《中國藥典》2010年版生物安全性檢查-國明

《中國藥典》2010年版

生物平安性檢查山東省藥品檢驗所藥理室20山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl內容山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥理及生物檢定方法修訂概況注射劑平安性檢查法應用指導原那么 中藥生物活性測定指導原那么山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況一、藥理及生物檢定方法修訂概況生物檢定法是利用生物體包括整體、離體組織、器官、細胞和微生物等評估藥物生物活性的一種方法。它以藥物的藥理作用為根底，以生物統(tǒng)計為工具，運用特定的實驗設計在一定條件下比較供試品和相當?shù)臉藴势坊驅φ掌匪a生的特定反響，通過等反響劑量間比例的運算或限值劑量引起的生物反響程度，從而測定供試品的效價、生物活性或雜質引起的毒性。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況一、藥理及生物檢定方法修訂概況體內測定〔invivo〕以整體動物生物體評價藥品的生物活性〔藥效、活力或毒力〕體外測定〔inbitro〕以離體器官、組織、微生物、酶和細胞〔原代細胞、傳代細胞〕為生物體，利用這些生物體評價藥品的生物活性〔藥效、活力或毒力〕山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況-應用范圍一、藥理及生物檢定方法修訂概況如生化藥物：一般是從生物體別離、純化所得，如肝素鈉、魚精蛋白、促腎上腺皮質激素。中藥：洋地黃制劑、人工麝香、水蛭等。藥品〔生化藥品、中藥〕生物制品〔疫苗、血液制品〕平安性檢查對從動物臟器、微生物或體液等提取的，有效成分不夠確切，多組分、結構復雜，理化方法不能有效鑒定并具有生物活性的天然生化藥物、中藥，以及有些生物技術藥物，由于空間結構的細微變化，影響藥物的活性中心位點，目前質量標準中仍應用生物檢定法評估藥物的生物活性。山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況-作用一、藥理及生物檢定方法修訂概況工藝與方法驗證效價與活性鑒別山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況-作用一、藥理及生物檢定方法修訂概況工藝與方法驗證對于新生產工藝、新檢測方法的改進、變更，往往需要生物檢定來驗證核對。中、外藥典在重組人生長激素〔rhGH〕重組人胰高血糖素質量標準中明確規(guī)定，在生產研發(fā)階段，“生產過程中的產品必須用體內生物檢定方法測定其生物效價”，直到生產穩(wěn)定為止。山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況-作用一、藥理及生物檢定方法修訂概況效價與活性當采用理化方法測定如HPLC替代胰島素等原有的生物效價測定法時，仍需作大量的方法比對、相關性研究等工作。

定量的測定方法半定量的測定方法山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況-作用一、藥理及生物檢定方法修訂概況效價與活性定量的測定方法效價〔potency〕測定是生物檢定的主要內容，它是以藥理為根底，生物統(tǒng)計為工具，運用特定的實驗設計，利用生物體在一定條件下比較供試品與相當于標準品或對照品所產生的特定反響〔可測量、量化的生理指標或生物藥效或毒力〕的一種定量的方法，因而被稱為定量藥理學。山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況-作用一、藥理及生物檢定方法修訂概況效價與活性定量的測定方法胰島素升壓素縮宮素硫酸魚精蛋白肝素洋地黃卵泡刺激素生長激素黃體生成素降鈣素山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況-作用一、藥理及生物檢定方法修訂概況效價與活性半定量的測定方法〔活性檢查〕當理化測定占主導地位，效價測定一般來講可以不必精確，可歸于活性檢查項，采用半定量方法，設定限值，不需精密生物統(tǒng)計，盡可能減少實驗動物用量或其他生物體用量；甚至只用于定性的鑒別。例如：新藥重組人胰高血糖素類多肽是治療糖尿病用藥，其質量標準中即采用該法〔限值為小鼠血糖降低大于20%〕進行活性檢查。山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl藥品生物檢定概況-作用一、藥理及生物檢定方法修訂概況鑒別隨著對動物保護意識提高，對實驗動物減少、替代、優(yōu)化〔3R：Reduction、Replacement、Refinement〕的實施，對能用理化測定的藥品，生物效價測定逐漸降為鑒別項的定性或半定量測定。如USP升壓素大鼠血壓升高法用于鑒別。2010年中國藥典縮宮素注射液將子宮收縮法放入鑒別項。一、藥理及生物檢定方法修訂概況

