化妝品中CI 10020等11種原料的檢驗(yàn)方法

附件4化妝品中CI10020等11種原料的檢驗(yàn)方法CI10020andother10kindsofcomponents1范圍本方法規(guī)定了高效液相色譜法測定染發(fā)類化妝品中CI10020等11種原料的含量。本方法適用于膏霜乳類化妝品中CI10020等11種原料（不含色淀）含量的測定。本方法所指的11種原料包括CI10020（酸性綠1）、CI14270（酸性橙6）、CI14700（食品紅1）、CI16185（食品紅9）、CI42045（酸性藍(lán)1）、CI42051（食品藍(lán)5）、CI42053（食品綠3）、CI45350（酸性黃73）、CI45380（酸性紅87）、CI45430（食品紅14）、CI59040（溶劑綠7）。2方法提要樣品提取后，經(jīng)高效液相色譜儀分離，二極管陣列檢測器檢測，根據(jù)保留時(shí)間和紫外光譜定性，峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。本方法中各原料的檢出限、定量下限及取樣量為0.2g，定容至10mL時(shí)的檢出濃度、最低定量濃度見表1。表111種原料的檢出限、檢出濃度、定量下限和最低定量濃度序號(hào)著色劑索引號(hào)著色劑索引通用中文名檢出限（ng）定量下限（ng）檢出濃度（μg/g）最低定量濃度（μg/g）1CI10020酸性綠11.55.015502CI14270酸性橙60.752.57.5253CI14700食品紅10.752.57.5254CI16185食品紅90.752.57.5255CI42045酸性藍(lán)10.752.57.5256CI42051食品藍(lán)50.752.57.5257CI42053食品綠30.752.57.5258CI45350酸性黃730.752.57.5259CI45380酸性紅870.752.57.52510CI45430食品紅141.55.0155011CI59040溶劑綠71.55.015503試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1甲醇。3.2乙腈，色譜純。3.3乙酸銨，色譜純。3.4乙酸，色譜純。3.5甲酸。3.6氨水。3.70.02mol/L乙酸銨溶液：稱取乙酸銨（3.3）1.54g，用水溶解后稀釋至1000mL，混勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾。3.8標(biāo)準(zhǔn)品：CI10020等11種原料的標(biāo)準(zhǔn)品信息詳見附錄B。3.9各原料標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：按表2稱取CI10020等11種原料的標(biāo)準(zhǔn)品（3.8）適量（精確到0.00001g）于10mL棕色容量瓶中，分別用表中所示的溶劑溶解并定容，配成各原料標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，其濃度如表2所示。各原料標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于0℃～6℃避光保存，保存期為3個(gè)月。表2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制序號(hào)著色劑索引號(hào)著色劑索引通用中文名稱樣量[1]（mg）定容溶劑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濃度（μg/mL）移取體積（mL）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（μg/mL）1CI10020酸性綠110水10001.01002CI14270[2]酸性橙610水10000.5503CI14700食品紅110水10000.5504CI16185食品紅910水10000.5505CI42045酸性藍(lán)110水10000.5506CI42051食品藍(lán)510水10000.5507CI42053食品綠310水10000.5508CI45350[2]酸性黃7310水10000.5509CI45380酸性紅8710水10000.55010CI45430食品紅1410水10001.010011CI59040溶劑綠710水10001.0100注：[1]按標(biāo)準(zhǔn)品純度折算后的稱樣量。[2]必要時(shí)，加入定容溶劑前預(yù)先加入少量甲醇（3.1）使溶解，再用定容溶劑定容。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器。4.2液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.3天平。4.4精密pH計(jì)（精度0.01）4.5超聲波清洗器。4.6渦旋振蕩器。4.7離心機(jī)。5分析步驟5.1混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備按表2所示移取體積準(zhǔn)確移取各原料標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.9）于10mL容量瓶中，用0.02mol/L乙酸銨溶液（3.7）稀釋至刻度，配成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用0.02mol/L乙酸銨溶液（3.7）稀釋得混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，各原料標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度見表3。表3CI10020等11種原料標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度序號(hào)著色劑索引號(hào)著色劑索引通用中文名混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度（μg/mL）混標(biāo)1混標(biāo)2混標(biāo)3混標(biāo)4混標(biāo)5混標(biāo)61CI10020酸性綠1251020501002CI14270酸性橙612.551025503CI14700食品紅112.551025504CI16185食品紅912.551025505CI42045酸性藍(lán)112.551025506CI42051食品藍(lán)512.551025507CI42053食品綠312.551025508CI45350酸性黃7312.551025509CI45380酸性紅8712.5510255010CI45430食品紅142510205010011CI59040溶劑綠725102050100注：實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整合適的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度范圍。5.2樣品處理稱取樣品0.2g（精確到0.0001g）于10mL具塞比色管中，加0.02mol/L乙酸銨溶液（3.7）適量，渦旋分散，超聲提取10min，必要時(shí)可用甲酸（3.5）或氨水（3.6）調(diào)節(jié)pH值，使pH值范圍在5.5～7.0之間，用0.02mol/L乙酸銨溶液（3.7）定容至刻度。如為渾濁溶液，可取適量離心（5000rpm）5min，取上清液經(jīng)0.45μm親水微孔聚四氟乙烯（PTFE）濾膜過濾，濾液作為待測溶液，并于6小時(shí)內(nèi)完成檢測。