腫瘤免疫治療-腫瘤生物治療學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)課件

腫瘤免疫治療

----《腫瘤生物治療學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)》福建醫(yī)科大學(xué)教學(xué)醫(yī)院福建省腫瘤醫(yī)院葉韻斌1可編輯課件PPT

目的與要求：腫瘤免疫學(xué)是研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫系統(tǒng)之間的關(guān)系，以及應(yīng)用免疫學(xué)原理和手段對(duì)腫瘤進(jìn)行預(yù)防、診斷和治療的一門學(xué)科。通過(guò)本課程的學(xué)習(xí)，全面了解機(jī)體的抗腫瘤免疫監(jiān)視機(jī)制，包括特異性和非特異性的免疫機(jī)制；腫瘤的免疫逃逸機(jī)制；免疫編輯假說(shuō)。深入認(rèn)識(shí)腫瘤與免疫系統(tǒng)相互作用機(jī)制，了解腫瘤的生物學(xué)特性，以及腫瘤免疫治療在腫瘤綜合治療中的地位和作用。2可編輯課件PPT第一章、腫瘤免疫學(xué)概述腫瘤免疫學(xué)（Tumorimmunology）是研究腫瘤抗原、機(jī)體的免疫功能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的相互關(guān)系；機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答以及腫瘤細(xì)胞逃逸免疫效應(yīng)的機(jī)制；腫瘤免疫學(xué)診斷；以及免疫學(xué)預(yù)防和治療的學(xué)科。3可編輯課件PPT第二章、免疫系統(tǒng)的基本組成和功能

免疫細(xì)胞細(xì)胞因子主要組織相容性復(fù)合體、粘附分子免疫耐受抗腫瘤免疫應(yīng)答過(guò)程機(jī)體對(duì)腫瘤抗原的免疫應(yīng)答4可編輯課件PPT

免疫系統(tǒng)是機(jī)體識(shí)別自我和非我，引發(fā)免疫應(yīng)答、執(zhí)行免疫效應(yīng)和最終維持自身免疫穩(wěn)態(tài)的組織系統(tǒng)免疫器官：中樞免疫器官—胸腺、骨髓外周免疫器官—淋巴結(jié)、脾臟免疫細(xì)胞：主要是指能識(shí)別抗原，產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的淋巴細(xì)胞等各種細(xì)胞。

細(xì)胞因子：機(jī)體的免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞能合成和分泌小分子的多肽類因子，它們調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生理功能，這些因子統(tǒng)稱為細(xì)胞因子（cytokines）。主要組織相容性復(fù)合體：腫瘤抗原遞呈抗腫瘤免疫應(yīng)答：細(xì)胞免疫、體液免疫免疫耐受：是指免疫活性細(xì)胞接觸抗原性物質(zhì)時(shí)所表現(xiàn)的無(wú)應(yīng)答狀態(tài)（astateofspecificunresponsiveness）

5可編輯課件PPT一、免疫細(xì)胞

（一）T淋巴細(xì)胞----主要的抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞表面標(biāo)志：CD3

CD8+

抗腫瘤作用：A.結(jié)合腫瘤抗原，殺傷腫瘤細(xì)胞

B.分泌細(xì)胞因子

CD4+

抗腫瘤作用：A.輔助激活CTL,B細(xì)胞,NK，巨噬細(xì)胞;

B.分泌細(xì)胞因子：IL-2，IFN-γ，TFN-βC.少數(shù)屬于細(xì)胞毒性T細(xì)胞具有殺瘤作用6可編輯課件PPT

（二）B淋巴細(xì)胞----表面標(biāo)志：CD19介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答（三）NK細(xì)胞----表面標(biāo)志：CD16CD561）非特異性殺傷

2）

無(wú)MHC限制性，無(wú)需預(yù)先致敏

3）

不依賴抗體和補(bǔ)體

4）

ADCC

5）釋放IFN-γ7可編輯課件PPT

（四）樹(shù)突細(xì)胞---表面標(biāo)志：CD1a、CD80、CD40、CD86….是目前公認(rèn)的功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，高表達(dá)MHC－I類和MHC－II類分子功能：DC攜帶抗原通過(guò)MHC限制性途徑把抗原遞呈給T細(xì)胞，激活T細(xì)胞而激發(fā)免疫應(yīng)答8可編輯課件PPT

（五）巨噬細(xì)胞---表面標(biāo)志：CD681）處理和呈遞抗原2）活化的巨噬細(xì)胞通過(guò)溶酶體酶直接殺傷3）可通過(guò)分泌細(xì)胞因子間接殺傷腫瘤細(xì)胞4）合成和釋放NO5）ADCC9可編輯課件PPT二、細(xì)胞因子（一）細(xì)胞因子的定義細(xì)胞因子（cytokines,CKs）是一類由活化的免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞及某些腫瘤細(xì)胞）所分泌的小分子蛋白質(zhì)的統(tǒng)稱，能夠作用于分泌細(xì)胞本身或鄰近其他細(xì)胞，具有調(diào)節(jié)免疫效應(yīng)、炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)活性。10可編輯課件PPT

（二）研究的歷史細(xì)胞因子的研究淵源始于50年代的干擾素研究和60年代的集落刺激因子研究?；蚬こ碳夹g(shù)的迅速發(fā)展，帶來(lái)了細(xì)胞因子研究的突破性進(jìn)展。80--90年代相繼克隆出一大批細(xì)胞因子，細(xì)胞因子的化學(xué)本質(zhì)是多肽，從信息傳遞的角度，細(xì)胞因子是生物體內(nèi)一類重要的第一信使分子，是細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的產(chǎn)物。

11可編輯課件PPT

（三）細(xì)胞因子的種類按作用分：

調(diào)節(jié)天然免疫的細(xì)胞因子：TNF-a、IL-1、IL-6等調(diào)節(jié)獲得性免疫的細(xì)胞因子：IL-2、IL-4、IFN-γ等作用于造血系統(tǒng)的細(xì)胞因子：CSF、IL-3、IL-7等按細(xì)胞來(lái)源分類：

免疫細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子：IL-2、IL-3、IL-4等非免疫細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子：IL-7、IL-8、IL-11、CSF等12可編輯課件PPT

細(xì)胞因子的作用方式：自分泌作用旁分泌作用內(nèi)分泌作用。細(xì)胞因子的作用特點(diǎn)：多效性重疊性協(xié)同性拮抗性雙重性13可編輯課件PPT研究意義細(xì)胞因子研究具有非常重要的理論和實(shí)用意義，它有助于闡明分子水平的免疫調(diào)節(jié)機(jī)理，有助于疾病的預(yù)防、診斷和治療，特別是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組細(xì)胞因子已用于治療腫瘤、感染、炎癥、造血功能障礙等，并收到良好療效，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。14可編輯課件PPT三、主要組織相容性復(fù)合體、粘附分子