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl附錄檢查法或指導原則增修訂情況一部二部熱原檢查法修訂修訂細菌內毒素檢查法修訂修訂異常毒性檢查法新增修訂溶血與凝聚檢查法新增新增過敏反應檢查法新增修訂降壓物質檢查法新增修訂生物檢定統(tǒng)計法/

修訂中藥注射劑安全性檢查法應用指導原則修訂/

化學藥品注射劑安全性檢查法應用指導原則/

新增中藥生物活性測定指導原則新增/

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl一、藥理及生物檢定方法修訂概況附錄增修訂主要特點中藥質量控制評價模式轉變充分驗證完善提高充分體現(xiàn)了“3R”原則

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl一、藥理及生物檢定方法修訂概況附錄增修訂主要特點中藥質量控制評價模式轉變生物活性引入實現(xiàn)了中藥質量標準由單一指標成分定性定量向活性有效成分及生物測定的綜合檢測轉變。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl一、藥理及生物檢定方法修訂概況附錄增修訂主要特點充分驗證遵循科學性、合理性、可操作性，新建或新設立工程必須經不同實驗室的共同驗證或適用性研究，如注射劑平安性指導原那么對方法學的適用性研究；中藥生物活性指導原那么要求對方法的專屬性、準確性、精密度〔重復性、中間精密度、重現(xiàn)性〕、適用性、科學性進行了研究。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl一、藥理及生物檢定方法修訂概況附錄增修訂主要特點完善提高對2010藥典一、二部檢查法和指導原那么進行修訂和改進，對影響結果準確性的實驗條件提出了要求，如熱原檢查法、溶血與凝聚、降壓物質檢查法、過敏試驗。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl一、藥理及生物檢定方法修訂概況附錄增修訂主要特點表達了“3R”原那么replace、reduce、refine如熱原檢查法取消家兔使用次數(shù)和體重上限規(guī)定。中藥生物活性指導原那么中對動物的使用等。一、藥理及生物檢定方法修訂概況

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl中藥生物活性測定指導原則化藥注射劑安全性檢查法應用指導原則中藥注射劑安全性檢查法應用指導原則生物檢定統(tǒng)計法降壓物質檢查法過敏反應檢查法溶血與凝聚檢查法異常毒性檢查法細菌內毒素檢查法熱原檢查法附錄增修訂主要內容二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl中藥平安性檢查工程的設定平安性檢查方法和檢查限值確定山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 本指導原那么為中藥注射劑臨床使用的平安性和制劑質量可控性而定。中藥注射劑平安性檢查包括：熱原〔或細菌內毒素〕、異常毒性、降壓物質、過敏反響物質、溶血與凝聚等項。根據(jù)處方、工藝、用法及用量等設定相應檢查工程進行適用性研究。山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 中藥注射劑平安性檢查工程的設定中藥注射劑項目的設定備注靜脈用設熱原（或細菌內毒素）、異常毒性、過敏反應、溶血與凝聚等安全性檢查項，必要時考慮降壓物質檢查項。（功能主治中具有與升壓相關內容的注射劑除外）中藥注射劑中致熱成分復雜，可能干擾細菌內毒素檢查，一般首選熱原檢查項，如該藥本身具有清熱的藥理作用或對家兔有毒性反應，也可選擇細菌內毒素檢查項。肌內注射用設異常毒性、過敏反應等檢查項山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 中藥注射劑平安性檢查方法和檢查限值確定方法適用性〔設定限值前研究〕應進行三批以上供試品的檢查驗證確定限值

