無病毒苗木繁育技術（苗木生產技術）

無病毒苗木脫毒技術主要內容01無病毒苗木定義及培育意義02病毒病的傳播途徑03無病毒苗木脫毒方法又稱為脫毒苗，是指經過脫毒處理和病毒檢測，證明確已不帶指定病毒，且無病毒病癥狀表現的健康苗。一、無病毒苗木定義及培育意義概念01一、無病毒苗木定義及培育意義病毒病對園藝植物的危害02種子發(fā)芽率降低苗期分株數量減少嫁接不親和萌芽率降低，生長量減少棗瘋病一、無病毒苗木定義及培育意義病毒病對園藝植物的危害02產量降低果實品質下降樹勢衰退，直至死亡棗瘋病卷葉病卷葉病葡萄病毒病卷葉病新梢扇葉病葡萄病毒病蘋果莖溝病毒蘋果莖痘病毒蘋果病毒病一、無病毒苗木定義及培育意義培育無病毒苗木的意義03123提高產量提高品質增強抗病性扇葉病二、病毒病的傳播途徑12接觸傳染借助媒介傳播主要包括營養(yǎng)繁殖材料接觸、汁液接觸、傷口或根系接合等接觸面?zhèn)鞑ゲ《?。接穗、苗木、花粉、種子、蟲害等均可以傳播病毒。三、無病毒苗木脫毒方法0102030405熱處理脫毒微莖尖培養(yǎng)脫毒熱處理結合莖尖脫毒花藥培養(yǎng)脫毒莖尖微體嫁接脫毒1.熱處理脫毒12原理方法植物處于高溫環(huán)境中，體內病毒全部或部分鈍化，不能生成或生成病毒很少，病毒含量不斷降低，從而達到脫毒目的。a.溫湯浸漬處理脫毒b.熱空氣處理脫毒已用熱處理脫除的果樹病毒果樹病毒種類熱處理脫毒難易溫度（℃）時間柑橘柑橘速衰病毒3928天容易柑橘裂皮類病毒3833周很困難柑橘脈突病毒40/308周困難柑橘碎葉病毒40/30+44/306+2周困難蘋果蘋果褪綠葉斑病毒3720天容易蘋果莖痘病毒3720天容易蘋果花葉病毒372-3周容易1.熱處理脫毒1.熱處理脫毒核果類李屬壞死環(huán)斑病毒3817天容易李痘病毒3714-21天容易李矮縮病毒3817天容易櫻桃綠環(huán)斑病毒3814天容易桃X病37.53周容易桃黃化病3514天容易櫻桃綠環(huán)斑駁病毒386周困難李線紋斑病毒3721-28天容易梨梨環(huán)紋花葉病毒3720天容易梨脈黃化病毒363周容易葡萄葡萄扇葉病毒3521天容易葡萄卷葉病毒388周困難葡萄栓皮病毒3814天很容易2.微莖尖培養(yǎng)脫毒12原理過程莖尖或根尖分生組織（0.1－0.5mm）大多不含病毒。a.取材：取新梢頂端3－5cmb.消毒c.接種：切取0.2－0.5mm的莖尖組織接種于培養(yǎng)基上。2.微莖尖培養(yǎng)脫毒微莖尖分組織培養(yǎng)花藥接種在誘導愈傷組織培養(yǎng)基上，誘導產生愈傷組織，然后從愈傷組織再分化產生芽，長成小植株，從而獲得無病毒苗。3.花藥培養(yǎng)脫毒4.莖尖微體嫁接脫毒12適用植物操作過程莖尖培養(yǎng)脫毒生根困難，不能獲得完整植株的植物。a.培養(yǎng)砧木：種子去皮后接在MS培養(yǎng)基上，25℃環(huán)境下暗箱培養(yǎng)2周，轉入光照培養(yǎng)。b.準備微莖尖：從供體上采集莖尖。4.莖尖微體嫁接脫毒34嫁接嫁接苗培養(yǎng)從試管中取出砧木，切去子葉，留1－2cm長的上胚軸，切去過長的根系，保留4－6cm。莖頂部一側切U切口，莖尖置于切口上。送入MS液體培養(yǎng)基中，由濾紙橋支撐進行培養(yǎng)。4.莖尖微體嫁接脫毒5移栽培養(yǎng)1個月左右，具2－3片葉時移入基質中，套袋、保溫，保濕，20天后成活。4.莖尖微體嫁接脫毒12適用植物操作過程莖尖培養(yǎng)脫毒生根困難，不能獲得完整植株的植物。a.培養(yǎng)砧木：種子去皮后接在MS培養(yǎng)基上，25℃環(huán)境下暗箱培養(yǎng)2周，轉入光照培養(yǎng)。b.準備微莖尖：從供體上采集莖尖。5.熱處理結合莖尖培養(yǎng)脫毒將熱處理后的植株選取嫩梢，切取0.4～0.5mm大小的莖尖進行組織培養(yǎng)；或從田間植株上取嫩梢，剝取0.4～0.5mm大小的莖尖培養(yǎng)成株，在光照培養(yǎng)箱中進行熱處理后，再切取梢端培養(yǎng)成株。移栽成活后，進行脫毒效果的鑒定。無病毒苗木的鑒定及保存01020304目錄：脫毒效果的鑒定農藝性狀鑒定無病毒苗木的繁殖無病毒苗木的保存1234指示植物法電子顯微鏡法抗血清鑒定法分子生物學檢測法一、脫毒效果的鑒定