（一）主要組織相容性復(fù)合體同種異體移植物移植后會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這是由細(xì)胞表面的同種異型抗原誘導(dǎo)的，這種抗原稱為組織相容性抗原。體內(nèi)具有多種組織相容性抗原，其中能引起強(qiáng)而迅速的排斥反應(yīng)者稱為主要組織相容性抗原，其編碼的基因是一組緊密連鎖的基因群，稱為主要組織相容性復(fù)合體15可編輯課件PPT

人的MHC——HLA復(fù)合體（6#染色體）1.經(jīng)典的HLAI類、HLAII類基因HLAI類基因（HLAIa）：HLA-A (locus) HLA-B HLA-CHLAII類基因： HLA-DP (subrigon)HLA-DQ (locusAB)HLA-DR16可編輯課件PPT2.免疫功能相關(guān)基因（1）補(bǔ)體gene（III類基因）（2）抗原加工、遞呈相關(guān)gene（II類基因） LMP、TAP、HLA-DM HLA-DO、TAP相關(guān)蛋白gene17可編輯課件PPT（3）非經(jīng)典的HLAI類gene（HLAIb） HLA-E、HLA-G、HLA-F（4）炎癥相關(guān)gene TNFgene 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 MIC（MHCI相關(guān)gene）：MICA、MICB HSP18可編輯課件PPT

（二）粘附分子定義：是一類介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間粘附作用的膜表面糖蛋白作用：參與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的凋亡參與免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)參與免疫細(xì)胞的發(fā)育和分化19可編輯課件PPT

B7分子：主要分布于B細(xì)胞、DC細(xì)胞、激活的單核細(xì)胞和T細(xì)胞

CD28----激活T細(xì)胞配體

CTLA-4----抑制T細(xì)胞活化20可編輯課件PPT

細(xì)胞粘附因子------intracellularadhesionmoleculeICAMICAM-1（CD54）ICAM-2（CD102）ICAM-3（CD50）作用：介導(dǎo)免疫免疫細(xì)胞的活化、免疫細(xì)胞之間及免疫細(xì)胞與其他細(xì)胞的接觸、免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷21可編輯課件PPT

(三)抗原遞呈MHC-I類分子呈遞途徑：參與內(nèi)源性抗原的呈遞過(guò)程

MHC-II類分子呈遞途徑：參與外源性抗原的呈遞過(guò)程抗原的交叉呈遞：MHCI類分子也能遞呈外源性抗原，MHCII類分子也能遞呈內(nèi)源性抗原。MHC體內(nèi)具有多種組織相容性抗原，其中能引起強(qiáng)而迅速的排斥反應(yīng)者稱為主要組織相容性抗原，其編碼的基因是一組緊密連鎖的基因群，稱為主要組織相容性復(fù)合體（MHC）HLA22可編輯課件PPT基本概念抗原加工：蛋白質(zhì)抗原在細(xì)胞內(nèi)被降解成能與MHC分子結(jié)合的肽的過(guò)程?？乖f呈：MHC分子與抗原肽結(jié)合，將其展示于細(xì)胞表面供T細(xì)胞識(shí)別的過(guò)程。內(nèi)源性抗原：細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)抗原，包括自身抗原和非己抗原----MHCⅠ分子遞呈。外源性抗原：由細(xì)胞外攝入細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)抗原，包括非己抗原和自身抗原---MHCⅡ分子遞呈。23可編輯課件PPTCellsurfacepeptidesofAgAntigensmustbeprocessedinordertoberecognisedbyTcellsYT

Tcellresponse無(wú)應(yīng)答無(wú)應(yīng)答無(wú)應(yīng)答無(wú)應(yīng)答SolublenativeAgCellsurfacenativeAgSolublepeptidesofAg抗原肽-MHC復(fù)合物抗原加工、遞呈24可編輯課件PPT25可編輯課件PPT抗原遞呈細(xì)胞

能攝取、加工、處理抗原并將抗原信息提呈給淋巴細(xì)胞的細(xì)胞，又稱為輔佐細(xì)胞。專職APC(professionalAPC)

能組成性表達(dá)MHC-II類分子、具有較強(qiáng)的抗原提呈作用，包括巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、B細(xì)胞等。兼職APC

非組成性地表達(dá)MHC-II類分子，抗原提呈能力弱，包括內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、上皮及間質(zhì)細(xì)胞等。腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞等也可通過(guò)MHC-I類分子途徑提呈抗原。此類CTL的靶細(xì)胞屬?gòu)V義APC。26可編輯課件PPT抗原加工遞呈的意義實(shí)現(xiàn)免疫系統(tǒng)對(duì)非己抗原的免疫監(jiān)視作用免疫調(diào)節(jié)作用27可編輯課件PPT四、免疫耐受

（一）定義：

免疫耐受（immunetolerancnce）指抗原誘導(dǎo)特異性淋巴細(xì)胞失活或死亡，導(dǎo)致機(jī)體不能對(duì)該抗原產(chǎn)生應(yīng)答的現(xiàn)象。無(wú)效應(yīng)的非特異性免疫缺陷特異性≠(天然，先天/后天獲得性)免疫應(yīng)答無(wú)應(yīng)答免疫抑制

(人工，藥物/射線)28可編輯課件PPT

（二）T細(xì)胞免疫耐受中樞性免疫耐受：①T細(xì)胞的陰性選擇②T細(xì)胞的否定現(xiàn)象外周性免疫耐受：①生理性屏障對(duì)自身抗原的不識(shí)別②外周血自身反應(yīng)性T細(xì)胞克隆的清除③缺乏激活信號(hào)④具有潛在自身反應(yīng)性的T細(xì)胞被抑制29可編輯課件PPT

（二）B細(xì)胞免疫耐受中樞性免疫耐受：克隆排除克隆無(wú)能(clonalanergy)

外周性免疫耐受：已活化的細(xì)胞受到大量抗原持續(xù)刺激時(shí)，可被誘發(fā)凋亡。30可編輯課件PPT研究免疫耐受的意義及應(yīng)用1.理論方面的意義2.臨床治療方面的意義和應(yīng)用治療自身免疫病防止器官移植后的排斥反應(yīng)腫瘤治療31可編輯課件PPT五、抗腫瘤免疫應(yīng)答

－－機(jī)體抗腫瘤的免疫學(xué)效應(yīng)機(jī)制（一）細(xì)胞免疫機(jī)制細(xì)胞免疫在機(jī)體抗腫瘤效應(yīng)中起重要作用。1、CD4+T細(xì)胞：參與B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞和CTL細(xì)胞的活化和抗腫瘤效應(yīng)。A.輔助激活CTL,B細(xì)胞,NK，巨噬細(xì)胞;

B.

