微生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)

（生物科技行業(yè)）微生物學(xué)

檢驗(yàn)基本技術(shù)

2020年4月

多年的企業(yè)咨詢顧問經(jīng)驗(yàn)，經(jīng)過實(shí)蟋畫以落地執(zhí)行的卓越管理方案，值得您下載擁有!

微生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)1

微生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)及相關(guān)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，各學(xué)科相互交叉和滲透，醫(yī)學(xué)微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)已深入到

細(xì)胞、分子和基因水平，許多新技術(shù)、新方法已在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室得到廣泛應(yīng)用。醫(yī)學(xué)微生物

學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基本任務(wù)之一是利用微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)，準(zhǔn)確、快速檢驗(yàn)和鑒定臨床標(biāo)本中的微生物，

并對引起感染的微生物進(jìn)行耐藥性監(jiān)測，為臨床對感染性疾病診斷、治療、流行病學(xué)調(diào)查及研究

等提供科學(xué)依據(jù)。

第一節(jié)微生物形態(tài)學(xué)檢查

細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查是細(xì)菌檢驗(yàn)的重要方法之一，它是細(xì)菌分類和鑒定的基礎(chǔ)，可根據(jù)其形態(tài)、結(jié)構(gòu)

和染色反應(yīng)性等，為進(jìn)一步鑒定提供參考依據(jù)。

一、顯微鏡檢查

由于細(xì)菌個(gè)體微小，肉眼不能看到，必須借助顯微鏡的放大才能看到。一般形態(tài)和結(jié)構(gòu)可用光學(xué)

顯微鏡觀察，其內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)則需用電子顯微鏡才能看清楚。常用顯微鏡有如下幾種。

1.普通光學(xué)顯微鏡

采用自然光或燈光為光源，其波長約為顯微鏡的分辨率為波長的二分之一，即0.2pm,

而肉眼可見的最小形象為0.2mm。故用油（浸）鏡放大1000倍，能將0.2pm的微粒放大成肉

眼可見的0.2mm。普通光學(xué)顯微鏡可用于細(xì)菌、放線菌和真菌等的觀察。

2.暗視野顯微鏡

常用于觀察不染色微生物形態(tài)和運(yùn)動(dòng)。在普通顯微鏡安裝暗視野聚光器后，光線不能從中間直接

透入，視野呈暗色，當(dāng)標(biāo)本接受從聚光器邊緣斜射光后可發(fā)生散射，因此可在暗視野背景下觀察

到光亮的微生物如細(xì)菌或螺旋體等。

3.相差顯微鏡

相差顯微鏡利用相差板的光珊作用，改變直射光的光位相和振幅，將光相的差異轉(zhuǎn)換為光強(qiáng)度差。

在相差顯微鏡下，當(dāng)光線透過不染色標(biāo)本時(shí)，由于標(biāo)本不同部位的密度不一致而引起光相的差異,

可觀察到微生物形態(tài)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)和運(yùn)動(dòng)方式等。

4.熒光顯微鏡

熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡基本相同，主要區(qū)別在于光源、濾光片用I聚光器。目前大多數(shù)使用

的是落射光裝置，常用高壓汞燈作為光源，可發(fā)出紫外光或藍(lán)紫光。濾光片有激發(fā)濾光用口吸收

濾光片二種。用藍(lán)光的熒光顯微鏡除可用一般明視野聚光器外，也可用暗視野聚光器，以加強(qiáng)熒

光與背景的對比。本法適用于對熒光色素染色或與熒光抗體結(jié)合的細(xì)菌的檢測或鑒定。

5.電子顯微鏡

用電子流作為光源，波長與可見光相比差幾萬倍，大大提高了分辨力，并用磁性電圈作為光學(xué)放

大系統(tǒng)，放大倍數(shù)可達(dá)數(shù)萬倍或幾十萬倍，常用于病毒顆粒和細(xì)菌超微結(jié)構(gòu)的觀察。

二、不染色標(biāo)本檢查

不染色標(biāo)本T殳可用于觀察細(xì)菌形態(tài)、動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)情況。細(xì)菌未染色時(shí)無色透明，在顯微鏡下主

要靠細(xì)菌的折光率與周圍環(huán)境的不同來進(jìn)行觀察。有鞭毛的細(xì)菌運(yùn)動(dòng)活潑，無鞭毛的細(xì)菌則呈不

規(guī)則布朗運(yùn)動(dòng)。梅毒蒼白密螺旋體、鉤端螺旋體、彎曲桿菌等的活菌各有特征鮮明的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)

方式，具有診斷意義。常用的方法有壓滴法、懸滴法和毛細(xì)管法等。

1.懸滴法

在潔凈凹玻片的凹孔四周涂上凡士林，用接種環(huán)取一環(huán)菌懸液放在蓋玻片中央，再將凹玻片的凹

孔對準(zhǔn)蓋玻片中央的液滴并蓋上，然后迅速翻轉(zhuǎn)，輕壓蓋玻片，使其與凹孔邊緣的凡士林粘緊封

閉后置高倍鏡下（或暗視野）觀察。

2.壓滴法

用接種環(huán)取一環(huán)菌懸液置于潔凈玻片的中央，在菌懸液上輕輕蓋上一蓋玻片，注意避免產(chǎn)生氣泡

并防止菌懸液外溢，靜止數(shù)秒鐘后置高倍鏡下明視野（或暗視野）觀察。

3.毛細(xì)管法

主要用于厭養(yǎng)菌動(dòng)力的檢查。通常選用60~70mm長。0.5~1.0mm孔徑的毛細(xì)管虹吸厭養(yǎng)菌懸

液后，用火焰將毛細(xì)管兩端熔封。并用塑膠紙將毛細(xì)管固定在載玻片上，置高倍鏡下暗視野觀察。

三、染色標(biāo)本檢直

細(xì)菌標(biāo)本經(jīng)染色后，由于細(xì)菌與周圍環(huán)境間在顏色上形成鮮明對比，故在普通光學(xué)顯微鏡下可清

楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)特征（如細(xì)菌的大小、形狀、排列等）和某些特殊結(jié)構(gòu)（如莢膜、鞭毛、

芽泡等），并可根據(jù)染色反應(yīng)性對細(xì)菌加以分類鑒定。

（-）細(xì)菌雉的一嬲辨

細(xì)菌染色的一般程序是：涂片（干燥）一固定一染色（媒染）一（脫色）一（復(fù)染）。

1.涂片制備

血液、分泌物、排泄物、穿刺液和液體培養(yǎng)物，直接在載玻片上作薄膜涂片；尸檢或感染動(dòng)物組

織，病變局部涂抹采樣的棉拭子直接涂片。固體培養(yǎng)基上的菌落或菌苔的制片，先用接種環(huán)取一

環(huán)生理鹽水置載玻片中央，再用無菌接種環(huán)取少量的培養(yǎng)物在生理鹽水中磨勻，涂布成lcm2大

小的涂面，置室溫下自然干燥或遠(yuǎn)火慢慢烘干。

2.固定

目的是殺死細(xì)菌，凝固細(xì)菌蛋白及結(jié)構(gòu)，便于染色；促使細(xì)菌粘附在載玻片上，避免在水洗過程

中被水沖掉；改變細(xì)菌對染料的通透性，有利于菌細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的染色。通常用火焰加熱固定，將

已干燥的涂片在火焰中迅速通過3次，以手背皮膚接觸玻片不燙為佳。

3.染色

根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康牟煌?，選擇不同的染色方法進(jìn)行染色。染色時(shí)滴加染液,以復(fù)蓋標(biāo)本為度。

4.媒染

凡能增強(qiáng)染料和被染物的親和力，使染料固定于被染物及能引起細(xì)胞膜通透性改變的物質(zhì)，稱媒

染劑。常用的有明帆、猱酸、金屬鹽和碘等，也有用加熱法促進(jìn)著色。媒染劑可用于初染與復(fù)染

之間，也可用于固定之后或含于固定液、染色中。

5.脫色

凡能使已著色的被染物脫去顏色的化學(xué)試劑稱為脫色劑。常用乙醇、丙酮等作為脫色劑。脫色劑

可以查出細(xì)菌與染料結(jié)合的穩(wěn)定程度，作為鑒別染色之用。

6.復(fù)染

已脫色處理的細(xì)菌或其結(jié)構(gòu)常以復(fù)染液作復(fù)染以便于觀察。復(fù)染液與初染液的顏色不同而成一鮮

明對比。復(fù)染不宜太強(qiáng)，以免掩蓋初染的顏色。

(二)常用染色法(染液配方見第8章)

