和降解，其反應(yīng)如下：

反應(yīng)生成的氧化亞銅沉淀與費(fèi)林試劑中的亞鐵氰化鉀（黃血鹽）反應(yīng)生成可溶性復(fù)鹽，便于觀察滴定終點(diǎn)。

Cu2O

+

K4Fe(CN)6

+

H2O

→K2Cu2Fe(CN)6

+

2KOH

（氧化亞銅）

（淡黃色）

滴定時(shí)以亞甲基藍(lán)為氧化－還原指示劑。因?yàn)閬喖谆{(lán)氧化能力比二價(jià)銅弱，待二價(jià)銅離子全部被還原后，稍過(guò)量的還原糖可使藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無(wú)色的還原型的亞甲基藍(lán)，即達(dá)滴定終點(diǎn)。根據(jù)樣液量可計(jì)算出還原糖含量。

三、試劑和器材

1、試劑

堿性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅（CuSO4·5H2O）及0.05g亞甲基藍(lán)，溶于蒸餾水中并稀釋到1000ml。

堿性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉及75g

NaOH，溶于蒸餾水中，再加入4g亞鐵氰化鉀［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸餾水稀釋到1000ml，貯存于具橡皮塞玻璃瓶中。

0.1％葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取1.000g經(jīng)98～100℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖，加蒸餾水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml濃HCl（防止微生物生長(zhǎng)），用蒸餾水稀釋到1000ml。

6mol/LHCl：取250ml濃HCl（35%～38%）用蒸餾水稀釋到500ml。

碘－碘化鉀溶液：稱取5g碘，10g碘化鉀溶于100ml蒸餾水中。

6N

NaOH：稱取120gNaOH溶于500ml蒸餾水中。

0.1%酚酞指示劑。

材料

山芋粉

3、器材

電熱恒溫水浴鍋，調(diào)溫電爐，250ml錐形瓶，滴定管。

四、實(shí)驗(yàn)操作

1、樣品中還原糖的提取

準(zhǔn)確稱取

2g山芋粉，放在100ml燒杯中，先以少量蒸餾水調(diào)成糊狀，然后加入50ml蒸餾水，混勻，于50℃恒溫水浴中保溫20min，不時(shí)攪拌，使還原糖浸出混。過(guò)濾，將濾液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，即為還原糖提取液。

2、樣品中總糖的水解及提取

準(zhǔn)確稱取1g山芋粉，放在錐形瓶中，加入6mol/L

HCl

10ml，蒸餾水15ml，在沸水浴中加熱0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液檢查水解是否完全。如已水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)