分泌細(xì)胞因子：IL-2，IFN-γ，TNF-βC.少數(shù)屬于細(xì)胞毒性T細(xì)胞，具有殺瘤作用32可編輯課件PPT

2、CD8+T細(xì)胞：在機(jī)體抵抗腫瘤效應(yīng)中起關(guān)鍵作用。CTL（細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞）A.

通過(guò)其細(xì)胞膜上的T細(xì)胞抗原識(shí)別受體（TCR），特異性識(shí)別MHC分子－腫瘤抗原肽復(fù)合物，引起T細(xì)胞活化、增殖，殺傷腫瘤細(xì)胞。B.

分泌細(xì)胞因子

33可編輯課件PPT34可編輯課件PPT

3、抗原遞呈細(xì)胞：Mφ、DCA.

通過(guò)攝取、加工處理和遞呈腫瘤抗原，激發(fā)特異性T細(xì)胞免疫而發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。B.活化的巨噬細(xì)胞通過(guò)溶酶體酶直接殺傷,且可通過(guò)分泌細(xì)胞因子間接殺傷腫瘤細(xì)胞。C.合成和釋放NOD.ADCC35可編輯課件PPT36可編輯課件PPT

4.NK細(xì)胞－－非特異性免疫應(yīng)答A.非特異性殺傷

B.

無(wú)MHC限制性，無(wú)需預(yù)先致敏

C.

不依賴抗體和補(bǔ)體

D.

ADCC

E.釋放IFN-γ37可編輯課件PPT

（二）體液免疫機(jī)制1、激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞2、抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）3、抗體的免疫調(diào)理作用4、抗體封閉腫瘤細(xì)胞上的某些受體作用5、抗體使腫瘤細(xì)胞上的黏附特性改變或喪失作用38可編輯課件PPTAgIL-12活化DCTh1DCCTLCD4CD4IL-12NK/NKTTumorIFNIL-2IFNIL-12抗腫瘤免疫應(yīng)答39可編輯課件PPT六、機(jī)體對(duì)腫瘤抗原的免疫應(yīng)答

認(rèn)識(shí)腫瘤抗原以及腫瘤抗原在免疫應(yīng)答中的作用40可編輯課件PPT腫瘤抗原細(xì)胞惡性變過(guò)程中出現(xiàn)的新抗原(neoantigen)及過(guò)度表達(dá)的抗原物質(zhì)的總稱。包括突變的癌基因和抗癌基因編碼的蛋白、病毒誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞表面常常表達(dá)病毒基因編碼的蛋白、共同腫瘤抗原、胚胎抗原。41可編輯課件PPT腫瘤抗原的分類

根據(jù)特異性分類1）腫瘤特異性抗原(tumorspecificantigen,TSA)腫瘤細(xì)胞所特有的或只存在于某種腫瘤細(xì)胞而不存在于正常細(xì)胞的新抗原。2）腫瘤相關(guān)抗原

(tumorassociatedantigen,TAA）非腫瘤細(xì)胞所特有、正常細(xì)胞和其它組織上也存在的抗原，細(xì)胞癌變時(shí)，含量增加。42可編輯課件PPT機(jī)體對(duì)腫瘤抗原的免疫應(yīng)答

機(jī)體抗腫瘤的免疫學(xué)效應(yīng)機(jī)制十分復(fù)雜，涉及多種免疫成分，包括先天性免疫（非腫瘤特異性免疫）和獲得性免疫（腫瘤特異性免疫），二者共同參與機(jī)體免疫機(jī)體免疫。對(duì)于免疫原性較強(qiáng)的腫瘤，特異性免疫應(yīng)答起主要作用對(duì)于免疫原性較弱的腫瘤，非特異性免疫應(yīng)答更重要43可編輯課件PPT第三章、免疫調(diào)節(jié)機(jī)制免疫調(diào)節(jié)-----指抗原驅(qū)動(dòng)的免疫應(yīng)答過(guò)程中，通過(guò)免疫細(xì)胞之間，免疫細(xì)胞與免疫分子之間及免疫系統(tǒng)與其他系統(tǒng)之間的相互作用，使免疫應(yīng)答維持在適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和時(shí)限以保證機(jī)體免疫功能的穩(wěn)定的生物學(xué)過(guò)程。免疫細(xì)胞調(diào)節(jié)：調(diào)節(jié)型T細(xì)胞NKT細(xì)胞γδT細(xì)胞巨噬細(xì)胞44可編輯課件PPT調(diào)節(jié)型T細(xì)胞

（regulatoryTcells,Treg）促進(jìn)一些抑制性細(xì)胞因子的分泌、下調(diào)免疫共刺激分子和粘附分子的表達(dá)、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的免疫反應(yīng)以及抑制傳統(tǒng)T細(xì)胞的活化等。其免疫抑制機(jī)制尚不十分清楚45可編輯課件PPTNKT細(xì)胞是一類特殊的T細(xì)胞亞群，既表達(dá)αβT細(xì)胞受體，同時(shí)又能表達(dá)NK的表明標(biāo)記CD16146可編輯課件PPTγδT細(xì)胞在抗微生物感染免疫和抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用47可編輯課件PPT巨噬細(xì)胞抗腫瘤的作用機(jī)制抗腫瘤功能的抑制及促腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)制48可編輯課件PPT腫瘤對(duì)機(jī)體免疫功能的影響腫瘤誘導(dǎo)的抑制性細(xì)胞

Ts

抑制性巨噬細(xì)胞腫瘤誘導(dǎo)的體液抑制因子封閉抗體腫瘤細(xì)胞產(chǎn)物的免疫抑制作用

TGF-β，IL-1049可編輯課件PPT第四章、腫瘤免疫逃逸機(jī)制抗原缺失和調(diào)變腫瘤細(xì)胞MHCI分子表達(dá)低下腫瘤細(xì)胞表面抗原被封閉腫瘤細(xì)胞缺乏協(xié)同刺激信號(hào)腫瘤細(xì)胞的“漏逸”免疫抑制作用腫瘤抗原誘發(fā)免疫耐受腫瘤細(xì)胞抗凋亡或誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡50可編輯課件PPT腫瘤細(xì)胞“漏逸”某些突變可以是腫瘤細(xì)胞迅速生長(zhǎng)從而超過(guò)了機(jī)體的抗腫瘤免疫效應(yīng)，導(dǎo)致宿主不能有效地清除大量生長(zhǎng)地腫瘤細(xì)胞，稱為腫瘤細(xì)胞地“漏逸”51可編輯課件PPT腫瘤細(xì)胞的免疫原性降低

