重組DNA技術(shù)的基本工具（第2課時）課件 2023-2024學年高二下學期生物人教版選擇性必修3

利用兩張紙，按P73頁思考討論“重組DNA”的要求完成操作：…TATCGTACGATAGGTACTTAA…ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC…GCCGTATG……TCCTAG…AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGAATTCCATAC…GGTATG…GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG5′3′5′3′5′3′5′3′思考探討根據(jù)學生實際操作的情況進行指導。如果制作的黏性末端的堿基不能互補配對可能是剪切位點或連接位點選得不對，也可能是其他原因。不能，因為基因的長度一般在100個堿基對以上。剪刀代表限制酶；透明膠條代表DNA連接酶。剪刀和透明膠條分別代表哪種“分子工具”？你制作的黏性末端的堿基能不能互補配對？如果不能，可能是什么原因造成的？你插入的DNA片段能稱得上一個基因嗎？思考探討同種限制酶切目的基因和載體，重新連接會有哪些情況？拓展延伸限制酶的選擇1.酶切位點要保證目的基因是完整的2.酶切位點要要位于啟動子和終止子之間（啟動子下游）拓展延伸

用限制酶EcoRⅤ單獨切割某質(zhì)粒，可產(chǎn)生1個14kb(1kb即1000個堿

基對)的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到

三種長度的DNA片段，見下圖(其中*表示EcoRⅤ切割后的一個黏性末端)。若用MboⅠ單獨切割該質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為A.2.5kb和5.5kb B.2.5kb和6kbC.5.5kb和8kb D.6kb和8kbD課堂練習3.1重組DNA技術(shù)的基本工具（第2課時）本節(jié)聚焦

閱讀“DNA的粗提取實驗與鑒定”實驗，回答以下問題：1、粗提取DNA的思路是什么？其原理是？鑒定DNA的原理是？2、你認為本實驗選材對有何要求，能否選用哺乳動物成熟紅細胞或大腸桿菌細胞？

實驗用到哪些試劑，分別有何作用？3、簡要概括實驗步驟，思考：能否用蒸餾水研磨材料？過濾能否用濾紙？

為什么濾液要在冰箱放置？4、鑒定DNA需要在什么樣的條件下進行？DNA的粗提取與鑒定實驗思路材料用具方法步驟實驗原理利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。Q1、粗提取DNA的思路是什么？其原理是？鑒定DNA的原理是？1.DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精。2.DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/LNaCl溶液。3.在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色。DNA的粗提取與鑒定實驗思路材料用具方法步驟實驗原理Q2、你認為本實驗對選材有何要求，是否可以選用哺乳動物成熟紅細胞或大腸桿菌細胞，為什么？

實驗用到哪些試劑，分別有何作用？DNA含量相對較高的生物組織選材：注意：不選哺乳動物成熟的紅細胞，因其沒有

細胞核和眾多細胞器，幾乎不含DNA。不選大腸桿菌，因其細胞較小，DNA含量少。試劑：試劑作用研磨液體積分數(shù)為95%的酒精2mol/L的NaCl溶液二苯胺試劑析出DNA溶解DNA鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用溶解并提取DNADNA的粗提取與鑒定實驗思路材料用具方法步驟實驗原理3、簡要概括實驗步驟，思考：能否用蒸餾水研磨材料？過濾能否用濾紙？

為什么濾液要在冰箱放置？研磨析出DNA溶解與鑒定過濾或離心過濾：漏斗中墊上紗布,過濾研磨液，4℃冰箱

中放置幾分鐘后,再取上清液。離心：1500r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,再取上清液。稱取30g洋蔥,切碎,放入研缽中,倒入10mL研磨液,充分研磨否則DNA不能從細胞核中釋放，從而影響提取的DNA含量不能用蒸餾水，無法溶解、提取DNA可能含有DNA、RNA以及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類等。不可用濾紙，DNA會吸附，造成損失使酶活性降低，防止DNA降解DNA的粗提取與鑒定實驗思路材料用具方法步驟實驗原理3、簡要概括實驗步驟，思考：能否用蒸餾水研磨？過濾能否用濾紙？

為什么濾液要在冰箱放置？研磨析出DNA溶解與鑒定過濾或離心①抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解②低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。③低溫抑制DNA分子運動，使DNA易形成沉淀析出避免破壞DNA或者將溶液倒入塑料離心管,在10000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min,棄上清液,將管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。在上清液中加入體積相等的、預冷的酒精溶液(體積分數(shù)為95%),靜置2~3min,溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸去上面的水分;這一步的目的是蛋白質(zhì)溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。實驗組對照組水浴加熱組別試劑處理結(jié)果對照組實驗組DNA的粗提取與鑒定實驗思路材料用具方法步驟實驗原理3、簡要概括實驗步驟，思考：能否用蒸餾水研磨材料？過濾能否用濾紙？

為什么濾液要在冰箱放置？研磨析出DNA溶解與鑒定過濾或離心將絲狀物或沉淀物溶于

溶液中，加入

試劑，混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min。二苯胺2mol/L的NaClNaCl溶液5mLNaCl溶液5mL二苯胺試劑4mL二苯胺試劑4mL絲狀物或沉淀物對照組溶液不變藍，實驗組變藍，溶液藍色深淺與溶液中DNA的含量的多少有關(guān)。1.如果選用雞血細胞進行實驗，如何快速破碎細胞？2.有時會在DNA濾液中添加嫩肉粉（木瓜蛋白酶），這樣有什么好處？3.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質(zhì)嗎？將雞血細胞置于蒸餾水中，待細胞漲破后，收集濾液。利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，不分解DNA，有利于DNA與蛋白質(zhì)分開。粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。思考探討5.鑒定DNA的試劑是什么?使用時要注意什么?二苯胺試劑。使用時要現(xiàn)配現(xiàn)用,且鑒定DNA需要沸水中加熱。思考探討4.有時還會反復利用不同濃度的NaCl溶液來溶解、析出DNA，試猜想該操作的目的？進一步純化DNA——用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽溶液中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽溶液使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。DNA的粗提取與鑒定課堂習題(1)DNA不溶于酒精，但一些蛋白質(zhì)溶于酒精，可利用這一原理初步分離DNA與蛋白質(zhì)。()(2)研磨之后，通過過濾或離心，DNA會保留在沉淀物中。()解析：研磨之后，通過過濾或離心，DNA會保留在上清液中。(3)DNA能與二苯胺試劑在常溫下反應生成藍色沉淀。()解析：DNA能與二苯胺試劑在沸水浴下反應，使溶液呈現(xiàn)藍色，而非藍色沉淀?！獭痢?.下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗的敘述,錯誤的是(

)A.酵母菌和菜花均可作為提取DNA的材料B.DNA能溶于物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液C.向洋蔥研磨液中加蒸餾水攪拌,可見玻璃棒上有白色絲狀物D.向DNA溶液中加入二苯胺試劑,沸水浴加熱,冷卻后變藍C課堂習題3.(2023·廣東卷)“DNA粗提取與鑒定”實驗的基本過程是:裂解→分離→沉淀→鑒定。下列敘述錯誤的是(

)A.裂解:使細胞破裂釋放出DNA等物質(zhì)B.分離:可去除混合物中的多糖、蛋白質(zhì)等C.沉淀:可反復多次以提高DNA的純度D.鑒定:加入二苯胺試劑后即呈現(xiàn)藍色D4.DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學性質(zhì)方面存在差異,可以利用這些差異,選擇適當?shù)奈锢砘蚧?/p>