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl熱原-細菌內毒素檢查二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 方法適用性（設定限值前研究）檢查方法熱原檢查應做適用性研究，求得對家兔無毒性反應、不影響正常體溫和無解熱作用的劑量。細菌內毒素檢查應進行干擾試驗，求得最大無干擾濃度。參照熱原檢查法（附錄ⅩⅢA）或細菌內毒素檢查法（附錄ⅩⅢD）。品種項下可以增加稀釋濃度、調節(jié)pH和滲透壓或緩慢注射等排除干擾或影響的特殊規(guī)定。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl熱原-細菌內毒素檢查二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 設定限值--熱原檢查設定限值--內毒素檢查限值根據(jù)臨床一小時內最大用藥劑量計算。熱原檢查限值可參照臨床劑量計算，一般為人用每公斤體重每小時最大供試品劑量的3～5倍，供試品注射體積每公斤體重一般不少于0.5mL，不超過10mL。限值劑量應不影響正常體溫。限值根據(jù)臨床一小時內最大用藥劑量計算內毒素檢查限值按規(guī)定要求計算，由于藥物和適應癥(如抗感染、抗腫瘤、心血管藥等急重病癥用藥、兒童老人用藥、復合用藥、大輸液等)的不同，限值可適當嚴格，至計算值的1/3～1/2，以保證安全用藥。細菌內毒素測定濃度應無干擾反應。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 異常毒性檢查方法適用性（設定限值前研究）檢查方法可參考文獻數(shù)據(jù)，并經單次靜脈注射給藥毒性試驗確定該注射劑的急性毒性數(shù)據(jù)（LD50或LD1及其可信限）?？捎啥鄠€實驗室或多種來源動物試驗求得LD50和LD1數(shù)據(jù)。注射速度0.1ml/秒，觀察時間為72小時。如其它給藥途徑或延長觀察時間應進行相應途徑或相應觀察時間的急性毒性試驗。參照異常毒性檢查法（附錄ⅩⅢE）。對動物、給藥途徑和給藥次數(shù)、觀察指標和時間等，方法和限值有特殊要求時，可在品種項下另作規(guī)定。山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl限值應低于該注射劑本身毒性的最低致死劑量考慮到實驗室間差異、動物反響差異和制劑的差異，建議限值至少應小于LD1可信限下限的1/3(建議采用1/3～1/6)，如難以計算最低致死量，可采用LD50可信限下限的1/4(建議采用1/4～1/8)。如半數(shù)致死量與臨床體重劑量之比小于20，可采用LD50可信限下限的1/4或LD1可信限下限的1/3。靜脈注射最大劑量0.8ml/20g仍未見毒性反響或死亡，可以此作為檢查限值。二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 設定限值異常毒性檢查山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl降壓物質檢查方法適用性〔設定限值前研究〕供試品按一定注射速度靜脈注射不同劑量，觀察供試品對貓血壓反響的劑量反響關系。供試品與對照品注射體積應相同，通常為0.2～1ml/kg，求得供試品降壓物質檢查符合規(guī)定的最大劑量〔最大無降壓反響劑量〕。檢查方法參照降壓物質檢查法〔附錄ⅩⅢF〕。二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl設定限值臨床單次用藥劑量的1/5～5倍作為降壓反響物質檢查劑量限值，急重病癥用藥盡可能采用高限。特殊情況下，如供試品有一定降壓作用，那么可按最大無降壓反響劑量的1/2-1/4作為限值劑量。供試品原液靜脈注射1ml/kg劑量未見降壓反響，該劑量可作為給藥限值二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl過敏反響檢查方法適用性〔設定限值前研究〕測定供試品對豚鼠腹腔(或皮下)和靜脈給藥的無毒性反響劑量。可采用注射劑的半成品原輔料進行致敏和激發(fā)研究，確定致敏方式和次數(shù)在首次給藥后14、21、28天中選擇最正確激發(fā)時間。檢查方法參照過敏反響檢查法〔附錄ⅩⅢG〕。二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl設定限值致敏和激發(fā)劑量應小于該途徑的急性毒性反響劑量,適當參考臨床劑量一般激發(fā)劑量大于致敏劑量。常用腹腔或鼠鼷部皮下注射途徑致敏，每次每只0.5ml,每只1ml靜脈注射激發(fā)。如致敏劑量較小，可適當增加致敏次數(shù)，方法和限值的特殊要求應在品種項下規(guī)定。過敏反響檢查二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl溶血與凝聚檢查方法適用性〔設定限值前研究〕對注射劑原液和稀釋液進行溶血與凝聚實驗研究,指標除目測外，可增加比色法和顯微鏡下紅細胞計數(shù)方法,確定無溶血和或凝聚的最大濃度檢查方法參照溶血與凝聚檢查法〔附錄ⅩⅢH〕。二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl設定限值以無溶血和凝聚的最大濃度的1/2作為限值濃度一般應高于臨床最大使用濃度過敏反響檢查二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl修訂背景1、增加了中藥平安性檢查工程的設定原那么。2、增加了限制前研究〔即方法適用性研究〕，使方法更具科學性、可操作性。3、平安性檢查法內容省略，檢查限值設定更加具體明確。4、家兔熱原檢查法檢查限值由人用每公斤體重每小時最大供試品劑量的1-3倍修改為3-5倍。二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl化學藥品注射劑平安性檢查法