腫瘤細(xì)胞異常的HLA表型A。正常細(xì)胞HLAI類分子表型(舉例)。腫瘤細(xì)胞異常HLAI類分子表型；B。全部丟失，包括HLA-A、

HI．A-B、HLA-C；C。HLA一條單元型丟失，即HLA-A、HLA-B、

HLA-C三位點(diǎn)均丟失一半等位基因；D。某一位點(diǎn)丟失(此處為HLA-B或A位點(diǎn))；E。某一等位基因丟失(此處為HLA-B44)。52可編輯課件PPT腫瘤表達(dá)免疫抑制分子和

誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡腫瘤的免疫豁免TumorTGF-βFasL—攻擊TcFasFasL53可編輯課件PPT腫瘤誘發(fā)免疫抑制1、腫瘤誘導(dǎo)免疫抑制細(xì)胞抑制性T細(xì)胞抑制性NKT細(xì)胞抑制性巨噬細(xì)胞54可編輯課件PPT

2、腫瘤誘導(dǎo)免疫抑制因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子白細(xì)胞介素-10前列腺素TumorTGF-β免疫抑制55可編輯課件PPT

3、腫瘤誘導(dǎo)T細(xì)胞成分和功能紊亂T細(xì)胞亞群紊亂Th1/Th2漂移T細(xì)胞信號(hào)通路異常56可編輯課件PPT腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞與免疫逃逸腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞表面各種細(xì)胞粘附分子地表達(dá)水平降低腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞MHC類分子的表達(dá)異常腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗自由基損傷活性增強(qiáng)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)能力增強(qiáng)57可編輯課件PPT第五章、腫瘤免疫學(xué)理論的演變58可編輯課件PPT免疫監(jiān)視學(xué)說(shuō)Burnet提出免疫監(jiān)視學(xué)說(shuō)：機(jī)體在生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程中，其體細(xì)胞會(huì)時(shí)常發(fā)生突變，有些突變可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞惡化轉(zhuǎn)化。當(dāng)具有異常增殖能力的腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)形成時(shí)，它們攜帶新的抗原決定簇，隨著腫瘤細(xì)胞的增殖，當(dāng)新的抗原達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，就開(kāi)始產(chǎn)生胸腺依賴性免疫反應(yīng)，最終排斥腫瘤。59可編輯課件PPT人類的免疫監(jiān)視現(xiàn)象免疫缺陷或免疫抑制的個(gè)體具有更高的腫瘤發(fā)生率。對(duì)移植后應(yīng)用免疫抑制劑的患者和先天性免疫缺陷患者的追蹤觀察結(jié)果顯示其腫瘤發(fā)生的相對(duì)危險(xiǎn)度明顯增高。60可編輯課件PPT腫瘤免疫編輯此假說(shuō)認(rèn)為，免疫系統(tǒng)既可能清除腫瘤細(xì)胞或?qū)δ[瘤細(xì)胞產(chǎn)生非保護(hù)性免疫反應(yīng)，又可能促進(jìn)免疫無(wú)反應(yīng)性或免疫耐受性的產(chǎn)生。腫瘤細(xì)胞在于免疫系統(tǒng)的相互作用過(guò)程終，免疫原性強(qiáng)的克隆被清除，免疫原性弱的克隆被保留，腫瘤細(xì)胞基因組的不穩(wěn)定性導(dǎo)致免疫原性更弱的克隆最終形成優(yōu)勢(shì)腫瘤細(xì)胞群體。3個(gè)過(guò)程：免疫清除；免疫平衡；免疫逃逸61可編輯課件PPT第六章、腫瘤的免疫治療基本原理：提高腫瘤抗原免疫原性，激發(fā)和增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答，提高腫瘤對(duì)抗瘤免疫效應(yīng)的敏感性，在體內(nèi)外誘生腫瘤特異性效應(yīng)細(xì)胞和分子等?？鼓[瘤免疫治療包括主動(dòng)免疫治療、被動(dòng)免疫治療。62可編輯課件PPT一、細(xì)胞因子治療1、干擾素1）I型干擾素：由單核巨噬細(xì)胞、病毒誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞、轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞產(chǎn)生種類：IFN-α、IFN-β、IFN-δ、IFN-ε等作用：抑制腫瘤細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)感染腫瘤血管生成其它作用：抗病毒2）II型干擾素：由活化的T細(xì)胞、原始的Th0細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生種類：IFN-γ作用:激活巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等直接殺傷癌細(xì)胞延長(zhǎng)細(xì)胞周期、抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖促進(jìn)MHC-I、II類分子和抗原遞呈細(xì)胞尚共刺激分子的表達(dá)在干擾素的調(diào)節(jié)下，IFN-γ可誘導(dǎo)Th0向Th1分化，抑制向Th2分化，增強(qiáng)細(xì)胞免疫和CTL的殺傷活性臨床藥物：基因工程產(chǎn)品，已國(guó)產(chǎn)化。干擾靈、賽若金、因特芬、派羅欣。。。。。63可編輯課件PPT

適應(yīng)癥：干擾素主要用于治療晚期毛細(xì)胞白血病、腎癌、黑色素瘤、kaposi肉瘤、慢性粒細(xì)胞性白血病和中低度惡性非霍奇金淋巴瘤，其他曾用于骨肉瘤、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、頭頸部癌和膀胱癌等。對(duì)慢性乙、丙型肝炎也有效。用法：第1周300萬(wàn)單位，皮下注射，每周2～3次，第2周每次加到500～600萬(wàn)單位，第3周加到900～1000萬(wàn)單位連續(xù)6周，共8周為1療程。干擾素亦可局部注射（瘤周浸潤(rùn)）、腔內(nèi)注射（癌性胸腹腔積液）或膀胱內(nèi)灌注。64可編輯課件PPT

毒副作用：高劑量干擾素具有一般生物制劑的反應(yīng)即發(fā)熱、流感樣癥狀，肌肉酸痛等，其次是輕度骨髓抑制。一般對(duì)肝腎功能無(wú)影響，少數(shù)有轉(zhuǎn)氨酶、血肌酐升高。65可編輯課件PPT

2、白細(xì)胞介素-2（IL-2)來(lái)源：主要由激活的T淋巴細(xì)胞分泌和表達(dá)，此外NK、轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞和LAK細(xì)胞也可產(chǎn)生作用：①促進(jìn)T細(xì)胞增殖及相應(yīng)的細(xì)胞因子分泌②刺激NK生長(zhǎng)并增強(qiáng)其殺細(xì)胞活性③誘導(dǎo)LAK、NK、TIL擴(kuò)增及細(xì)胞因子的分泌④促進(jìn)B細(xì)胞分化、增殖和產(chǎn)生抗體⑤參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、抗腫瘤免疫反應(yīng)和移植排斥反應(yīng)臨床藥物：基因工程IL-2欣吉爾、德路生、遠(yuǎn)策欣。。。。66可編輯課件PPT