1.單染色法

只用一種染料染色。由于大多數(shù)細(xì)菌胞漿內(nèi)含有酸性物質(zhì)，可與堿性染料結(jié)合，故常用呂氏美藍(lán)、

結(jié)晶紫和稀釋石碳酸復(fù)紅等染液。此法可觀察細(xì)菌的大小、形態(tài)與排列，不能顯示細(xì)菌的結(jié)構(gòu)與

染色特性。

2.復(fù)染色法

用兩種或兩種以上不同染料可將細(xì)菌染成不同的顏色，除可觀察細(xì)菌的大小、形態(tài)與排列外，還

反應(yīng)出細(xì)菌染色特性，具有鑒別細(xì)菌種類的價(jià)值。常用的有革蘭染色法和抗酸染色法。

(1)革蘭染色：①細(xì)菌涂片經(jīng)火焰固定，加結(jié)晶紫染液染Imin,清水沖去染液。②加碘液媒染

lmin,水洗，甩干。③用95%乙醇脫色，輕輕搖動(dòng)約30s,至無紫色洗落為止，水洗，甩干。

④加稀釋石碳酸復(fù)紅或沙黃染液數(shù)滴進(jìn)行復(fù)染，約30s,水洗。⑤干后顯微鏡下鏡檢觀察結(jié)果，

革蘭陽性菌染成紫色，革蘭陰性菌為紅色。

(2)抗酸染色：萋-尼(Ziehl-Neelse)抗酸染色法：①細(xì)菌涂片經(jīng)火焰固定，加石炭酸復(fù)紅溶液，

徐徐加熱至有蒸氣出現(xiàn)，切不可沸騰。染液因蒸發(fā)減少時(shí)，應(yīng)隨時(shí)補(bǔ)充，防止染液蒸干。持續(xù)染

5min(奴卡菌需要加長時(shí)間)，水洗，甩干。②滴加3%鹽酸乙醇脫色,不時(shí)搖動(dòng)玻片至無紅色

脫落為止，水洗，甩干。③加呂氏美藍(lán)復(fù)染液數(shù)滴復(fù)染Imin,水洗。④干后顯微鏡下鏡檢觀察

結(jié)果，抗酸桿菌染成紅色，非抗酸桿菌為藍(lán)色。

金胺羅丹明染色法：①細(xì)菌涂片固定后加第液②棄去第液后加第液染

0-B130~90so12

③用第液脫色,水洗。④滴加第液染,水洗，⑤干后置熒光顯微鏡下

15min03l~2min430s

鏡檢觀察結(jié)果在淡藍(lán)色背景下，抗酸桿菌呈紅色，其它細(xì)菌和細(xì)胞呈藍(lán)色。

3.特殊染色法

(1)鞭毛染色(改良Ryu法)：①玻片的處理將新載玻片浸泡在95%乙醇中。臨用時(shí)取出，以

干凈紗布擦干。②在玻片上滴蒸微水1滴。③擬僦培養(yǎng)物少許,輕觸蒸憎水滴頂部，僅允許極少

量細(xì)菌進(jìn)入水滴，不可攪動(dòng)，以免鞭毛脫落。④置35℃孵箱自然干燥，不能用火焰固定，滴加

鞭毛染液染l~2min輕輕水洗。⑤干后顯微鏡鏡檢觀察結(jié)果鞭毛^菌體呈紫色。

(2)異染顆粒染色(阿爾培托法)：①細(xì)菌涂片經(jīng)火焰固定，加甲液染色3~5min.水洗。②滴加

乙液，染Imin。水洗。③干后顯微鏡鏡檢觀察結(jié)果菌體呈綠色，異染顆粒呈藍(lán)黑色，用于白喉棒

狀桿菌染色。

(3)莢膜染色：①奧爾特莢膜染色法：將已固定的細(xì)菌涂片滴加3%沙黃染液，用火焰加溫染色，

持續(xù)3min,冷卻后水洗，待干鏡檢。結(jié)果：菌體呈褐色，莢膜呈黃色，此法主要用于碳疽芽胞

桿菌。②Hiss氏硫酸銅法：染液：第一液為結(jié)晶紫乙醇飽和液5ml加蒸儲(chǔ)水95ml的混合液；第

二液為20%硫酸銅水溶液。方法：細(xì)菌涂片自然干燥，乙醇固定。滴加第一液，微加熱染Imin。

再用第二液將涂片上的染液洗去，勿再水洗，傾去硫酸銅液，以吸水紙吸干鏡檢。結(jié)果：菌體及

背景呈紫色，莢膜呈鮮藍(lán)色或不著色。

(4)芽胞染色：染液：第一液為萋-納氏石炭酸復(fù)紅液，第二液為95%乙醇，第三液為堿性美

藍(lán)液。方法:將已固定的細(xì)菌涂片滴加第一液，微加熱染5min，冷卻后水洗。用第二液脫色2min,

水洗。加第三液復(fù)染lmin,水洗，待干鏡檢。結(jié)果：菌體呈藍(lán)色，芽胞呈紅色。

4.負(fù)染色法

背景著色而菌體本身不著色的染色為負(fù)染色法。最常見的是墨汁負(fù)染色法，用來觀察真菌及細(xì)菌

莢膜等。在標(biāo)本涂片處滴加染液，混合后加上蓋玻片(勿產(chǎn)生氣泡)，輕壓。在低倍鏡下尋找有莢

膜的菌細(xì)胞，轉(zhuǎn)高倍鏡或油鏡確認(rèn)，如新型隱球菌可見寬厚透亮的莢膜，背景為黑色。

5.熒光染色法

經(jīng)熒光素染色的細(xì)菌，或熒光素標(biāo)記的熒光抗體與相應(yīng)抗原的細(xì)菌、病毒結(jié)合形成的復(fù)合物，在

熒光顯微鏡下發(fā)出熒光。

第二節(jié)微生物培養(yǎng)與分離方法

大多數(shù)細(xì)菌均可以通過人工方法培養(yǎng)，而衣原體和病毒的分離培養(yǎng)往往需要活組織、雞胚、特殊

細(xì)胞株及動(dòng)物接種。只有將微生物培養(yǎng)出來才能對它進(jìn)行研究、鑒定和應(yīng)用。

一、接種與分離方法

根據(jù)待檢標(biāo)本的性質(zhì)、培養(yǎng)目的和所用培養(yǎng)基的種類，采用不同的接種方法。

1.平板劃統(tǒng)離培養(yǎng)法

對混有多種細(xì)菌的臨床標(biāo)本，采用劃線分離和培養(yǎng)，使原來混雜在一起的細(xì)菌沿劃線在瓊脂平板

表面分離，得到分散的單個(gè)菌落，以獲得純種。臨床送檢的標(biāo)本如痰、咽試子、泌尿生殖道的分

泌物和糞便等細(xì)菌檢驗(yàn)均需要借助瓊脂平板劃線分離目的菌。平板劃線分離法通常有兩種方法：

(1)分區(qū)劃線分離法：此法常用于含菌量較多的標(biāo)本如痰、泌尿生殖道的分泌物和糞便或混合

細(xì)菌的分離。先用接種環(huán)挑取標(biāo)本涂布于瓊脂平板1區(qū)(占培養(yǎng)基總面積的1/4)并作數(shù)條劃線,

再于2、3、4區(qū)依次劃線。每劃完一個(gè)區(qū)域，均將接種環(huán)燒灼滅菌1次，冷后再劃下一區(qū)域，每

一區(qū)域的劃線均與上一區(qū)域的劃線交接1~3次。一個(gè)成功分區(qū)劃線的平板，培養(yǎng)后分別觀察1

區(qū)形成菌苔，2區(qū)菌落連成線，3區(qū)和4區(qū)可分離到單個(gè)菌落。

(2)連續(xù)劃線分離法：此法常用于含菌量不多的標(biāo)本或培養(yǎng)物中的細(xì)菌分離培養(yǎng)。方法是先將

接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕涂抹，然后再用接種環(huán)或拭子在平板表面曲線連續(xù)劃線接種,直

至劃滿瓊脂平板表面。

2.瓊脂斜面接種法

主要用于菌落的移種，以獲得純種進(jìn)行鑒定和保存菌種等。用接種環(huán)(針)挑取單個(gè)菌落或培養(yǎng)

物，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線，然后再從底部沿直線向上曲折連續(xù)劃線，直至斜面近頂

端處止。生化鑒定培養(yǎng)基斜面接種，用接種針擬僦待鑒定細(xì)菌的菌落，從斜面中央垂直刺入底部,

抽出后在斜面上由下至上曲折劃線接種。

3.穿刺接種法

此法多用于半固體培養(yǎng)基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種，半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可

用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力。接種時(shí)用接種針挑取菌落，由培養(yǎng)基中央垂直刺入至距管底0.4cm處，再

沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養(yǎng)基，穿刺高層部分，退出接種針后直接

劃線接種斜面部分。

4.液體培養(yǎng)基接種法

用于各種液體培養(yǎng)基如肉湯、蛋白陳水'糖發(fā)酵管等的接種。用接種環(huán)到做單個(gè)菌落，傾斜液體

培養(yǎng)管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立后液體淹沒接種物為準(zhǔn)）.此接種法應(yīng)避

免接種環(huán)與液體過多接觸，更不應(yīng)在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實(shí)驗(yàn)室污染。

5.傾注平板法

本法主要用于飲水、飲料、牛乳和尿液等標(biāo)本中的細(xì)菌計(jì)數(shù)。取純培養(yǎng)物的稀釋或原標(biāo)本1ml

至無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再將已融化并冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基15~20ml傾注入該無菌培養(yǎng)

皿內(nèi)，混勻，待凝固后置37P培養(yǎng)，長出菌落后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，以求出每毫升標(biāo)本中所含菌數(shù)。

先數(shù)6個(gè)方格（每格為lcm2）中菌落數(shù)，求出每格的平均菌落數(shù)，并算出平皿直徑，然后按下

列公式計(jì)數(shù)，求出每毫升標(biāo)本中的細(xì)菌數(shù)。

全平板菌落數(shù)=每方格的平均菌落數(shù)x〃r2

每ml標(biāo)本中的細(xì)菌數(shù)=全平板菌落數(shù)x稀釋倍數(shù)

6.涂布接種法

本法多用于紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)的細(xì)菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養(yǎng)基表面，然后

用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反復(fù)涂布，使被接種液均勻分布于瓊脂表面，然后貼

上藥敏紙片，或直接培養(yǎng)，本法經(jīng)培養(yǎng)后細(xì)菌形成菌苔。

二、細(xì)菌的培養(yǎng)方法

根據(jù)不同的標(biāo)本及不同的培養(yǎng)目的，可選用不同的培養(yǎng)方法。通常把細(xì)菌的培養(yǎng)方法分為需氧培

養(yǎng)、二氧化碳培養(yǎng)、微需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)四種。

1.需氧培養(yǎng)

是指需氧菌或兼性厭氧菌在有氧條件下的培養(yǎng)，將已接種好的平板、斜面、液體培養(yǎng)基等在空氣

中置35℃孵育箱內(nèi)孵育18~24h,無特殊要求的細(xì)菌均可生長。少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌需要培養(yǎng)

3-7d甚至1個(gè)月才能生長。為使孵育箱內(nèi)保持一定的濕度，可在其內(nèi)放置一杯水。對培養(yǎng)時(shí)間

較長的培養(yǎng)基，接種后應(yīng)將試管口塞好棉塞或硅膠塞后用石蠟-凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂。

2.二氧化碳培養(yǎng)

某些細(xì)菌，如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、布魯氏菌和流感嗜血桿菌等的培養(yǎng)，特

別是在初次分離時(shí)，須在5%~10%二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)才能生長。常用的培養(yǎng)法如下。

(1)二氧化碳培養(yǎng)箱法：二氧化碳孵箱能自動(dòng)調(diào)節(jié)二氧化碳的含量、溫度和濕度，培養(yǎng)物置于

孵育箱內(nèi)閣，孵育一定時(shí)間后可直接觀察生長結(jié)果。

(2)燭缸培養(yǎng)法：取有蓋磨口標(biāo)本缸或玻璃干燥器，將接種好的培養(yǎng)基放入缸內(nèi)，點(diǎn)燃蠟燭后

放在缸內(nèi)稍高于培養(yǎng)物的位置上,缸蓋或缸口均涂以凡士林，加蓋密閉。因缸內(nèi)蠟燭燃燒氧逐漸

減少，數(shù)分鐘后蠟燭自行熄滅，此時(shí)容器內(nèi)二氧化碳含量約占5%~10%o將缸置于35℃普通孵

育箱內(nèi)孵育。

(3)氣袋法：選用無毒透明的塑料袋，將已接種標(biāo)本的培養(yǎng)皿放入袋內(nèi)，盡量祛除袋內(nèi)空氣后

將開口處折疊并用彈簧夾夾緊袋口。使袋呈密閉狀態(tài)，執(zhí)斷袋內(nèi)已置的二氧化碳產(chǎn)氣管(安靦)

產(chǎn)生二氧化碳，數(shù)分鐘內(nèi)就可達(dá)到需要的二氧化碳培養(yǎng)環(huán)境，置于35°(:孵育箱內(nèi)孵育。

（4）化學(xué)法：常用碳酸氫鈉-鹽酸法。按每升容積稱取碳酸氫鈉0.4g與濃鹽酸0.35ml比例，分

別置容器內(nèi)，連同容器置于玻璃缸內(nèi)，蓋緊密封，傾斜缸位使鹽酸與碳酸氫鈉接觸而生成二氧化

碳。于35°。瞭育箱內(nèi)孵育。

3.微需氧培養(yǎng)

微需氧菌培養(yǎng)在大氣中及絕對無氧環(huán)境中均不能生長，在含有5%-6%氧氣，5%-10%二氧化碳

和85%氮?dú)獾臍怏w環(huán)境中才可生長,將標(biāo)本接種到培養(yǎng)基上，置于上述氣體環(huán)境中，35℃進(jìn)行

培養(yǎng)即微需氧培養(yǎng)法。

4.厭氧培養(yǎng)

厭氧菌對氧敏感，培養(yǎng)過程中需造成低氧化還原電勢的厭氧環(huán)境。厭氧培養(yǎng)常用的方法有：物理

法、化學(xué)法、生物法。如厭氧罐培養(yǎng)法、氣袋法、厭氧手套箱法、需氧菌共生厭氧法等。

三、細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長特性

1.固體培養(yǎng)基

標(biāo)本或液體培養(yǎng)物劃線接種到固體培養(yǎng)基表面后，單個(gè)細(xì)菌經(jīng)分裂繁殖可形成一個(gè)肉眼可見的細(xì)

菌集團(tuán),稱為菌落（colony）.

（1）菌落的形態(tài)特征：大小、形狀（露滴狀、圓形、菜花樣、不規(guī)則等）、突起或扁平、凹陷、邊

緣（光滑、波形、鋸齒狀、卷發(fā)狀等）、顏色（紅色、灰白色、黑色、綠色、無色、黃色等）、

表面（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。據(jù)細(xì)菌菌落表面特征不

同，可將菌落分為3型：①光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、濕潤、邊緣整齊，新分離

的細(xì)菌大多呈光滑型菌落。②粗糙型菌落（R型菌落）：菌落表面粗糙、干燥、呈皺紋或顆粒狀,

邊緣大多不整齊。R型菌落多為S型細(xì)菌變異失去菌體表面多糖或蛋白質(zhì)形成。R型細(xì)菌抗原不

完整，毒力和抗吞噬能力都比S型細(xì)菌弱。但也有少數(shù)細(xì)菌新分離的毒力株就是R型，如炭疽泡

桿菌、結(jié)核分枝菌等。③粘液型菌落（M型菌落）：菌落粘稠、有光澤、似水珠樣。多見于厚莢

膜或豐富粘液層的細(xì)菌、結(jié)核桿菌等。

（2）菌落溶血特征：菌落溶血有下列3種情況。①a溶血：又稱草綠色溶血，菌落周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)

l~2mm的草綠色環(huán),為高鐵血紅蛋白所致；②B溶血：又稱完全溶血，菌落周圍形成一個(gè)完全

清晰透明的溶血環(huán)，是細(xì)菌產(chǎn)生的溶血素使紅細(xì)胞完全溶解所致；③Y溶血：即不溶血,菌落周

圍的培養(yǎng)基沒有變化，紅細(xì)胞沒有溶解或缺損。

（3）色素：有些細(xì)菌產(chǎn)生水溶性色素，使菌落和周圍的培養(yǎng)基出現(xiàn)綠色、金黃色、白色、橙色、檸

檬色等顏色，產(chǎn)生的色素有水溶性或脂溶性。

（4）氣味：某些細(xì)菌在培養(yǎng)基中生長繁殖后可產(chǎn)生特殊氣味，如銅綠假單胞菌（生姜?dú)馕秲鹤冃?/p>

桿菌（巧克力燒焦的臭味）、厭氧梭菌（***的惡臭味）、白色假絲酵母菌（酵母味）和放線菌（泥

土味）等。

2.液體培養(yǎng)基

細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中有3種生長現(xiàn)象：大多數(shù)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基生長繁殖后呈均勻混濁；少數(shù)鏈