應用指導原那么化學藥品〔包括抗生素、生化藥品〕平安性檢查工程的設定平安性檢查方法和檢查限值確定化藥與中藥注射劑平安性檢查法應用指導原那么的異同點二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl化學藥品注射劑平安性檢查法

應用指導原那么本指導原那么為化學藥品注射劑臨床使用的平安性和制劑質量可控性而定?；瘜W藥注射劑平安性檢查包括異常毒性、細菌內毒素〔或熱原〕、降壓物質〔或組胺物質〕、過敏反響等項。根據(jù)處方、工藝、用法及用量等設定相應的檢查工程進行適用性研究。二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl應設細菌內毒素〔或熱原〕檢查項。所用原料系動物來源或微生物發(fā)酵液提取物，組分結構不清晰或有可能污染毒性雜質，且又缺乏有效的理化分析方法的靜脈用注射劑，應考慮設立異常毒性檢查項。檢查工程的設定靜脈用注射劑二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl所用原料系動物來源或微生物發(fā)酵提取物時,組分結構不清晰或有可能污染毒性雜質，且又缺乏有效的理化分析方法的肌內注射用注射劑，應考慮設立異常毒性檢查項。檢查工程的設定肌內注射用注射劑二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl所用原料系動物來源或微生物發(fā)酵提取物時,組分結構不清晰或有可能污染異源蛋白或未知過敏反響物質的肌內注射用注射劑，如缺乏相關理化分析方法且臨床發(fā)現(xiàn)過敏反響，應考慮設立過敏反響檢查項。臨床用藥劑量較大，生產工藝易污染細菌內毒素的肌內注射用注射劑，應考慮設細菌內毒素檢查項檢查工程的設定肌內注射用注射劑二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl椎管內、腹腔、眼內等特殊途徑的注射劑，其平安性檢查工程一般應符合靜脈用注射劑的要求，必要時增加其它平安性檢查工程，如刺激性檢查、細胞毒性檢查。檢查工程的設定特殊途徑的注射劑二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl注射劑輔料使用面廣，用量大，來源復雜，與藥品的平安性直接相關。在質量控制中，應根據(jù)輔料來源、性質、用途、用法用量，配合理化分析方法，設立必要的平安性檢查工程。檢查工程的設定注射劑輔料二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl原料和生產工藝特殊的注射劑必要時應增加特殊的平安性檢查工程，如病毒檢查、細胞毒性檢查等。檢查工程的設定其它二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl定義：本法系將一定濃度的供試品和組胺對照品分別觀察出現(xiàn)的收縮反響幅度并加以比較，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。不合格供試品說明含有組胺和類組胺物質，在臨床上可能引起血壓下降和類似過敏反響等嚴重的不良反響。檢查方法和限值確定組胺檢查法二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl干擾試驗按組胺類物質檢查法，依以下順序準確注入供試品稀釋液加對照品稀釋液低劑量、對照品稀釋液低劑量、供試品稀釋液加對照品稀釋液高劑量、對照品稀釋液高劑量〔dSL+T、dSL、dSH+T、dSH〕，重復一次，如dSL+T及dSH+T所致的反響值與dSL及dSH所致的反響值根本一致，可認為供試品不干擾組胺物質檢查；同時應進行本法與降壓物質檢查法符合性的研究。否那么該品種不適合設立組胺物質檢查項，建議設立降壓物質檢查項。檢查方法和限值確定組胺檢查法二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl限值確定除特殊要求外，原那么上與降壓物質檢查限值一致，以臨床單次用藥劑量的1/5～5倍量和每千克體重0.1μg組胺劑量計算注射劑含組胺類物質檢查限值，其計算公式為：限值L=K/M，其中K值為人每千克體重接受的組胺量〔0.1μg/kg〕，M為降壓物質檢查限值〔mg/kg、ml/kg、IU/kg〕。供試品劑量應低于最大無收縮干擾劑量?？鼓[瘤藥、心血管病藥等急重病癥用藥應采用高限。檢查方法和限值確定組胺檢查法