適應(yīng)癥：用于腎細(xì)胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直腸癌、淋巴瘤、肺癌等惡性腫瘤的治療。用于癌性胸腹水的控制。用于手術(shù)后、放療及化療后的腫瘤治療，可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。也用于自身免疫性疾病和病毒性、細(xì)菌性疾病的治療，如乙肝、結(jié)核病。用法：1）胸腹腔注射100-200萬(wàn)IU/次，每周1-2次，2-4周為一療程。2）局部注射根據(jù)癌灶大小決定劑量，每次每個(gè)病灶不少于610萬(wàn)IU，隔日1次，4周為一療程。3）皮下注射60-100萬(wàn)IU/m3，每日1次，每周5次，4周為一療程。4）靜脈滴注40-80萬(wàn)IUIU/m3，每日1次，緩慢滴注，每周5次，4周為一療程。67可編輯課件PPT

毒副作用：治療中常見(jiàn)副反應(yīng)為發(fā)熱、寒戰(zhàn)、乏力、惡心、輕度食欲下降等。其他少見(jiàn)的副反應(yīng)包括局部反應(yīng)、皮疹、血壓下降、水潴留、轉(zhuǎn)氨酶升高等。這些副反應(yīng)多為輕度、易耐受，停藥后可自行緩解。必要時(shí)可給與消炎痛或給予升壓等措施對(duì)癥處理。68可編輯課件PPT

3、IL－12：主要是由抗原呈遞細(xì)胞（如單核巨噬細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生）

作用：①誘導(dǎo)Th0分化為Th1，增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答②促進(jìn)NK、T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)LAK、TIL產(chǎn)生，并增強(qiáng)上述細(xì)胞的殺傷功能③誘導(dǎo)Th1、NK分泌IFN-γ④促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮，殺傷腫瘤細(xì)胞⑤抑制腫瘤血管的生成⑥增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞表達(dá)MHC-III類分子，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫效應(yīng)細(xì)胞的易感性⑦增加抗原遞呈細(xì)胞對(duì)腫瘤抗原的遞呈功能69可編輯課件PPT

動(dòng)物試驗(yàn)：應(yīng)用基因工程技術(shù)，將IL-12基因?qū)肽[瘤細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，制成腫瘤疫苗，使IL-12在局部分泌，誘發(fā)機(jī)體的抗腫瘤免疫。70可編輯課件PPT

臨床試驗(yàn)：最近的一個(gè)多中心、隨機(jī)的臨床試驗(yàn)，重組人(rHu)IL-12分別以0．03μg、0．25μg或0．5μg／kg2／周x12周，治療46例慢性乙型肝炎病人。與治療前比較，治療結(jié)束和隨訪12周后HBVDNA水平顯著降低(P<0．001)。對(duì)IL-12的效應(yīng)與劑量相關(guān)，治療結(jié)束時(shí)病毒清除3個(gè)劑量組依次為7％、13％和25％；隨訪結(jié)束時(shí)5例HBeAg陰轉(zhuǎn)。較大劑量較易有不良反應(yīng)，包括淋巴細(xì)胞和嗜中性細(xì)胞數(shù)中度減少，3例未完成療程；注射處可有局部反應(yīng)；僅1例檢出對(duì)rHulL-12的抗體。71可編輯課件PPT

Ohe等對(duì)IL-12治療癌患者的臨床病例作了回顧性的總結(jié)報(bào)道：IL-12治療臨床上可觀察到IL-10產(chǎn)生和NK細(xì)胞、LAK活性短暫增高，少數(shù)患者能取得部分療效，但顯著性療效的病例尚未見(jiàn)報(bào)道，而且有許多毒副作用，如發(fā)熱、疲勞、流感樣反應(yīng)、關(guān)節(jié)痛、肌痛、白細(xì)胞減少、肝功能損害等。盡管如此，IL-12治療前景不可低估。臨床證實(shí)，IL-12能恢復(fù)由實(shí)體瘤轉(zhuǎn)移患者PBMC獲得的NK細(xì)胞活性，IL－12還能增強(qiáng)毛細(xì)胞白血病患者NK細(xì)胞活性。隨著對(duì)IL-12抗腫瘤機(jī)制研究的深入及IL-12用藥劑量、途徑、協(xié)同用藥等方面的改進(jìn)，IL-12將會(huì)成功發(fā)展為有重要臨床應(yīng)用價(jià)值的抗癌新藥。72可編輯課件PPT

4、IL-4：主要由活化的T淋巴細(xì)胞（特別是Th2細(xì)胞）產(chǎn)生。作用：⑴促進(jìn)休止期的B細(xì)胞活化，促進(jìn)B細(xì)胞分泌IgE，增加B細(xì)胞的抗原遞呈功能，促進(jìn)體液免疫應(yīng)答。⑵維持胸腺細(xì)胞和活化T細(xì)胞的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)Th2產(chǎn)生，抑制Th1分泌細(xì)胞因子。⑶誘導(dǎo)NK細(xì)胞增殖。⑷激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn)其抗原遞呈和殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。⑸誘導(dǎo)外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌M-CSF和G-CSF，增強(qiáng)中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬、殺傷功能和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)（ADCC）應(yīng)用：主要用于DC細(xì)胞的誘導(dǎo)、擴(kuò)增。73可編輯課件PPT

5、腫瘤壞死因子TNF1）TNF-α：主要來(lái)源于LPS、細(xì)菌DNA等抗原分子激活的單核巨噬細(xì)胞、其它細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生的。作用：①影響免疫反應(yīng)過(guò)程②影響非免疫細(xì)胞③促進(jìn)細(xì)胞因子分泌④調(diào)控細(xì)胞凋亡⑤全身反應(yīng)2）TNF-β：主要由Th1、CD8＋T細(xì)胞和早期的B細(xì)胞產(chǎn)生作用：是炎癥過(guò)程的重要組成成分74可編輯課件PPT

6、集落刺激因子：是一種低分子量糖蛋白，能夠在體內(nèi)外選擇性刺激造血干細(xì)胞增生、分化成某一譜系的細(xì)胞分類：G-CSF,M-CSF,GM-CSF,IL-3,EPO,SCF75可編輯課件PPT

