前列腺特異抗原

1998年8月17日克林頓承認(rèn)和萊溫斯基有不正當(dāng)關(guān)系1998年1月23日，瓊斯性騷擾案中證人、白宮前實(shí)習(xí)員莫妮卡·萊溫斯基被指控與克林頓有染?？肆诸D(美國第42任總統(tǒng)1993年-2000年)NieShengjie,Assoc.ProfSectionofForensicBiology2010.09.20IdentificationofSeminalstainoutlineBiologicalfeatureObjective&procedureVisualexaminationPreliminarytestsConfirmatorytestsIndividualidentificationBiologicalfeatureTypicalejaculation2-5millilitersofsemenSperm:107/ml~108/ml3pgDNA/sperm480,000ngDNA/ejaculateOnly1ngDNAneededforSTRtyping!男性生殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)內(nèi)生殖器生殖腺——睪丸輸精管——附睪、輸精管、射精管、尿道附屬腺體——精囊腺、前列腺、尿道球腺外生殖器陰莖陰囊男性生殖器Semen精液Semen精液Spermcells（Spermatozoa，精子）Seminalplasma精漿Seminalvesiclefluid精囊液

60%

Prostaticfluidsecretions前列腺液

30%Epididymis

附睪

5%bulbourethralglands尿道球腺液

5%semen含蛋白質(zhì)、各種酶及果糖等多種成分的堿性乳白色膠狀液體成分：細(xì)胞：精子、睪丸細(xì)胞、脫落柱狀上皮細(xì)胞、白細(xì)胞非細(xì)胞：前列腺卵磷脂小體、玻璃小體、精胺結(jié)晶、色素顆粒、脂肪球弱堿性pH7.2~8.6多種蛋白質(zhì)（凝固酶等）含黃素高濃度酸性磷酸酶前列腺特異抗原精胺產(chǎn)生精子，分泌雄性激素促使精子成熟，貯存精子蛋白水解酶、纖維蛋白酶精液的體外變化乳白色半透明粘稠液體，有特殊氣味凝固酶（精囊腺）膠凍狀5min中性蛋白酶、纖溶酶20min稀薄半流動狀精子的發(fā)生睪丸曲細(xì)精管Threedistinctregions:Head(

acrosomeandnucleuswithhaploidDNA)MiddlePiece(mitochondria)Tail(flagella;mobility)Sperm精子頭尾部頸中主段末頂體末段主段中間段頸頭尾精子側(cè)面觀頂體蛋白酶，透明質(zhì)酸酶，酸性磷酸酶細(xì)胞核線粒體鞘Vasectomy-blockspermatozoa輸精管結(jié)扎StillproducesejaculatewithseminalvesiclefluidandprostaticfluidWillnothaveenoughspermforDNAtypingOligospermia-lowspermcount少精癥MayormaynothaveenoughspermforDNAtypingAspermia-nosperm無精癥WillnothaveenoughspermforDNAtyping14Notallsemenstainscontainsperm受精過程中只有精子的頭部進(jìn)入卵子內(nèi)！母系遺傳Seminalstain精液斑多為淡黃色或灰白色不規(guī)則斑痕，觸之較硬，有時有特殊氣味。濃厚精斑呈灰白色漿糊狀，稀薄精斑浸潤于布纖維間，不易察見；在淺色布料上，精斑多呈黃白色地圖狀，邊沿色較深精斑檢驗(yàn)?zāi)康呐c要求預(yù)試驗(yàn)個體識別確證試驗(yàn)肉眼觀察發(fā)現(xiàn)可疑精斑是否精斑種屬試驗(yàn)是否人精斑個體來源紫外線照射Visualexamination肉眼觀察簡便無損非特異目的：發(fā)現(xiàn)可疑精斑，確定其位置與分布，以便準(zhǔn)確取材Preliminarytest預(yù)試驗(yàn)?zāi)康?篩選可疑精斑特點(diǎn)：方法簡單，靈敏度高方法：酸性磷酸酶檢驗(yàn)結(jié)晶試驗(yàn)其它：鋅檢出法，馬鈴薯凝集試驗(yàn)酸性磷酸酶（Acidphosphatase，AP）特點(diǎn)：1.精液中含量高，是其它體液、分泌液、臟器的100倍以上；2.穩(wěn)定，對腐敗、高熱有較強(qiáng)抵抗力；3.來自前列腺，無精子精液也適用；4.非特異：部分水果、蔬菜，避孕藥…磷酸苯二鈉AP萘酚鐵氰化鉀氨基安替比林醌類磷酸苯二鈉試驗(yàn)(Kind-King

test)酸性磷酸酶緩沖液：磷酸苯二鈉，4-氨基安替比林，檸檬酸，

氫氧化鈉，氯仿顯色液：鐵氰化鉀，氫氧化鈉，碳酸氫鈉磷酸苯二鈉試驗(yàn)(Kind-King

test)陽性：立即出現(xiàn)紅色，深淺與濃度有關(guān)陰性：橙黃色（不是精斑或酶已破壞）靈敏度：1：20000倍稀釋，血液不影響非特異：臟器組織或其它分泌物、排泄物（稀釋/加熱）碘化碘鉀結(jié)晶試驗(yàn)（Florencecrystaltest）卵磷脂（精液）碘膽堿靈敏度：1：400干擾：血液或大小便會干擾結(jié)晶生成太新鮮/陳舊，水洗，細(xì)菌污染均可呈陰性非特異：凡含膽堿的分泌物，昆蟲/植物汁液等褐色結(jié)晶碘-碘化鉀試劑分解碘化碘鉀結(jié)晶精斑預(yù)試驗(yàn)?zāi)康?篩選可疑精斑特點(diǎn)：方法簡單，靈敏度高方法：僅酸性磷酸酶檢驗(yàn)靈敏度較高