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl增訂背景二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 降壓物質檢查法使用的動物為貓，現(xiàn)在貓來源復雜、而且難以得到，動物數(shù)量、質量都難以保證。因此使用組胺檢查法作為體外替代方法。

許多中藥注射劑品種在做降壓物質檢查時，存在一過性降壓現(xiàn)象，如清開靈注射液、復方苦參注射液等，但在臨床使用時并不存在降壓現(xiàn)象；

還有一些活血化瘀類中藥注射劑品種如紅花注射液，丹參注射液，紅花黃色素注射液等，本身具有擴張血管的作用，在做降壓物質檢查時，在與臨床劑量等同的情況下，血壓出現(xiàn)大幅度下降的情況。究其原因，是中藥注射劑的成分復雜，還是其本身擴張血管的作用，尚不清楚。

因此，在中藥注射液的平安性評價中是否增加降壓物質檢查項一直存在爭議。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl增訂背景二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 組胺檢查法是豚鼠離體回腸收縮法在藥品檢驗領域的應用。豚鼠離體回腸收縮法本身是一種成熟的藥理實驗方法，在根底藥理研究領域應用廣泛，其作用機制、拮抗劑與沖動劑的類型與劑量等根底研究均細致深入。本法在借鑒的根底上，對試驗條件、結果判定等進行了明確與改進。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl附組胺檢查法二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 營養(yǎng)液組成特點

A液：試驗當日，取氯化鈉160.0g、氯化鉀4.0g、氯化鈣〔按無水物計算〕2.0g、氯化鎂〔按無水物計算〕1.0g與磷酸氫二鈉〔含12個結晶水〕0.10g，加注射用水700ml使溶解，再參加注射用水適量，使成1000ml。

B液：取硫酸阿托品0.5mg、碳酸氫鈉1.0g、葡萄糖〔含1個結晶水〕0.5g，加適量注射用水使溶解，加A液50.0ml，混合后加注射用水使成1000ml。B液應臨用前配制，并在24h內應用。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl附組胺檢查法二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 結果判定方法如供試品溶液引起回腸收縮：那么分別計算dSL、dT所致反響的平均值。假設dT所致反響的均值不大于dSL所致反響的均值，即判定供試品組胺類物質檢查符合規(guī)定；假設dT所致反響的均值大于dSL所致反響的均值，即判定供試品組胺類物質檢查不符合規(guī)定。