7、胸腺素分為αβ兩族作用：1）具有免疫增強(qiáng)作用，可促進(jìn)T細(xì)胞、NK、LAK等細(xì)胞的增殖及殺傷活性2）參與細(xì)胞骨架的形成，通過(guò)對(duì)肌動(dòng)蛋白的調(diào)節(jié)，參與某些腫瘤的轉(zhuǎn)移76可編輯課件PPT二、腫瘤的主動(dòng)免疫治療應(yīng)用腫瘤抗原或模擬腫瘤抗原的疫苗刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，激發(fā)或增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤特異性免疫應(yīng)答，阻止腫瘤生長(zhǎng)、擴(kuò)散和復(fù)發(fā)。77可編輯課件PPT腫瘤疫苗腫瘤疫苗與傳統(tǒng)疫苗在概念上不同，它主要不是用于腫瘤的預(yù)防，而是通過(guò)瘤苗的接種來(lái)刺激機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答來(lái)治療腫瘤。該法應(yīng)用的前提是腫瘤抗原能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。對(duì)手術(shù)后清除微小轉(zhuǎn)移瘤灶和隱匿瘤、預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有較好的效果。78可編輯課件PPT1、腫瘤細(xì)胞疫苗即通過(guò)自體腫瘤細(xì)胞粗提取物，經(jīng)物理化學(xué)或生物手段處理后抑制其生長(zhǎng)能力，保持其免疫原性，但其免疫原性好，需加入佐劑如卡介苗等以增強(qiáng)免疫原性，但效果不甚理想。79可編輯課件PPT2、腫瘤基因工程疫苗腫瘤基因工程疫苗通過(guò)基因重組技術(shù)，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞而制備的疫苗。80可編輯課件PPT1)、提高機(jī)體抗腫瘤能力將外源基因?qū)朊庖呒?xì)胞，其表達(dá)產(chǎn)物作用于免疫細(xì)胞，促進(jìn)免疫細(xì)胞生長(zhǎng)、分化，從而提高機(jī)體的抗腫瘤能力。目前研究較多的是細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)，如IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-15、IL-18、IFN-γ以及GM-CSF等。實(shí)驗(yàn)顯示，在各種細(xì)胞因子中，以GM－CSF基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗效果最好，這與其誘導(dǎo)DC成熟有關(guān)。81可編輯課件PPT2)、增強(qiáng)腫瘤免疫原性通過(guò)表達(dá)腫瘤所缺乏的某些分子，以增強(qiáng)其免疫原性。如將B7基因?qū)刖哂心[瘤抗原的腫瘤細(xì)胞，不僅能恢復(fù)腫瘤特異性免疫反應(yīng)，也可增強(qiáng)IL-2的抗瘤活性。一些腫瘤相關(guān)抗原（TAA）基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究，顯示也可以增強(qiáng)其免疫原性，如CEA、AFP、gp100、MART-1。82可編輯課件PPT3)、基因產(chǎn)物直接殺傷瘤細(xì)胞如TNF基因?qū)肽[瘤細(xì)胞可使局部持續(xù)分泌TNF、從而直接殺傷腫瘤細(xì)胞。83可編輯課件PPT3、肽疫苗肽疫苗主要包括以下二種：1）、癌基因、抑癌基因突變肽疫苗目前已合成的p21-K-Ras-125突變肽、EGFRvIII突變肽和Her2/neu肽等。2）、病毒相關(guān)疫苗如EB病毒與鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤，HBV與肝癌，人類T細(xì)胞白血病病毒與成人T細(xì)胞白血病。84可編輯課件PPT4、核酸疫苗核酸疫苗是由能引起保護(hù)性免疫反應(yīng)的抗原基因片段及其載體構(gòu)建而成。包括DNA疫苗和RNA疫苗。85可編輯課件PPT5、抗獨(dú)特型抗體疫苗抗獨(dú)特型抗體疫苗具有模擬抗原及免疫調(diào)節(jié)的雙重作用，能克服機(jī)體免疫抑制，打破免疫耐受，故能代替腫瘤抗原誘導(dǎo)特異性主動(dòng)免疫反應(yīng)。腫瘤抗原可誘導(dǎo)抗體(Ab1)產(chǎn)生，該抗體可變區(qū)的獨(dú)特型決定簇具有免疫源性，可誘導(dǎo)抗體Ab2產(chǎn)生，稱為抗獨(dú)特性抗體。在這些Ab2中，有的可模擬原來(lái)的抗原結(jié)構(gòu)誘導(dǎo)抗原的特異性免疫反應(yīng)，可作為腫瘤疫苗應(yīng)用。86可編輯課件PPT

有些已進(jìn)入Ⅱ、Ⅲ期臨床：卵巢癌相關(guān)抗原CA125的獨(dú)特型疫苗：AcA125黑色素瘤的獨(dú)特性疫苗：BEC2、TriGem等淋巴瘤的獨(dú)特性疫苗：Id-KLH乳腺癌的獨(dú)特性疫苗：1E10結(jié)直腸癌的獨(dú)特性疫苗：105AD787可編輯課件PPT6、樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）疫苗

腫瘤抗原屬于內(nèi)源性抗原，機(jī)體主要依靠CTL免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細(xì)胞。但腫瘤細(xì)胞表面的MHC-抗原肽段復(fù)合物表達(dá)水平低，需要經(jīng)體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞加工、處理，提供誘導(dǎo)T細(xì)胞活化的第二信號(hào)，才能激發(fā)腫瘤特異性CTL的產(chǎn)生。由于DC在誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答中的重要功能，目前認(rèn)為，DC在啟動(dòng)抗腫瘤免疫的抗原呈遞中發(fā)揮重要作用。88可編輯課件PPTDendriticcells

connectinnateimmunityandadaptiveimmunity89可編輯課件PPT

體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，人DC至少有三條來(lái)自于不同前體細(xì)胞的發(fā)育途徑：1）CD34+細(xì)胞分化為DC2）外周血單核細(xì)胞分化為DC3）淋巴樣DC前體細(xì)胞分化途徑90可編輯課件PPT臨床應(yīng)用腫瘤抗原可以基因、多肽、蛋白、甚至完整細(xì)胞的形式負(fù)荷給DC，因此DC疫苗的制備明顯比基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗容易，因而促進(jìn)了DC疫苗進(jìn)入臨床試驗(yàn)。1996美國(guó)斯坦福大學(xué)的Hsu等首先采用抗獨(dú)特型抗體負(fù)荷的DC疫苗治療了4例B細(xì)胞型淋巴瘤，3例獲部分緩解。91可編輯課件PPT臨床應(yīng)用Nestle(1998)等采用腫瘤細(xì)胞溶解物或MHC－II類分子限制的多肽抗原負(fù)荷DC，然后與免疫佐劑KLH（keyholeLimpethemocyanin）聯(lián)合應(yīng)用治療了16例轉(zhuǎn)移性黑色素瘤，其中2例獲完全緩解，3例獲部分緩解，1例獲微小反應(yīng)；在反應(yīng)的5例患者中，有2例為腫瘤細(xì)胞溶解物負(fù)荷的DC疫苗。92可編輯課件PPT

由于大多數(shù)腫瘤抗原未被識(shí)別，因此腫瘤細(xì)胞溶解物負(fù)荷的DC疫苗可使更多的患者接受此種方法治療。93可編輯課件PPT三、腫瘤的被動(dòng)免疫治療