狀排列的細(xì)菌如鏈球菌、炭疽芽胞桿菌等則呈沉淀生長；枯草芽胞桿菌、結(jié)核分枝桿菌和銅綠假

單胞菌等專性需氧菌一般呈表面生長，常形成菌膜。

3.半固體培養(yǎng)基

半固體培養(yǎng)基主要用于細(xì)菌動(dòng)力試驗(yàn)，有鞭毛的細(xì)菌除了沿穿刺線生長外，在穿刺線兩側(cè)也可見

羽毛狀或云霧狀混濁生長。無鞭毛的細(xì)菌只能沿穿刺線呈明顯的線狀生長，穿刺線兩邊的培養(yǎng)基

仍然澄清透明，為動(dòng)力試驗(yàn)陰性。

第三節(jié)細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)

各種細(xì)菌具有各自獨(dú)特的酶系統(tǒng)，因而對底物的分解能力不同，其代謝產(chǎn)物也不同.用生物化學(xué)

方法測定這些代謝產(chǎn)物,可用來區(qū)別和鑒定細(xì)菌的種類。利用生物化學(xué)方法來鑒別不同細(xì)菌,稱

為細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)或稱生化反應(yīng)。生物化學(xué)試驗(yàn)的方法很多，主要有以下幾類。

一、碳水化合物的代謝試驗(yàn)

1.糖（醇、昔）類發(fā)酵試驗(yàn)

（1）原理：不同種類細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖（醇、甘）類的酶，因而對各種糖（醇、甘）類的代

謝能力也有所不同，即使能分解某種糖（醇、苜）類，其代謝產(chǎn)物可因菌種而異。檢查細(xì)菌對培

養(yǎng)基中所含糖（醇、苜）降解后產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的能力，可用以鑒定細(xì)菌種類。

（2）方法：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（如酚紅肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基pH7.4）加入0.5~1.0%（w/v）的特定糖（醇、

昔）類。所使用的糖（醇、甘）類有很多種，根據(jù)不同需要可選擇單糖、多糖或低聚糖、多元醇

和環(huán)醇等，見表6-4-1。將待鑒定的純培養(yǎng)細(xì)菌接種入試驗(yàn)培養(yǎng)基中,置35℃孵育箱內(nèi)孵育數(shù)小

時(shí)到兩周（視方法及菌種而定）后，觀察結(jié)果。若用微量發(fā)酵管，或要求培養(yǎng)時(shí)間較長時(shí)，應(yīng)注

意保持其周圍的濕度，以免培養(yǎng)基干燥。

⑶結(jié)果：能分解糖（醇、甘）產(chǎn)酸的細(xì)菌，培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應(yīng)（如酚紅變?yōu)辄S色），

產(chǎn)氣的細(xì)菌可在小倒管（Durham小管）中產(chǎn)生氣泡，固體培養(yǎng)基則產(chǎn)生裂隙。不分解糖則無變

化。

（4）應(yīng)用：糖（醇、甘）類發(fā)酵試驗(yàn),是鑒定細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗(yàn)中最主要的試驗(yàn)，不同細(xì)菌可發(fā)

酵不同的糖（醇、昔）類，如沙門菌可發(fā)酵葡萄糖，但不能發(fā)酵乳糖，大腸埃希菌則可發(fā)酵葡萄

糖和乳糖。即便是兩種細(xì)菌均可發(fā)酵同一種糖類，其發(fā)酵結(jié)果也不盡相同，如志賀菌和大腸埃希

菌均可發(fā)酵葡萄糖，但前者僅產(chǎn)酸，而后者則產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，故可利用此試驗(yàn)鑒別細(xì)菌。

表6-4-1常用于細(xì)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)的糖、醇類

單糖四碳糖：赤辭糖，五碳糖：核糖核酮糖木糖阿拉伯糖,六碳糖：葡萄糖果糖半孚廉甘露糖

雙糖蔗糖（葡萄糖+果糖）乳糖（葡萄糖+半乳糖）麥芽糖（兩分子葡萄糖）

三糖棉子糖（葡萄糖+果糖+半乳糖）

多糖菊糖（多分子果糖）淀粉

醇類側(cè)金盞花醇衛(wèi)茅醇甘露醇山梨醇

非糖類肌醇

2.葡萄糖代謝類型鑒別試驗(yàn)

（1）原理：細(xì)菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型；能進(jìn)行無氧降解的為

發(fā)酵型；不分解葡萄糖的細(xì)菌為產(chǎn)堿型。發(fā)酵型細(xì)菌無論在有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖，

而氧化型細(xì)菌在無氧環(huán)境中則不能分解葡萄糖。本試驗(yàn)又稱氧化發(fā)酵（0/F或Hugh-Leifson,

HL）試驗(yàn)，可用于區(qū)別細(xì)菌的代謝類型。

（2）方法：挑取少許純培養(yǎng)物（不要從選擇性平板中利僦）接種2支HL培養(yǎng)管中，在其中一管加

入高度至少為0.5cm的無菌液體石蠟以隔絕空氣（作為密封管）,另一管不加（作為開放管）o

置35°QP字箱孵育48h以上。。

（3）結(jié)果：兩管培養(yǎng)基均不產(chǎn)酸（顏色不變）為陽性；兩管都產(chǎn)酸（變黃）為發(fā)酵型；加液體石蠟

管不產(chǎn)酸，不加液體石蠟管產(chǎn)酸為氧化型。

（4）應(yīng)用：主要用于腸桿菌科與其它非發(fā)酵菌的鑒別。腸桿菌科、弧菌科細(xì)菌為發(fā)酵型，非發(fā)酵菌

為氧化型或產(chǎn)堿型。也可用于鑒別葡萄球菌（發(fā)酵型）與微球菌（氧化型）。

3.甲基紅（MR）試驗(yàn)

Q）原理：某些細(xì)菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步被分解為甲酸、乙酸

和琥珀酸等，使培養(yǎng)基pH下降至4.5以下時(shí)，加入甲基紅指示劑呈紅色。如細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)

酸量少，或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其它物質(zhì)（如醇、醛、酮、氣體前1水），培養(yǎng)基pH在5.4以

上，加入甲基紅指示劑呈桔黃色。

⑵方法：將待試菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白月東水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培養(yǎng)基中

滴加5~6滴甲基紅指示劑，立即觀察結(jié)果。

（3）結(jié)果判定：呈現(xiàn)紅色者為陽性，桔黃色為陰性，桔紅色為弱陽性。

(4)應(yīng)用：常用于腸桿菌科內(nèi)某些種屬的鑒別，如大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌，前者為陽性，后者為

陰性。腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬為陰性，而沙門菌屬、志賀菌屬、枸椽酸桿菌屬和變形桿菌屬等

為陽性。

4邛-半乳糖苗酶試驗(yàn)(ONPG試驗(yàn))

(1)原理：孚腐發(fā)酵過程中需要乳糖通透酶和P-半孚腐昔酶才能快速分解。有些細(xì)菌只有半乳糖

首酶，因而只能遲緩發(fā)酵乳糖，所有乳糖快速發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的細(xì)菌均可快速水解鄰硝基酚-B-D-

半乳糖昔(O-nitrophenyl-p-D-galactopyranoside,ONPG)而生成黃色的鄰硝基酚。用于枸

檬酸菌屬、亞利桑那菌屬與沙門菌屬的鑒別。

(2)方法：將待試菌接種于ONPG肉湯中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：呈現(xiàn)亮黃色為陽性，無色為陰性。

(4)應(yīng)用：可用于遲緩發(fā)酵乳糖細(xì)菌的快速鑒定，本法對于迅速及遲緩分解學(xué)腐的細(xì)菌均可短時(shí)間

內(nèi)呈現(xiàn)陽性。埃希菌屬、枸椽酸桿菌屬、克雷伯菌屬、哈夫尼亞菌屬、沙雷菌屬和腸桿菌屬等均

為試驗(yàn)陽性，而沙門菌屬、變形桿菌屬和普羅威登斯菌屬等為陰性。

5.VP試驗(yàn)

Q)原理：測定細(xì)菌產(chǎn)生乙酰甲基甲醇的能力。某些細(xì)菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，

丙酮酸進(jìn)一步脫竣形成乙酰甲基甲醇。在堿性條件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，進(jìn)而與培

養(yǎng)基中的精氨酸等含胭基的物質(zhì)結(jié)合形成紅色化合物。即V-P試驗(yàn)陽性。

⑵方法：將待檢菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白月東水中，35℃孵育24~48h，加入50g/La-蔡酚

(95%乙醇溶液)0.6ml,輕輕振搖試管，然后加0.2ml400g/LKOH，輕輕振搖試管30s至lmin,

然后靜置觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：紅色者為陽性，黃色或類似銅色為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的鑒別。本試驗(yàn)常與MR試驗(yàn)一起使用，一般情況下,

前者為陽性的細(xì)菌，后者常為陰性，反之亦然。但腸桿菌科細(xì)菌不一定都這樣規(guī)律，如蜂房哈夫

尼亞菌和奇異變形桿菌的VP試驗(yàn)和MR試驗(yàn)常同為陽性。

6.膽汁七葉甘水解試驗(yàn)