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl附組胺檢查法二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-中藥 結果判定方法如供試品不引起回腸收縮：那么在供試品溶液中參加組胺對照品高、低劑量，并按以下次序準確注入dSH、dSL+T、dSH+T、dSL,重復一次。假設供試品組胺溶液產生的收縮與對應組胺對照液高、低劑量的收縮根本一致，可判定供試品組胺類物質檢查符合規(guī)定；假設供試品組胺溶液產生的收縮與對應組胺對照液高、低劑量產生的收縮不相符，即減少或無收縮，或不能重復出現(xiàn)，那么此檢查結果無效，應進行供試品的降壓物質檢查。二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl1、實驗證實純種動物對組胺的反響更為靈敏，收縮值高，靈敏度也較為穩(wěn)定。因此使用純種動物是保證實驗順利的根底。2、動物體重應嚴格控制在250-350g，動物體重過大、過小靈敏度均難以重復。3、禁食時間對豚鼠的腸道平滑肌功能有直接影響，故動物禁食應控制在24h左右，禁食后未使用的動物近期內不應用于本實驗。動物要求附組胺檢查法-本卷須知二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl1、剖腹取出回腸一段〔選用遠端小腸，因為此段最敏感〕，注意防止因牽拉使回腸受損，腸系膜不必要全局部離，容易損傷腸管，少帶一些血管組織，腸管更有活力。2、新鮮取出的腸管宜立刻浸泡至營養(yǎng)液B中。3、腸管剪取2～3cm長，具體長度應依據(jù)浴桶高度取舍。4、剪取后立即使其在營養(yǎng)中平衡一段時間，并在20分鐘內開始給予組胺。5、離體腸管可以保存于B液中，至2-8℃冰箱中冷藏，通入氧氣，24h內可以使用。冰箱中保存的離體腸管使用時宜掛在浴桶內1h左右后再開始試驗。腸管處置附組胺檢查法-本卷須知二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl對于準確記錄組胺引起的回腸收縮值十分重要，調零后應預加負荷1g左右，調節(jié)使其對收縮的反響最為靈敏。在腸管平衡的過程中，因腸管松弛，預加的負荷值會降低，必要時應調整使其對收縮的反響最為靈敏。但在確定了dSH、dSL后，那么不應調整，否那么可能引起dSH、dSL的收縮高度改變，失去意義。預負荷附組胺檢查法-本卷須知二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl干擾的判斷是試驗過程的重要影響因素。試驗中有時靈敏度的下降與樣品干擾引起的回腸收縮降低難以區(qū)分，應靜置或沖洗浴筒使靈敏度恢復后重新試驗。建議先取一段腸管，以組胺對照液10-9、10-8、10-7、10-6g/ml…依次給予，觀察腸管收縮，以確定所用動物的最正確劑量范圍；要注意的是如果組胺對照液的濃度過高，有可能使腸管收縮難以恢復，應更換腸管。干擾的判斷附組胺檢查法-本卷須知二、注射劑平安性檢查法應用指導原那么-化藥