（一）、抗體靶向治療1.抗腫瘤單克隆抗體直接體內(nèi)應(yīng)用很多進(jìn)入臨床治療試驗(yàn)，包括抗白細(xì)胞分化抗原CD19、CD20、CD22、CD33，表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR），MUC－1，前列腺特異性抗原（PSA），前列腺特異性膜抗原（PSMA），癌基因c－erbB2產(chǎn)物，神經(jīng)節(jié)苷酯GD3、GM2等抗原的單抗。

94可編輯課件PPT

2.抗腫瘤單克隆抗體與抗腫瘤藥物、生物毒素、細(xì)胞因子或放射性核素偶聯(lián)：生物毒素，如假單胞菌毒素或蓖麻毒素放射線同位素，如131I、186Re、177Lu、90Y、212Bi、67Cu、等單抗作為導(dǎo)向物可增加毒素、放射性同位素等在腫瘤局部的濃度，增加對(duì)腫瘤的殺傷力或誘導(dǎo)腫瘤局部的免疫反應(yīng)。95可編輯課件PPT

3.基因工程抗體-毒素（或酶）融合蛋白直接殺瘤4.抗腫瘤單克隆抗體和抗效應(yīng)細(xì)胞表面分子的抗體組成雙特異性抗體，可引導(dǎo)殺瘤效應(yīng)細(xì)胞向腫瘤灶集中5.胞內(nèi)抗體在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，特異性作用于致瘤的癌基因產(chǎn)物或端粒酶96可編輯課件PPT

（二）、腫瘤過(guò)繼性免疫治療向腫瘤患者體內(nèi)輸注具有抗瘤活性的免疫細(xì)胞，直接殺傷腫瘤細(xì)胞或激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)。回輸?shù)男?yīng)細(xì)胞包括：在體外用腫瘤抗原或淋巴因子激活的淋巴細(xì)胞（CIK、TIL等）、導(dǎo)入外援細(xì)胞因子基因并表達(dá)相應(yīng)產(chǎn)物的淋巴細(xì)胞等。97可編輯課件PPT1、LAK細(xì)胞LAK細(xì)胞是在1980年由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所Rosenberg發(fā)現(xiàn)，并在1982年由Grimm等命名的。這是一類由IL-2激活的能夠殺傷NK抵抗的新型免疫細(xì)胞，是一種強(qiáng)烈的，廣譜的，具有殺瘤活性的細(xì)胞。隨后臨床上廣泛應(yīng)用于腫瘤等疾病治療。但由于LAK細(xì)胞活性的維持需要IL-2，而IL-2副作用大，而且在以后的臨床總結(jié)中發(fā)現(xiàn)LAK細(xì)胞療效較低，現(xiàn)已基本不用。98可編輯課件PPT2、CD3AK細(xì)胞是在LAK細(xì)胞基礎(chǔ)上，用抗CD3單抗和IL-2聯(lián)合誘導(dǎo)的殺瘤細(xì)胞。由于使用了抗CD3單抗刺激，減少了IL-2的用量，降低LAK治療的毒副作用，且CD3AK的抗腫瘤活性大大高于LAK細(xì)胞。山東胡偉等對(duì)晚期惡性腫瘤患者輸注自體CD3AK細(xì)胞1個(gè)療程后,實(shí)體瘤組治療有效率為25.45%,臨床獲益率為74.54%;淋巴瘤組有效率為83.33%,臨床獲益率為91.67%。99可編輯課件PPT

在利用外周血淋巴細(xì)胞制備免疫效應(yīng)細(xì)胞的研究中，為增加效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量和殺瘤活性，常添加一些激活劑如抗CD3單抗，植物血凝素PHA等，以提高免疫治療療效。實(shí)驗(yàn)顯示PHA預(yù)刺激雖能促進(jìn)IL-2激活的殺傷細(xì)胞的增殖，但對(duì)殺傷活性并無(wú)明顯改善，而培養(yǎng)15天以上，經(jīng)PHA預(yù)刺激的P-LAK和P-CD3AK細(xì)胞殺傷活性顯著提高，且PHA與抗CD3單抗有協(xié)同效應(yīng)。100可編輯課件PPT3、TIL細(xì)胞腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞，是從新鮮的腫瘤組織中分離出來(lái)，體外經(jīng)IL-2，抗CD3單抗，TNF等刺激，經(jīng)20-45天培養(yǎng)，獲得的具有一定特異性的抗腫瘤細(xì)胞。其局限在于分離困難，體外培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。101可編輯課件PPT

我們于1997-1998年選擇21例癌性胸腹水患者，其中肺癌4例，乳腺癌5例，腸癌4例，骨癌7例，胰腺癌1例。所有病例均經(jīng)病理學(xué)和細(xì)胞學(xué)診斷。共抽取33次胸腹水做TIL細(xì)胞培養(yǎng)，抽取胸水250—2200ml，腹水量1200—4400ml。21例患者中14例經(jīng)1—6次的TIL胸腹腔回輸治療。回輸期間隔天皮下注射IL-250萬(wàn)單位。14例患者回輸治療結(jié)果顯示總有效率為78.57%，其中3例胸腹水消失，并觀察1個(gè)月無(wú)復(fù)發(fā)，1個(gè)月后檢查胸腹水無(wú)瘤細(xì)胞；8例胸腹水有明顯減少，并控制1個(gè)月以上；3例僅控制1—2周。102可編輯課件PPT4、TAK細(xì)胞TAK是由可溶性腫瘤抗原，抗CD3單抗和IL-2共同誘導(dǎo)的殺瘤細(xì)胞。用可溶性腫瘤抗原誘導(dǎo)細(xì)胞識(shí)別腫瘤，以提高殺瘤親和性；用抗CD3單抗誘導(dǎo)所有T細(xì)胞活化，培養(yǎng)出以CD8+T細(xì)胞為主的殺瘤細(xì)胞。TAK細(xì)胞不僅增加了殺瘤的特異性，且體外增殖快，IL-2用量低。103可編輯課件PPT

我們用鹽析法提取胃癌可溶性抗原（TSA），并用抗CD3單抗和IL-2共同刺激正常人的外周血單核細(xì)胞，培養(yǎng)10天后，經(jīng)流式細(xì)胞儀表型分析，表明其免疫效應(yīng)細(xì)胞以CD8+T細(xì)胞為主，其細(xì)胞增殖速度，增殖水平與CD3AK和LAK相比明顯升高，且對(duì)抗原來(lái)源的胃癌細(xì)胞具有極強(qiáng)的殺傷活性（98.5%），高于CD3AK（82.1%）和LAK（62.05%）。104可編輯課件PPT