(1)原理：在10%~40%膽汁存在下，測定細(xì)菌水解七葉苜的能力。七葉昔被細(xì)菌分解生成的

七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的枸椽酸鐵的二價(jià)鐵離子發(fā)生反應(yīng)形成黑色化合物。

(2)方法：將被檢菌接種于膽汁七葉苗培養(yǎng)基中，35°(:孵育18~24h后，觀察結(jié)果。

⑶結(jié)果：培養(yǎng)基完全變黑為陽性，不變黑為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于鑒別D群鏈球菌與其它鏈球菌的區(qū)別，以及腸桿菌科的某些種、某些厭氧菌

(如脆弱擬桿菌等)的初步鑒別。D群鏈球菌本試驗(yàn)為陽性。

7.淀粉水解減僉

Q)原理：產(chǎn)生淀粉酶的細(xì)菌能將淀粉水解為糖類，在培養(yǎng)基上滴加碘液時(shí)，可在菌落周圍出現(xiàn)透

明區(qū)。

(2)方法：將被檢菌劃線接種于淀粉瓊脂平板或試管中，35℃孵育18~24h,加入革蘭碘液數(shù)滴，

立即觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：陽性反應(yīng),菌落周圍有無色透明區(qū)，其它地方藍(lán)色；陰性反應(yīng)，培養(yǎng)基全部為藍(lán)色。

⑷應(yīng)用：用于白喉棒狀桿菌生物型的分型，重型淀粉水解試驗(yàn)陽性，輕、中型陰性；芽胞桿菌屬

菌種和厭氧菌某些種的鑒定。

8.甘油復(fù)紅源僉

Q)原理：甘油可被細(xì)菌分解生成丙酮酸，丙酮酸脫去竣基為乙醛，乙醛與無色的復(fù)紅生成醍式化

合物，呈深紫紅色。

(2)方法：取被檢菌接種于甘油復(fù)紅肉湯培養(yǎng)基中，于35℃孵育，觀察2~8&應(yīng)同時(shí)做陰性對

照。

⑶結(jié)果：紫紅色為陽性，與對照管顏色相同為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于沙門菌屬內(nèi)各菌種間的鑒別。傷寒沙門菌、甲(丙)型副傷寒沙門菌、豬霍亂

沙門菌、孔道夫沙門菌和仙臺(tái)沙門菌本試驗(yàn)為陰性，

乙型副傷寒沙門菌結(jié)果不定，其它不常見沙門菌多數(shù)為陽性。

9.葡萄糖酸氧化試驗(yàn)

(1)原理：某些細(xì)菌可氧化葡萄糖酸鉀，生成a-酮基葡萄糖酸。a-酮基葡萄糖酸是一種還原性物

質(zhì)，可與班氏試劑起反應(yīng)，出現(xiàn)棕色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。

⑵方法：將待檢菌接種于葡萄糖酸鹽培養(yǎng)基中(1ml)，置35℃孵育48h,力口入班氏試劑1ml,于

水浴中煮沸l(wèi)Omin并迅速冷卻，觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：出現(xiàn)黃到磚紅色沉淀為陽性。不變或仍為藍(lán)色為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于假單胞菌的鑒定和腸桿菌科菌分群。

二、氨基酸和蛋白質(zhì)的代謝試驗(yàn)

1.硫化氫滕

Q)原理：某些細(xì)菌能分解含硫氨基酸生成硫化氫，與亞鐵離子或鉛離子結(jié)合形成黑色沉淀物。

(2)方法：將待檢菌接種于含硫化物及亞鐵離子的培養(yǎng)基或克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)中，35°QP學(xué)育

18~24h,觀察有無黑色沉淀出現(xiàn)。或用醋酸鉛紙

條,懸掛于KIA管中(白色濾紙，根據(jù)試管大小裁剪適當(dāng)，在熱的50g/L醋酸鉛飽和水溶液中浸

泡，然后于50~60℃烘干，121℃15min高壓滅菌備用),醋酸鉛是最敏感的方法。

⑶結(jié)果：有黑色沉淀物為陽性。

(4)應(yīng)用：主要用于鑒別腸桿菌科細(xì)菌，如沙門菌屬、枸椽酸桿菌屬、變形桿菌屬、爰德華菌屬等

為陽性，其它菌屬大多為陰性。但沙門菌屬中亦有部分硫化氫陰性菌株，如甲型副傷寒、仙臺(tái)、

豬霍亂沙門菌等。

2.明膠液化試驗(yàn)

Q)原理：細(xì)菌分泌的胞外蛋白水解酶(明膠酶)能分解明膠，使明膠失去凝固能力而液化。

⑵方法：將待檢菌接種于明膠培養(yǎng)基中,35℃孵育24h到7d或更長時(shí)間，每24h取出放入4℃

冰箱約2h后，觀察有無凝固。

(3)結(jié)果：如無凝固，則表示明膠已被水解，液化試驗(yàn)陽性。如凝固，則繼續(xù)培養(yǎng)。

(4)應(yīng)用：奇異變形桿菌、普通變形桿菌、沙雷菌屬和陰溝腸桿菌等到能液化明膠，腸桿菌科中的

其它細(xì)菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外，許多

假單胞菌也能產(chǎn)生明膠酶而使明膠液化。

3.呻噪試驗(yàn)(靛基質(zhì)試驗(yàn))

Q)原理：某些細(xì)菌有色氨酸酶，能分解色氨酸產(chǎn)生叫I珠，口引珠與對二甲氨基苯甲醛形成紅色的玫

瑰口引噪。

⑵方法:將待檢菌接種于富含色氨酸的蛋白除水培養(yǎng)基中，35℃孵育24~48h，加入靛基質(zhì)試劑，

觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：紅色為陽性，無色為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定，如大腸埃希菌與產(chǎn)氣腸桿菌，肺炎克雷伯菌和產(chǎn)酸克雷

伯菌等的鑒別。

4.苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)

Q)原理：測定細(xì)菌是否產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶。細(xì)菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫氨酶使苯丙氨酸脫氨后生成

苯丙酮酸，加入三氯化鐵試劑后產(chǎn)生綠色反應(yīng)。若延長時(shí)間，會(huì)引起退色。

⑵方法：將待檢菌大量接種入苯丙氨酸培養(yǎng)基中，35°（:孵育18~24h,滴加100g/L三氯化鐵試

劑4~5滴，立即觀察菌落生長處有無綠色出現(xiàn)。

（3）結(jié)果：有綠色出現(xiàn)為陽性。

（4）應(yīng)用：變形桿菌屬、普羅威登菌屬、摩根菌屬均為陽性，腸桿菌科其它細(xì)菌均為陰性。

5.氨基酸脫液酶試驗(yàn)

（1）原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生氨基酸脫竣酶使氨基酸脫竣生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培養(yǎng)基

變?yōu)閴A性，可用指示劑指示出來。

（2）方法：將待檢菌分別接種于1支氨基酸（賴氨酸,鳥氨酸或精氨酸）脫竣酶試驗(yàn)管和1支氨

基酸脫竣酶對照管（無氨基酸），各覆蓋至少0.5cm高度

的無菌石蠟油，35℃孵育1~4d,觀察結(jié)果。

（3）結(jié)果：若為溪甲酚紫指示劑，則試驗(yàn)管紫色為陽性，黃色為陽性，對照管應(yīng)為黃色。

（4）應(yīng)用：主要用于某些細(xì)菌種間的鑒別，如賴氨酸用于產(chǎn)氣腸桿菌（陽性）與阻溝腸桿菌（陰性）；

鳥氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和克雷伯菌（陰性）；精氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和產(chǎn)氣腸

桿菌（陰性）等。

6.精氨酸雙水解酶試驗(yàn)

（1）原理：精氨酸經(jīng)兩次水解后，生成鳥氨酸、氨及二氧化碳。鳥氨酸又在脫短酶的作用下生成腐

胺。氨及腐胺均為堿性物質(zhì)，故可使培養(yǎng)基變堿，用

指示劑指示出來。

(2)方法：將待檢菌接種于試驗(yàn)培養(yǎng)上，置35℃孵箱孵育1~4d,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：浪甲酚紫指示劑呈紫色為陽性，酚紅指示劑呈紅色為陽性。黃色為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科及假單胞菌屬的鑒定。

7.尿素酶試驗(yàn)

Q)原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿。

(2)方法：將待檢菌接種于含有尿素的培養(yǎng)基中，35℃孵育18~24h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：紅色為陽性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

(4)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科變形桿菌屬、普羅威登菌屬、克雷伯菌屬及假單胞菌屬的鑒定。

8.霍亂紅試驗(yàn)

(1)原理：霍亂弧菌分解色氨酸生成片ID朵，并能使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,當(dāng)加入硫酸后生成亞硝