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl平安性檢查法和檢查限值確定中異常毒性檢查、細菌內毒素、熱原檢查、降壓物質檢查、過敏反響檢查兩者一致。2.化學平安性檢查工程設定原那么中增加了特殊途徑的注射劑、注射劑輔料及其它。3.化學注射劑增加了組胺類物質檢查項,而中藥注射劑增加了溶血與凝聚檢查?；幣c中藥注射劑平安性檢查法應用指導原那么的異同點三、中藥生物活性測定指導原那么山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl生物活性測定法是以藥物的生物效應為根底，以生物統(tǒng)計為工具，運用特定的實驗設計，測定藥物有效性的一種方法，從而到達控制藥品質量的作用。其測定方法包括生物效價測定法和生物活性限值測定法。三、中藥生物活性測定指導原那么山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl控制中藥有效性的一種方法；方法根底：生物效應；方法工具：統(tǒng)計學；目的：控制質量；分類：定量法—生物效價測定法定性法—生物活性限值測定法概念三、中藥生物活性測定指導原那么山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl中藥的藥材來源廣泛、多變，制備工藝復雜，使得中藥制劑的質量控制相對困難中藥往往含有多種活性成分和具有多種藥理作用，僅僅控制少數(shù)成分不能完全控制其質量和反映臨床療效為了使中藥的質量標準能更好地保證每批藥品的臨床使用平安有效，有必要在現(xiàn)有含量測定的根底上增加生物活性測定，以綜合評價其質量。背景三、中藥生物活性測定指導原那么山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl背景-中藥質量控制模式歷史現(xiàn)狀大致分為三個階段：外觀形態(tài)鑒別為主和內在成分監(jiān)測為主。第一階段1985年前，包括傳統(tǒng)的外觀形態(tài)鑒別〔即經典的看、嗅、嘗、試、量五法〕和顯微鑒別，沒有確切的定量指標，缺乏專屬性鑒別工程。第二階段1985年后，中藥質量控制向微觀內在成分監(jiān)測的方向開展，開始使用化學和儀器分析的方法來對中藥成分進行鑒別和含量測定。薄層色譜法的應用，實現(xiàn)了中藥的專屬性鑒別；現(xiàn)代儀器分析方法來測定中藥活性成分和指標成分的含量，結束了中藥質量標準中沒有定量指標的歷史。第三階段近年來，歐共體在草藥質量指南中稱：草藥及其制劑是以整體為活性物質，單靠測定其中的某種有效成分來考查質量的穩(wěn)定性是不夠的。因此，具有“整體”特征的指紋圖譜檢測方法得到推廣，中藥質量控制由單一指標成分定性定量向活性有效成分及生物測定的綜合檢測的方向開展，是中藥質量控制的里程碑。三、中藥生物活性測定指導原那么山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl背景-必要性中藥成分的復雜多變不確定性導致生物活性的變化中藥質量標準的局限性現(xiàn)行的中藥質量標準主要是參照化學合成藥模式，通過某一個或幾個指標有效成分的定性檢測與含量測定來對中藥的質量加以控制。由于該指標成分不一定是藥品的藥效成分或專屬性成分，即使為主要藥效成分，且其卑微的含量限度與臨床有效劑量間缺乏相關性，其量效關系、毒效關系目前尚不清楚。質量控制的需要三、中藥生物活性測定指導原那么山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl符合藥理學研究根本原那么應符合藥理學研究隨機、對照、重復的根本原那么；具備簡單、精確特點；判斷標準應明確。表達中醫(yī)藥特點建立的方法，其測定指標應與該中藥的“功能與主治”相一致。品種選擇合理研究的中藥材或中成藥應功能主治明確，優(yōu)先考慮適應癥明確，成分單一的中藥注射劑品種，對急重癥用藥、保護品種應重點進行研究。方法科學可靠優(yōu)先選用生物效價測定法，不能建立生物效價測定的品種可考慮采用生物活性限值測定法基本原那么三、中藥生物活性測定指導原那么山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl基

本

原

那么品種選擇合理表達中醫(yī)藥特色方法科學可靠難度大；判定指標和中醫(yī)的“功能主治”如何銜接？多功能主治中藥指標的選擇。功能主治明確；適應癥單一；中藥注射劑；急重癥用藥；保護品種；新藥？生物效價法生物活性限值測定法三、中藥生物活性測定指導原那么山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl基本內容--實驗條件試驗系選擇供試品選擇標準品或對照品選擇應與試驗原理和測定指標密切相關；背景資料清楚、影響因素少、檢測指標靈敏、成本低廉；實驗動物的要求。盡可能使用小鼠和大鼠，應遵循“優(yōu)化、減少、替代”的“3R”原則。工藝穩(wěn)定、質量合格（目前的標準要求）；飲片應基源清楚；使用三批供試品（方法學研究時）。首選中藥標準品；可考慮化學藥作為對照品；生物效價測定法必須要有標準品測定相對效價；生物活性限值測定法用對照品作為驗證。三、中藥生物活性測定指導原那么

山東省藥品檢驗所ShandongInstituteforDrugControl基本內容--實驗設計設計原理設計類型劑量設計給藥途徑給藥次數(shù)指標選擇所選實驗方法的原理應明確；所選擇的檢測指標應客觀、專屬性強；能夠體現(xiàn)供試品的功能與主治或藥理作用；如果選擇機理研究也應考慮指標的專屬性采用生物效價測定法，應按CP二部“生物檢定統(tǒng)計法”要求進行設計研究；采用生物活性限值測定法，