《食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)》課件-微生物的分離純化

微生物的分離純化目錄/Contents01菌種分離與純化技術(shù)簡(jiǎn)介物理消毒滅菌法稀釋涂布平板法0203平板劃線分離法菌種分離與純化技術(shù)簡(jiǎn)介

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物的分離與純化。平板分離法普遍用于微生物的分離與純化,微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落,通常是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。01菌種分離與純化技術(shù)簡(jiǎn)介貼標(biāo)簽：打開平皿包扎紙，在平皿上蓋邊緣貼好標(biāo)簽紙或者用記號(hào)筆注明菌種、接種時(shí)間、操作者等信息。11bcda制備平板倒平皿：左手持平皿，開口位置過(guò)火，右手持三角瓶，向平皿內(nèi)傾注15-20mL培養(yǎng)基。取三角瓶：在酒精燈無(wú)菌區(qū)用右手將棉塞擰松，用右手手掌和小拇指拔取棉塞，右手持三角瓶，瓶口保持在酒精燈火焰旁。凝固：倒好的平皿輕輕晃動(dòng)一下，置于水平操作臺(tái)上凝固，凝固中不能移動(dòng)。02稀釋涂布平板法取6支盛有9mL無(wú)菌水的試管排列于試管架上，依次標(biāo)上10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6字樣。以1ml無(wú)菌吸管按無(wú)菌操作從樣品管中吸取1mL菌液于10-1試管中，然后用另一吸管在10-1試管中來(lái)回吹吸三次，使其混合均勻，制成10-1稀釋液。再用此吸管從10-1管中吸取1mL稀釋液注入10-2管中，依次制成10-2，10-3，10-4，10-5，10-6稀釋液。梯度稀釋02稀釋涂布平板法接種：用一支1mL無(wú)菌吸管從高稀釋度開始分別吸取各個(gè)低度稀釋液0.1mL至相應(yīng)的無(wú)菌平皿內(nèi)。11bcda接種涂布涂布：左手少許打開皿蓋，用涂布棒把培養(yǎng)基上的菌懸液均勻涂布開。將涂抹好的平板放于操作臺(tái)上20-30min，使菌液滲入培養(yǎng)基內(nèi)。燒涂布棒：右手拿涂布棒，在酒精燈上灼燒并冷卻。涂布棒滅菌：灼燒涂布棒滅菌。02稀釋涂布平板法培養(yǎng)b.清理臺(tái)面：整理試驗(yàn)臺(tái)面，實(shí)驗(yàn)器具滅菌、清洗歸位。a.培養(yǎng)：將接種好的平皿按照微生物最佳培養(yǎng)溫度倒置放于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。02稀釋涂布平板法挑取單菌落02稀釋涂布平板法將培養(yǎng)后長(zhǎng)出的單個(gè)菌落分別挑取少許細(xì)胞接種到上述3種培養(yǎng)基斜面上,分別置于28℃和37℃溫室培養(yǎng)。若發(fā)現(xiàn)有雜菌，需再一次進(jìn)行分離、純化，直到獲得純培養(yǎng)。貼標(biāo)簽：打開平皿包扎紙，在平皿上蓋邊緣貼好標(biāo)簽紙或者用記號(hào)筆注明菌種、接種時(shí)間、操作者等信息。11bcda制備平板倒平皿：左手持平皿，開口位置過(guò)火，右手持三角瓶，向平皿內(nèi)傾注15-20mL培養(yǎng)基。取三角瓶：在酒精燈無(wú)菌區(qū)用右手將棉塞擰松，用右手手掌和小拇指拔取棉塞，右手持三角瓶，瓶口保持在酒精燈火焰旁。凝固：倒好的平皿輕輕晃動(dòng)一下，置于水平操作臺(tái)上凝固，凝固中不能移動(dòng)。02平板劃線分離法取菌：用右手的小指和手掌取下管塞，試管口緩緩過(guò)火滅菌2-3次，接種環(huán)伸入試管，先使環(huán)接觸管內(nèi)壁，冷卻。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液。將試管口通過(guò)火焰，并塞上棉塞。cb接種環(huán)滅菌：右手拿接種環(huán)，在火焰上將環(huán)端灼燒滅菌，然后將有可能伸入試管的其余部分均灼燒滅菌，重復(fù)灼燒2-3次。a準(zhǔn)備菌懸液：將菌懸液試管搖勻，擰松試管棉塞。平板劃線03平板劃線分離法e接種環(huán)滅菌：在酒精燈火焰上再次灼燒接種環(huán)滅菌。d平板劃線：左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌液的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，進(jìn)行連續(xù)或分區(qū)劃線，蓋上皿蓋。平板劃線03平板劃線分離法圖4-15平板劃線法示意圖培養(yǎng)b.清理臺(tái)面：整理試驗(yàn)臺(tái)面，實(shí)驗(yàn)器具滅菌、清洗歸位。a.培養(yǎng)：將接種好的平皿按照微生物最佳培養(yǎng)溫度倒置放于電熱恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。03平板劃線分離法挑取單菌落03平板劃線分離法將培養(yǎng)后長(zhǎng)出的單個(gè)菌落分別挑取少許細(xì)胞接種到上述3種培養(yǎng)基