酸叫I跺，呈紅色反應(yīng)。

⑵方法：將待檢菌接種于蛋白陳水中，置35℃孵育24卜,加入濃硫酸數(shù)滴，觀察結(jié)果。

⑶結(jié)果：呈紅色者為陽性。

(4)應(yīng)用：霍亂弧菌呈陽性反應(yīng)，但本試驗(yàn)并非霍亂弧菌所特有。凡能產(chǎn)生口弧朵并還原硝酸鹽為亞

硝酸鹽的細(xì)菌，均可呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。

三、碳源和氮源利用試驗(yàn)

1?枸椽酸鹽利用試驗(yàn)

Q)原理：某些細(xì)菌能利用枸襟酸鹽作為唯一碳源，而在此培養(yǎng)基上生長，并分解枸椽酸鹽生成碳

酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性。。

(2)方法：將待檢菌接種于枸椽酸鹽培養(yǎng)基上，置35℃孵育1~4d,逐日觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：若用溪麝香草酚蘭指示劑，斜面出現(xiàn)菌落或菌苔，培養(yǎng)基變藍(lán)色為陽性；無菌落生長,

培養(yǎng)基綠色為陽性。

(4)應(yīng)用：可用此試驗(yàn)作細(xì)菌種屬間鑒定。埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰

性，沙門菌屬、克雷伯菌屬通常陽性，粘質(zhì)和液化沙雷菌和某些變形桿菌及枸椽酸桿菌陽性。此

外，銅綠假單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌和嗜水氣單胞菌也能利用枸椽酸鹽。

2.丙二酸鹽利用試驗(yàn)

(1)原理：某些細(xì)菌能利用丙二酸鹽作為唯一碳源，丙二酸鹽被分解生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿。

(2)方法：將待檢菌接種于丙二酸鹽培養(yǎng)基中，置35℃孵育24~48h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{(lán)色為陽性。顏色無變化為陰性。

(4)應(yīng)用：腸桿菌科中亞利桑那菌和克雷伯菌屬為陽性，枸椽酸桿菌屬、腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬

有不同生物型反應(yīng)，其它各菌屬均為陰性。

3.醋酸鈉利用試驗(yàn)

(1)原理：細(xì)菌利用鍍鹽作為唯一氮源，同時(shí)，利用醋酸鹽作為唯一碳源時(shí)，可在醋酸鹽培養(yǎng)上生

長，分解醋酸鹽生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。

⑵方法：將被檢菌接種于醋酸鹽培養(yǎng)基中，置35℃孵育2~7d,逐日觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：培養(yǎng)基上有細(xì)菌生長，并變?yōu)樗{(lán)色為陽性。

(4)應(yīng)用：主要用于大腸埃希菌和志賀菌屬的鑒別，前者為陽性，而后者為陰性。

4.馬尿酸鈉水解試驗(yàn)

(1)原理：某些細(xì)菌可具有馬尿酸水解酶，可使馬尿酸水解為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸與三氯化鐵

試劑結(jié)合，形成苯甲酸鐵沉淀。

(2)方法：將待檢菌接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基中，置35℃孵育48h,離心沉淀，取上清液0.8ml,

加入三氯化鐵試劑0.2ml,立即混勻，經(jīng)10~15min觀察

結(jié)果。

(3)結(jié)果：出現(xiàn)恒定之沉淀物為陽性。

(4)應(yīng)用：主要用于B群鏈球菌的鑒定。

5、乙酰胺利用試驗(yàn)

Q)原理：許多非發(fā)酵菌產(chǎn)生一種脫酰胺酶，可使乙酰胺經(jīng)脫酰胺作用釋放氨，使培養(yǎng)基變堿。

⑵方法：將被檢菌接種于乙酰胺培養(yǎng)基中，置35℃孵育24~48h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{(lán)色為陽性。如不生長，或稍有生長，但培養(yǎng)基顏色不變?yōu)殛幮浴?/p>

(4)應(yīng)用：主要用于非發(fā)酵菌的鑒定。銅綠假單胞菌、去硝化產(chǎn)堿桿菌、食酸假單胞菌為陽性，其

它非發(fā)酵菌大多數(shù)為陰性。

四、酶類試驗(yàn)

L氧化酶試驗(yàn)

Q)原理：氧化酶又稱細(xì)胞色素氧化酶，是細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng)中的最終呼吸酶。此酶并不直接與

氧化酶試劑起反應(yīng)，而是先使細(xì)胞色素C氧化，然后

此氧化型細(xì)胞色素C再使對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。因此，本試驗(yàn)結(jié)果與細(xì)胞色素C的存在

有關(guān)。

(2)方法：取潔凈濾紙條，沾取菌落少許，加氧化酶試劑(10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液或

10g/L鹽酸二甲基對苯二胺水溶液)1滴，Imin內(nèi)觀察結(jié)果。也可將試劑滴加到菌落上進(jìn)行試

驗(yàn)。

(3)結(jié)果：陽性者立即變粉紅色，5~10s內(nèi)呈深紫色。無色為陰性。

(4)應(yīng)用：用于奈瑟菌屬的菌種鑒定，該屬細(xì)菌均陽性。此外，也用于假單胞菌屬與腸桿菌科細(xì)菌

的區(qū)別，前者陽性，而后者陽性。莫拉菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬等均為陽性。

注意事項(xiàng)：①試驗(yàn)時(shí)應(yīng)避免接觸含鐵物質(zhì)，以免出現(xiàn)假陽性。②10g/L鹽酸四甲基對苯二胺或

10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液為無色溶液，在空氣中易被氧化而失效，故應(yīng)經(jīng)常更換新試劑，

并盛于棕色瓶中，若試劑已變成深藍(lán)色，應(yīng)棄去不用。

2.觸酶碘僉

Q)原理：觸酶又稱過氧化氫酶，具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫成為水和原子態(tài)氧，繼

而形成氧分子，出現(xiàn)氣泡。

(2)方法：取潔凈玻片1張，用接種環(huán)招瞰細(xì)菌，加3%H2O21滴，立即觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：若立即出現(xiàn)大量氣泡為陽性。無氣泡為陽性。

(4)應(yīng)用：大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過氧化氫酶，但鏈球菌科陰性，故常用此試驗(yàn)來鑒定。此

外，金氏桿菌屬的細(xì)菌也為陰性。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗(yàn)，結(jié)核分枝桿菌為陰性，戈

氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。

注意事項(xiàng)：①3%H2O2溶液要新鮮配制。②不宜用血瓊脂平板上生長的菌落,因紅細(xì)胞含有觸

酶，可致假陽性反應(yīng)，③取對數(shù)生長期的細(xì)菌。

3.凝固酶試驗(yàn)

Q)原理：凝固酶試驗(yàn)是鑒定葡萄球菌致病性的重要試驗(yàn)。致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶,一

種是與細(xì)胞壁結(jié)合的凝聚因子，稱結(jié)合凝固酶，它直接作用于血漿中纖維蛋白原，使發(fā)生沉淀，

包圍于細(xì)菌外面而凝聚成塊，玻片法陽性結(jié)果是由此凝聚因子所致；另一種凝固酶是分泌至菌體

外，稱為游離凝固酶，它能使凝血酶原變成凝血酶類產(chǎn)物，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使

血漿凝固。試管法可同時(shí)測定結(jié)合型和游離型凝固酶。

(2)方法:①玻片法：在一張潔凈玻片中央加1滴生理鹽水，用接種環(huán)取待檢培養(yǎng)物與其混合(設(shè)

陽性和陰性對照)制成菌懸液，若經(jīng)10~20s內(nèi)無自凝

現(xiàn)象發(fā)生，則加入人或兔新鮮血漿1環(huán)，與菌懸液混合，觀察結(jié)果。②試管法：于試管內(nèi)加1:

4稀釋的兔或人血漿0.5ml,再加1~2個(gè)待試菌菌落，置37℃水浴，每30min觀察1次結(jié)果。

⑶結(jié)果：①玻片法：5~10s內(nèi)出現(xiàn)凝集者為陽性。②試管法：如有凝塊或整管凝集出現(xiàn)為陽性。

2h后無上述現(xiàn)象出現(xiàn)，則放置過夜后再觀察。

(4)應(yīng)用：本試驗(yàn)僅用于致病性葡萄球的鑒定。

注意事項(xiàng)：①玻片法為篩選試驗(yàn)，陽性、陰性均需進(jìn)行試管法測定。②血漿必須新鮮。③應(yīng)使用

肝素而非枸椽酸鹽作抗凝劑抗凝的血漿。④本試驗(yàn)也可用市購的膠乳凝集試驗(yàn)試劑盒測定。

4.DNA酶試驗(yàn)

Q)原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生DNA酶，水解外源性DNA使之成為寡核苗酸。DNA可被酸沉淀，而

寡核甘酸則不會(huì)。故在DNA瓊脂平板上加鹽酸后，可在

菌落周圍形成透明區(qū)。

(2)方法：在DNA瓊脂平板上點(diǎn)種待檢菌，35℃孵育18~24h,用lmol/L鹽酸傾注平板，觀察

結(jié)果.