5.3色譜條件色譜柱：C18柱（4.6×250mm，5μm），或等效色譜柱；流動(dòng)相：A：乙腈（3.2）；B：0.02mol/L乙酸銨溶液（3.7）；梯度洗脫程序見表4。表4梯度洗脫程序時(shí)間/minV（A）/%V（B）/%029852987109011208032505034901035298流速：0.8mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：5μL；檢測波長：250nm（CI10020、CI14270、CI16185、CI59040）；500nm（CI14700、CI45350、CI45380、CI45430）；620nm（CI42045、CI42051、CI42053）。5.4測定在“5.3”色譜條件下，取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（5.1）分別進(jìn)樣，進(jìn)行色譜分析，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取“5.2”項(xiàng)下的待測溶液進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間和紫外光圖譜定性，測得峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測溶液中各測定原料的濃度。按“6”計(jì)算樣品中各原料的含量。6分析結(jié)果的表述6.1計(jì)算式中:ω——化妝品中CI10020等11種原料的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，μg/g；ρ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測原料的濃度，μg/mL；V——樣品定容體積，mL；m——樣品取樣量，g。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。6.2回收率和精密度CI10020等11種原料的回收率在89.5%～112.7%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤7.0%（n=6）。7圖譜圖1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在250nm下的色譜圖1：CI59040；2：CI10020；3：CI16185；4：CI14270圖2混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在500nm下的色譜圖5：CI14700；6：CI45350；7：CI45380；8：CI45430圖3混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在620nm下的色譜圖9：CI42053；10：CI42045；11：CI42051附錄ACI10020等11種原料陽性結(jié)果的確證如檢出陽性原料，需采用液相色譜-質(zhì)譜法確證結(jié)果。A.1樣品前處理過程見方法“5.2樣品處理”。A.2參考色譜條件色譜柱：C18柱（3.0×100mm，2.7μm），或等效色譜柱；流動(dòng)相：A：0.01mol/L乙酸銨溶液（用乙酸調(diào)pH值至5.5）；B：0.02%乙酸乙腈溶液；梯度洗脫程序見表A.1；表A.1流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間/minV（A）/%V（B）/%095510595165951795522955流速：0.3mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：2μL。A.3參考質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI）；監(jiān)測模式：正、負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）；監(jiān)測離子對(duì)及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定見表A.2；離子源加熱溫度：550℃；離子噴霧電壓：5.5kV（正源）、-4.5kV（負(fù)源）；氣簾氣：35psi；霧化氣：50psi；輔助加熱氣：50psi。表A.211種原料的監(jiān)測離子對(duì)及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定表序號(hào)著色劑索引號(hào)著色劑索引通用中文名電離模式母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞能(CE)1CI45350酸性黃73+333.1202.080287.3552CI10020酸性綠1-252.0207.0-30234.8-243CI14270酸性橙6-293.0170.9-33156.0-364CI14700食品紅1-217.0199.0-19170.2-225CI16185食品紅9-268.0206.0-30228.0-206CI42045酸性藍(lán)1-543.2419.0-59462.8-457CI42051食品藍(lán)5-559.2435.1-59479.1-408CI42053食品綠3-381.1170.0-37341.1-259CI45380酸性紅87-646.4520.9-42443.0-4210CI45430食品紅14-834.8662.6-52536.9-5511CI59040溶劑綠7-228.4187.8-2079.8-45注：當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳A.4定性用液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行定性。如樣品檢出的特征離子峰的保留時(shí)間與濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)原料一致，且樣品所選擇的監(jiān)測離子對(duì)的相對(duì)豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的監(jiān)測離子對(duì)的相對(duì)豐度比的偏差不超過表A.3規(guī)定范圍，則可判斷樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測原料。表A.3結(jié)果確證時(shí)離子對(duì)相對(duì)豐度比的最大允許偏差相對(duì)離子豐度（k）k>50%50%≥k>20%20%≥k>10%k≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%圖A.1標(biāo)準(zhǔn)溶液LC-MS色譜圖（正離子模式）1：CI45350圖A.2標(biāo)準(zhǔn)溶液LC-MS色譜圖（負(fù)離子模式）2：CI59040；3：CI10020；4：CI16185；5：CI14270；6：CI42053；7：CI14700；8：CI45380；9：CI42045；10：CI42051；11：CI45430附錄B表B.1CI10020等11種原料信息序號(hào)著色劑索引號(hào)著色劑索引通用中文名分子式CAS相對(duì)分子質(zhì)量1CI10020酸性綠1C30H15FeN3Na3O15S319381-50-1878.462CI14270酸性橙6C12H9N2NaO5S547-57-9316.273CI14700食品紅1C18H14N2Na2O7S24548-53-2480.424CI16185食品紅9C20H11N2Na3O10S3915-67-3604.475CI42045酸性藍(lán)1C27H31N2NaO6S2129-17-9566.