實(shí)踐中可以不經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)，直接進(jìn)行確證；預(yù)實(shí)驗(yàn)陰性，有時也需進(jìn)行確證。精斑確證試驗(yàn)檢測精液特有成分陽性結(jié)果可確認(rèn)精斑方法：精子檢出法免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)（抗人精血清沉淀反應(yīng)、前列腺特異抗原檢測）最簡便、最可靠具有典型而穩(wěn)定的形態(tài)典型精子（精子頭）存在，即可肯定精斑未檢出精子不能否定精斑精子檢出法精斑檢材處理上清：抗人精/PSA；中和試驗(yàn)沉渣：涂片找精子DNA染色方法精子染色單染法復(fù)染法藻紅亞甲藍(lán)蘇木素精子和基質(zhì)染成相同的顏色HE染色酸性品紅亞甲藍(lán)胭脂紅精子頭、尾和基質(zhì)染成不同的顏色藻紅染色（頭和尾均為紅色）酸性品紅亞甲藍(lán)染色（頭部紅色，尾部藍(lán)色）一個完整精子/幾個典型精子頭即可確證精斑精子檢出時限活精子：陰道3~8h；宮頸2—5d；子宮、輸卵管1~10d死精子：陰道3~9d；宮頸17d與被害人體位、活動情況及月經(jīng)周期有關(guān)取材部位：活體陰道拭子1.5~2d；尸體3w

（陰道后穹窿及宮頸刮片）免疫學(xué)試驗(yàn)——抗人精血清BlankcontrolHumancontrolSheepcontrolQ1Q2Q3Humanantiserumagargeldiffusiontest醌是對含有環(huán)己二烯二酮構(gòu)造的一類化合物的總稱。

前列腺特異抗原

（prostatespecificantigen，PSA）γ－精漿蛋白，由人類前列腺上皮細(xì)胞分泌，是精漿特有糖蛋白，分子量30000，故名p30性質(zhì)穩(wěn)定，是確證精斑的理想標(biāo)記?？梗璸30有高度種屬特異性和前列腺器官特異性。靈敏、特異，不受陰道液、唾液及有無精子影響。加樣區(qū)反應(yīng)區(qū)吸附區(qū)檢測線鼠抗人p30質(zhì)控線羊抗鼠IgG玻璃纖維免疫膠體金鼠抗人p30硬質(zhì)塑料底板玻璃纖維膠體金p30抗原檢測試紙條——PSA試紙條精斑的個人識別傳統(tǒng)的遺傳標(biāo)記：ABO血型、酶型、血清型等DNA多態(tài)性標(biāo)記抗體凝集能力下降或消失不凝集具有相應(yīng)的抗原精斑ABO血型測定——中和試驗(yàn)設(shè)置已知對照；注意假陰性，抗血清必須標(biāo)化！精斑浸液(可溶性抗原)抗A抗B抗H30分鐘A-cellB-cellO-cell凝集不凝集不凝集無A原理：可溶性血型抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，使其凝集紅細(xì)胞能力下降或消失有B有HB精斑DNA分析精子DNA提取精子細(xì)胞核膜是富含二硫鍵的交聯(lián)蛋白組成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，必須在DTT等試劑作用下使－S-S－還原成－SH，核蛋白才能被SDS、蛋白酶K分解，釋放出DNAY-STR在性犯罪案件中的意義不受女性成分干擾輪奸案父系遺傳，可利用家系排查案例1李某某，女性，20歲，被殺害在戶外，尸檢提取陰道內(nèi)、外拭子。結(jié)果PSA試劑條檢測均為陰性。問題：懷疑性侵犯的案件，尸體上如何提取精斑？答案：該案件法醫(yī)又行尸體解剖，在死者會厭處取擦拭物送檢，結(jié)果PSA試劑條檢測陽性。Sexualassault:wheretofindseminalstain?②現(xiàn)場紙巾、被褥、毛巾、地面…①受害人：陰道拭子（后穹窿）宮頸刮片會陰大腿內(nèi)側(cè)腹壁臀部，直腸口腔（會厭）內(nèi)褲及衣物……紫外輔助光源！SexualassaultCollectionofotherbiologicalevidence分點(diǎn)提取，陰涼干燥，紙袋包裝！ControlsamplesVictim，spouse，suspectSalivastain

唾液斑Tracetissue

指甲縫微量組織

案例2某年某月某日，某市一四歲女孩被強(qiáng)奸。由于陰道嚴(yán)重?fù)p傷，大量出血，回家后女孩的母親將其粘有大量血跡的褲子換下放入一大盆內(nèi)放水浸泡準(zhǔn)備清洗問題：檢材已被大量稀釋，如何獲取精子？答案：精子在水中不會裂解，多次離心取沉渣案例3楊某某，女性，14歲，父母到派出所報稱該女孩已失蹤3周。后派出所組織人員到后山上進(jìn)行搜索，在一山洞發(fā)現(xiàn)一高度腐敗尸體。問題：高腐尸體如何提取精斑？答案：尸體陰道內(nèi)的精子數(shù)目多且保存時間長，檢出率的高低與陰道提取部位有關(guān)（宮頸刮片和陰道后穹隆部拭子較高）。在本案中，雖尸體已