⑶結(jié)果：如菌落周圍有透明區(qū)者為陽性，無透明區(qū)為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科及葡萄球菌屬某些菌種的鑒定。沙雷菌、變形桿菌和金黃色葡萄球菌

DNA酶均陽性。

5.膽汁溶菌獻(xiàn)

Q)原理：膽汁或去氧膽酸鈉能導(dǎo)致某些細(xì)菌溶解，一方面是由于膽汁或去氧膽酸鈉降低了細(xì)菌細(xì)

胞膜上的表面張力，使細(xì)菌的細(xì)胞膜破損或使菌體裂

解。另一方面可能與激活細(xì)菌體內(nèi)的自溶酶有關(guān)。

(2)方法：①試管法：用純培養(yǎng)物制備1ml生理鹽水濃菌懸液，pH調(diào)至7.0,分裝兩支試管，各

0.5mL其中一管加0.5mll00g/L去氧膽酸鈉為試驗(yàn)

管，另一管加0.5ml生理鹽水作對照。35℃孵育每小時(shí)觀察1次結(jié)果。②平板法：在血平板上選

取單個(gè)可疑菌落，作好標(biāo)記，直接在菌落上加1接種環(huán)20g/L去氧膽酸鈉（pH7.0）,置35℃

孵育30min（平板不要翻轉(zhuǎn)）觀察結(jié)果。

（3）結(jié)果：①試管法：在3h內(nèi)液體透明為陽性。②平板法：如菌落消失，僅留下溶血區(qū)為陽性，

菌落不消失為陰性。

（4）應(yīng)用：用于肺炎鏈球菌的鑒定。

6.硝酸鹽還原試驗(yàn)

Q）原理：硝酸鹽還原反應(yīng)包括兩個(gè)過程，其一是在合成代謝過程中，硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨,

再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細(xì)胞內(nèi)其它含氮化合物；另一是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代

替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的終末受氫體。硝酸鹽還原過程可因細(xì)菌不同而異。有的細(xì)菌僅使硝酸鹽

還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌等；有的細(xì)菌可使其還原為亞硝酸鹽和離子態(tài)的鍍；有的細(xì)菌能

使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如沙雷菌屬；有的細(xì)菌還可以將其還原產(chǎn)物在合成性代謝中完全

利用。硝酸鹽或亞硝酸鹽如果還原生成氣體的終末產(chǎn)物如氮或氧化氮,則稱為脫硝化或脫氮化作

用。某些細(xì)菌能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，亞硝酸鹽與醋酸作用，生成亞硝酸，亞硝酸與試劑中的

對氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者與a-蔡胺結(jié)合生成N-a秦胺偶苯磺酸。

⑵方法：將待檢菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基（內(nèi)含小倒管）中,35。（：孵育l-4do將甲、乙等量混合

液（用時(shí)混合）0.1ml加于試管內(nèi)，立即或lOmin內(nèi)觀察結(jié)果。

（3）結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性反應(yīng)。如欲觀察有無氮?dú)猱a(chǎn)生，可于培養(yǎng)基管內(nèi)加1只小倒管，有氣泡

產(chǎn)生，則表示有氮?dú)馍?。如欲檢查培養(yǎng)基中硝酸鹽是否被分解，可取鋅粉少許加入培養(yǎng)基內(nèi)，

如出現(xiàn)紅色表明硝酸鹽仍存在；若不出現(xiàn)紅色，表示硝酸鹽已被分解。

(4)應(yīng)用：本試驗(yàn)廣泛用于細(xì)菌鑒定。腸桿菌科細(xì)菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；假單胞菌屬中有

的細(xì)菌能產(chǎn)生氮?dú)?，如銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、斯氏假單胞菌，有的則能還原硝酸鹽

為亞硝酸鹽，如鼻疽假單胞菌等；厭氧菌如韋榮菌也能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。

7.卵磷脂酶試驗(yàn)

(1)原理：細(xì)菌產(chǎn)生的卵磷脂酶，經(jīng)鈣離子作用，能迅速分解卵黃或血清中的卵磷脂形成混濁沉淀

狀的甘油酯和水溶性璘酸膽堿。

⑵方法：取待檢菌劃線接種或點(diǎn)種在卵黃瓊脂平板上，置35℃孵育3~6h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：3h后在菌落周圍形成乳白色混濁，即為卵磷脂酶試驗(yàn)陽性，6h后該混濁圈可擴(kuò)大到直

徑

5~6mmo

(4)應(yīng)用：該試驗(yàn)主要用于厭氧的鑒定。產(chǎn)氣莢膜梭菌和諾維梭菌為陽性，其他梭菌為陰性。蠟樣

芽泡桿菌亦為陽性。

8.磷酸酶試驗(yàn)

Q)原理：磷酸酶是磷酸脂的水解酶，可使單磷脂水解，其反應(yīng)可根據(jù)反應(yīng)基質(zhì)不同而異，如用磷

酸酚酸為基質(zhì)，經(jīng)璘酸酶水解后可釋放酚釀，在堿性環(huán)境中呈紅色。

(2)方法：取待檢菌接種于磷酸酚配瓊脂平板上，置35℃孵育18~24h,于平皿蓋內(nèi)加1滴濃氨

水，熏蒸片刻，觀察結(jié)果。亦可用液體培養(yǎng)基，經(jīng)孵育后，向管內(nèi)加400g/L氫氧化鈉溶液1滴,

觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：菌落變?yōu)榧t色者為陽性。

(4)應(yīng)用：主要用于致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌的鑒別，前者為陽性，后者為陰性。

9.脂酶試驗(yàn)

Q)原理：細(xì)菌產(chǎn)生的脂酶可分解脂肪為游離脂肪酸。在培養(yǎng)基中加入維多利亞藍(lán)可與脂肪結(jié)合成

為無色化合物，如果脂肪被分解，則維多利亞藍(lán)釋出，呈藍(lán)色。

(2)方法：將待檢菌接種于含維多利亞藍(lán)的脂酶培養(yǎng)基中，置35℃孵育24h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{(lán)色者為陽性，否則可呈無色或粉紅色。

(4)應(yīng)用：主要用于厭氧菌鑒定。在擬桿菌中產(chǎn)黑色素?cái)M桿菌中間亞種產(chǎn)生脂酶，其它擬桿菌陰性；

在梭菌屬中諾維梭菌和產(chǎn)芽胞梭菌也產(chǎn)生此酶，其它梭菌為陰性。

10.CAMP試驗(yàn)

(1)原理：B群鏈球菌(無乳鏈球菌)產(chǎn)生一種"CAMP"因子，此種物質(zhì)能促進(jìn)葡萄球菌的(3-

溶血素的活性。因此，可在兩種細(xì)菌的交界處溶血力增強(qiáng)，出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)。

(2)方法：在羊血或馬血瓊脂平板上,先以小溶血的金黃色葡萄球菌劃一橫線接種。再將待檢菌

與前一劃線作垂直接種，兩者應(yīng)相距1cm,于35℃孵育18~24h,觀察結(jié)果。每次試驗(yàn)應(yīng)做陰

陽性對照。

(3)結(jié)果：兩種細(xì)菌劃線交接處出現(xiàn)箭頭型溶血區(qū)為陽性。

(4)應(yīng)用：主要用于B群鏈球菌(陽性)的鑒定，其他鏈球菌均為陰性。

11.石蕊牛乳試驗(yàn)

Q)原理：由于牛乳內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)和糖類，各種細(xì)菌對這些物質(zhì)的分解能力不同，故可有數(shù)

種不同反應(yīng)，用以鑒別細(xì)菌。

(2)將待檢菌接種于石蕊牛乳培養(yǎng)基中，若為芽胞梭菌，要在培養(yǎng)基中加入無菌鐵末，置35°(:孵

育18~24h,必要時(shí)可延長至14d。觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：①產(chǎn)酸：發(fā)酵孚廉產(chǎn)酸，使指示劑變?yōu)榉奂t色。②產(chǎn)氣：發(fā)酵乳糖而同時(shí)產(chǎn)氣，可沖開

上面的凡士林。③凝固：因產(chǎn)酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固。④陳化：將凝固的酪雷白繼續(xù)水