利用病毒在其他植物上產生特定癥狀作為鑒別病毒存在與否及種類的方法稱指示植物法。一、脫毒效果的鑒定1.指示植物檢測靈敏、準確、可靠、操作簡便。根據不同病毒，選擇合適的指示植物。一、脫毒效果的鑒定1.指示植物檢測（1）優(yōu)點：（2）對指示植物的要求：容易栽培。對要鑒別的病毒敏感，易接種，易感染，癥狀顯著。一、脫毒效果的鑒定汁液涂抹法嫁接接種法1.指示植物檢測(3)鑒定方法:一、脫毒效果的鑒定1.指示植物檢測（1）汁液涂抹法香石竹汁液涂抹脫毒鑒定法操作示意圖研缽中研磨，過濾。15432取被鑒定植物幼葉1－3g。濾液中加少量500－600目金剛砂。棉花球醮汁液涂抹葉面2－3次。指示植物15－25℃培養(yǎng)。一、脫毒效果的鑒定1.指示植物檢測（1）汁液涂抹法一、脫毒效果的鑒定1.指示植物檢測（2）嫁接接種法草莓指示植物小葉嫁接檢測法示意圖一、脫毒效果的鑒定1.指示植物檢測（2）嫁接接種法將被鑒定植物的芽或幼葉嫁接在指示植物上，4～6周后根據指示植物癥狀來判斷是否脫毒?？乖c抗體發(fā)生特異性反應（血清學反應），根據反應的癥狀可鑒別病毒存在與否和種類，這種方法稱為血清學鑒定。一、脫毒效果的鑒定(1)概念：2.抗血清鑒定法一、脫毒效果的鑒定2.抗血清鑒定法(2)原理：病毒侵入動物體后，動物血清中會產生抗體，含抗體的血清稱為抗血清，病毒即為抗原。專一性高，結果準確，快速簡便，一般幾小時甚至幾分鐘就可完成。①間接法：是用家兔球蛋白的山羊抗體與酶結合后制成羊抗兔酶標記抗體，檢測各種病毒。一、脫毒效果的鑒定2.抗血清鑒定法（3）優(yōu)點：（4）方法：②雙抗體夾心法：是用酶特異性抗體檢測抗原的方法。利用電鏡直接觀察、檢查出有無病毒存在。還可得知有關病毒顆粒的大小、形狀和結構。一、脫毒效果的鑒定(1)概念：3.電子顯微鏡法一、脫毒效果的鑒定3.電子顯微鏡法(2)優(yōu)點：由于觀察病毒特征是相當穩(wěn)定的，故對病毒鑒定及研究一種未知的病原物是很重要的。通過檢測病毒核酸來證實病毒的存在。一、脫毒效果的鑒定(1)概念：4.分子生物學檢測法一、脫毒效果的鑒定(2)優(yōu)點：

此法操作簡便，靈敏度高，特異性強，檢測速度快，可用于大量樣品的檢測。4.分子生物學檢測法無病毒苗木經過脫毒和脫毒效果鑒定后，還需進行田間農藝性狀鑒定，確證脫毒苗仍保持原品種的特征特性之后，才能作為原種進行推廣。二、農藝性狀鑒定三、無病毒苗木的繁殖主要采用無性繁殖方法，如嫁接、扦插、壓條、匍匐莖繁殖和微型塊莖(根)繁殖等方法繁育無病毒苗木。1.建立無病毒母本園2.完善繁育手續(xù)3.規(guī)范繁育