解為陳，培養(yǎng)基上層液體變清，底部可留有未被完全月東化的酪蛋白。⑤產(chǎn)堿：乳糖未發(fā)酵，因分

解含氮物

質(zhì)，生成胺及氨，培養(yǎng)基變堿，指示劑變?yōu)樗{(lán)色。

(4)應(yīng)用：主要用于梭菌、鏈球菌和丙酸桿菌的鑒定。

腦腦,2010-07-1309:48

五、抑菌試驗(yàn)

1.Optochin敏感試驗(yàn)

(1)原理Qptochin(奧普托欣)是鹽酸乙基氫化羥基奎寧的商品名。對肺炎鏈球菌有特異抑制作用，

其作用機(jī)制可能是干擾葉酸生物合成作用，而對其它鏈球菌則無此作用。

⑵方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養(yǎng)物均勻涂布于血瓊脂平板上，貼上一張含5|jg奧普托欣

紙片，置燭缸或二氧化碳孵箱，35℃孵育18~24h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：抑菌圈直徑大于14mm為敏感，小于或等于14mm為陰性。

(4)應(yīng)用：主要用于肺炎鏈球菌(敏感)與其它鏈球菌(耐藥)的鑒別。

2.桿菌肽敏感試驗(yàn)

Q)原理：A群鏈球菌對桿菌肽幾乎是100%敏感，而其它群鏈球菌對桿菌肽通常耐藥。故此試驗(yàn)

可對鏈球菌進(jìn)行鑒別。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養(yǎng)物均勻涂布于血瓊脂平板上，稍干后貼一張含0.04U的

桿菌肽紙片，置35℃孵育18~24h,觀察結(jié)果。

⑶結(jié)果：抑菌圈直徑大于10mm為敏感，小于10mm為耐藥。

(4)應(yīng)用：主要用于A群與非A群鏈球菌的鑒別。從臨床分離的菌株中有5%~15%非A群鏈球菌

也對桿菌肽敏感,如6%的B群鏈球菌、7.5%的C群鏈球菌和G群鏈球菌等。

3.新生霉素敏感試驗(yàn)

Q)原理：金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌可被低濃度新生霉素所抑制，表現(xiàn)為敏感，而腐生葡萄

球菌則表現(xiàn)為耐藥。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于M-H瓊脂平板或血平板上，在平板中央貼含5pg/

片新生霉素診斷紙片一張，置35℃孵育16~18h,觀察結(jié)果。

⑶結(jié)果：抑菌圈直徑大于16mm為敏感，小于或等于16mm為耐藥。

(4)應(yīng)用：主要用于葡萄球菌某些種的鑒定。

4.0/129i由僉

(D原理：0/129(2,4二氨基-6,7-二異丙基喋碇)能抑制弧菌屬、發(fā)光桿菌屬和鄰單胞菌屬

細(xì)菌生長，而氣單胞菌屬和假單胞菌屬細(xì)菌則耐藥。

(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于堿性瓊脂平板上，將lOyg/片及150|jg/片的

0/129診斷紙片貼于平板上，置35°(:孵育18~24h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：出現(xiàn)抑菌圈者表示敏感，無抑菌圈者為耐藥。

(4)應(yīng)用：主要用于弧菌屬、鄰單胞菌屬與氣單胞菌屬的鑒別，弧菌屬和鄰單胞菌屬菌為敏感，氣

單胞菌屬菌為耐藥。其它菌屬有發(fā)光桿菌屬為敏感，假單胞菌屬為耐藥。

5.富化鉀試驗(yàn)

Q)原理：氧化鉀可抑制某些細(xì)菌的呼吸酶系統(tǒng)。細(xì)胞色素、細(xì)胞色素氧化酶、過氧化氫酶和過氧

化物酶均以鐵口卜琳作為輔基，氟化鉀與鐵嚇琳結(jié)合，使這些酶失去活性，使細(xì)菌生長受到抑制。

(2)方法：將待檢菌接種于氧化鉀培養(yǎng)基中，同時(shí)接種一支不含氟化鉀的對照培養(yǎng)基，置35°(:孵

育24~48h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：細(xì)菌在氧化鉀培養(yǎng)基中生長的(不受抑制)為陽性，不生長(抑制)為陰性。

(4)應(yīng)用：腸桿菌科中的沙門菌屬、志賀菌屬和埃希菌屬細(xì)菌的生長受到抑制，而其它各菌屬的細(xì)

菌均可生長。

六、其它試驗(yàn)

1,克氏雙糖鐵或三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)

(1)原理：克氏雙糖鐵(KIA)或三糖鐵瓊脂(TSI)培養(yǎng)基制成高層和短的斜面，其中葡萄糖含量僅為

乳糖或蔗糖的十分之一，若細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，分解葡萄糖產(chǎn)酸使pH降低,

因此斜面和底層均先呈黃色，但因葡萄糖量較少，所生成的少量酸可因接觸空氣而氧化，并因細(xì)

菌生長繁殖利用含氮物質(zhì)生成堿性化合物，使斜面部分又變成紅色；底層由于處于缺氧狀態(tài)，細(xì)

菌分解葡萄糖所生成的酸類一時(shí)不被氧化而仍保持黃色。細(xì)菌分解葡萄糖、乳糖或蔗糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣,

使斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫時(shí)與培養(yǎng)基中的硫酸亞鐵作用，形成黑色的

硫化鐵。

⑵方法：用接種針挑取待檢菌的菌落，先穿刺接種到KIA或TSI深層，距管底3~5mm為止，

再從原路退回，在斜面上自下而上劃線,置35°(:孵育18~24h,觀察結(jié)果。

(3)結(jié)果：常見的KIA反應(yīng)有如下幾種：①斜面堿性/底層堿性：不發(fā)酵碳水化合物，系不發(fā)酵菌

的特征。如銅綠假單胞菌。②斜面堿性/底層酸性：葡萄糖發(fā)酵、乳糖(和TSI中的蔗糖)不發(fā)酵,

是不發(fā)酵乳糖菌的特征，如志賀菌。③斜面堿性/底層酸性(黑色)：葡萄糖發(fā)酵、乳糖不發(fā)酵

并產(chǎn)生硫化氫，是產(chǎn)生硫化氫不發(fā)酵乳糖菌的特征。如沙門菌、亞利桑那菌、枸椽酸桿菌和變形

桿菌等。④斜面酸性/底層酸性：葡萄糖和乳糖(和TSI中的蔗糖)發(fā)酵，是發(fā)酵乳糖的大腸菌群

的特征，如大腸埃希菌、克雷伯菌屬和腸桿菌屬。

(4)應(yīng)用：鑒別腸道桿菌用。KIA或TSI對初分離出的、可疑為革蘭陰性桿菌鑒定特別有用。其反

應(yīng)模式是許多桿菌鑒定表的組成部分，也可作為觀察其他培養(yǎng)基反應(yīng)的有價(jià)值的質(zhì)控依據(jù)。

2.氫氧化鉀拉絲試驗(yàn)

(1)原理：革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁在稀堿溶液中易于破裂，釋放出未斷裂的DNA螺旋，使氫氧化

鉀菌懸液呈現(xiàn)粘性，可用接種環(huán)攪拌后拉出粘絲來，而革蘭陽性細(xì)菌在稀堿溶液中沒有上述變化。

(2)方法：取1滴40g/L氫氧化鉀水溶液(應(yīng)新鮮配制)于潔凈玻片上，取新鮮菌落少許，與氫

氧化鉀水溶液攪拌混勻，并每隔幾秒鐘上提接種環(huán)，觀察能否拉出粘絲。

(3)結(jié)果：用接種環(huán)拉出粘絲者為陽性，仍為混懸液者為陰性。。

(4)應(yīng)用：主要用于革蘭陰性菌與易脫色的革蘭陽性菌的鑒別。大多數(shù)革蘭陰性菌于5~10s內(nèi)出

現(xiàn)陽性反應(yīng)，有的則需30-45S，假單胞菌、無色桿菌、黃桿菌、產(chǎn)堿桿菌、莫拉菌等大多數(shù)在

10s內(nèi)呈陽性，不動(dòng)桿菌、莫拉菌反應(yīng)較慢，大多數(shù)菌株在60s內(nèi)出現(xiàn)陽性，而革蘭陽性菌在60s

以后仍為陰性。

第四節(jié)血清學(xué)試驗(yàn)

血清學(xué)試驗(yàn)是根據(jù)抗原與相應(yīng)的抗體在適宜的條件下，能在體外發(fā)生特異性結(jié)合的原理，用已知

抗體或抗原來檢測未知抗原或抗體。因抗體主要存在于血清中，抗原或抗體檢測時(shí)一般都要采用

血清，故體外的抗原抗體反應(yīng)亦稱為血清學(xué)試驗(yàn)或血清學(xué)反應(yīng)。血清學(xué)試驗(yàn)包括血清學(xué)鑒定和血

清學(xué)診斷。血清學(xué)鑒定即用含已知特異性抗體的免疫