我們于1996-1998年，采用靜脈或口服化療和免疫效應(yīng)細(xì)胞輸注為主體的化學(xué)免疫療法，治療晚期原發(fā)性肝癌18例。收治的38例晚期原發(fā)性肝癌病人中，18例采用化學(xué)免疫療法（甲組），同期收治的晚期肝癌患者，除對(duì)癥處理外，單用靜脈化療或肝動(dòng)脈插管化療20例，列為對(duì)照組（乙組）?？偩徑饴剩–R+PR）：甲組22.22%（4/18），乙組無(wú)1例緩解。105可編輯課件PPT5、CIK細(xì)胞是將人外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)體外用各種細(xì)胞因子共同刺激培養(yǎng)所獲得的免疫細(xì)胞。由于同時(shí)表達(dá)CD3和CD56分子，故又稱為NK樣T細(xì)胞，CIK細(xì)胞兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤特點(diǎn)，其抗腫瘤活性遠(yuǎn)大于LAK和TIL。因此被認(rèn)為是新一代腫瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫治療的首選方案。刺激因子除了抗CD3單抗、IL-2外，還需用IFN-γ和IL-1α等細(xì)胞因子。106可編輯課件PPTCIK細(xì)胞殺傷機(jī)制

①、識(shí)別

由于CIK的細(xì)胞殺傷作用是非MHC限制性的，故CD4、CD8在其識(shí)別腫瘤細(xì)胞或病毒感染的細(xì)胞過(guò)程中并非必不可少。細(xì)胞表面粘附分子LFA-1ICAM-1在CIK細(xì)胞識(shí)別過(guò)程中起關(guān)鍵作用。對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒性作用。

107可編輯課件PPT

②、殺傷

CIK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞或感染細(xì)胞的直接殺傷：CIK細(xì)胞在受到外源性抗CD3McAb或敏感靶細(xì)胞刺激時(shí)會(huì)釋放具有細(xì)胞毒性的胞漿顆粒物到膜外空間，其中CD3+CD56+細(xì)胞可產(chǎn)生最大的顆粒釋放量。這些胞漿顆粒物對(duì)靶細(xì)胞具有直接殺傷作用。

炎性細(xì)胞因子的殺傷活性：培養(yǎng)的CIK細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子，如IFN-γ、TNF-α（腫瘤壞死因子-α）、IL-2等，不僅對(duì)靶細(xì)胞有直接抑制作用，還可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)反應(yīng)性間接殺傷靶細(xì)胞。

誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡：CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中表達(dá)FasL（Ⅱ型跨膜糖蛋白），一方面增強(qiáng)了其對(duì)FasL+腫瘤細(xì)胞引發(fā)的Fas-FasL凋亡的抵抗性，還可通過(guò)對(duì)Fas+（Ⅰ型跨膜糖蛋白）腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡行使其對(duì)腫瘤細(xì)胞的慢性殺傷作用，保證抗瘤活性的長(zhǎng)期持久。108可編輯課件PPTCIK細(xì)胞的殺瘤特點(diǎn)

1、增殖速度快

CIK細(xì)胞中的效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞在正常人外周血中極其罕見(jiàn)，僅1%～5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)28～30天，CD3+CD56+細(xì)胞迅速增多，較培養(yǎng)前升幅可達(dá)1000倍以上。且所占百分比也大幅上升，細(xì)胞毒活性亦達(dá)峰值。

2、殺傷活性高、殺瘤譜廣

CIK細(xì)胞的總殺傷單位（TLU）為L(zhǎng)AK細(xì)胞的73倍甚至更高，CIK細(xì)胞的瘤細(xì)胞抑制Log指數(shù)為2.5～3.5，較LAK細(xì)胞的瘤細(xì)胞抑制指數(shù)高2個(gè)Log。其抗病毒活性大大增強(qiáng)。因沒(méi)有T淋巴細(xì)胞殺傷時(shí)的MHC限制性，故對(duì)于多種腫瘤細(xì)胞系和新鮮腫瘤組織均表現(xiàn)出強(qiáng)大的殺傷活性。

3、對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感

CIK細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性，兩者比較無(wú)差別。

4、殺瘤活性不受CsA、FK506等免疫抑制劑的影響

免疫抑制劑CsA（環(huán)孢霉素A）和FK506（普樂(lè)可復(fù)）不影響靶細(xì)胞誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞脫顆粒，并且CIK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷活性不會(huì)因此降低。

5、對(duì)正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性很小

CIK細(xì)胞對(duì)正常髓系克隆生成幾乎沒(méi)有影響，對(duì)GM-CFU（粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落形成單位）僅有不足1級(jí)的抑制。

6、能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡

CIK細(xì)胞內(nèi)有抗凋亡基因表達(dá)，并檢出多種保護(hù)基因，如Bcl-2等和survivin的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。CIK細(xì)胞具備合成FasL的能力，CIK細(xì)胞可以對(duì)抗體內(nèi)FasL陽(yáng)性腫瘤所引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞活性下降。

109可編輯課件PPTCIK制備采集：外周血單個(gè)核細(xì)胞。分離：PBMNC經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離、洗滌后懸浮于含10%AB血清的RPMI1640中。培養(yǎng)：第一天培養(yǎng)加入γ-IFN1000U/ml，24小時(shí)后加入IL-21000U/ml，在37℃，5%CO2孵箱中培養(yǎng)。以后每3天更換培養(yǎng)液補(bǔ)加IL-21000U/ml；培養(yǎng)7～10天。無(wú)菌檢測(cè)：細(xì)菌霉菌培養(yǎng)陰性；熱源檢測(cè)陰性。收獲：收集細(xì)胞，加入含1%白蛋白的生理鹽水洗滌三遍。

110可編輯課件PPT111可編輯課件PPT112可編輯課件PPTCIK治療回輸：洗滌后的細(xì)胞懸浮于1%白蛋白生理鹽水中，將CIK細(xì)胞通過(guò)輸血器經(jīng)靜脈輸給患者。療程：培養(yǎng)的第8-10天開(kāi)始，分四次回輸，每次間隔1-2天。自回輸CIK細(xì)胞前一天起,連續(xù)每日靜脈輸注IL-2，每日劑量為100萬(wàn)單位直到回輸結(jié)束。113可編輯課件PPT觀察指標(biāo)

1、CIK培養(yǎng)前后免疫標(biāo)志檢測(cè)（包括CD3、CD4、CD8、CD3CD56等）

2、CIK回輸前后患者外周血免疫標(biāo)志檢測(cè)（包括CD3、CD4、CD8、CD3CD56等）

3、CIK細(xì)胞回輸前后患者不良反應(yīng)的觀察。

114可編輯課件PPT115可編輯課件PPT臨床應(yīng)用體內(nèi)回輸CIK細(xì)胞,可以在沒(méi)有損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下,直接殺傷腫瘤細(xì)胞,并可調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。特別適應(yīng)于那些對(duì)手術(shù)、放療、化療已無(wú)適應(yīng)證的晚期腫瘤患者,因而成為治療腫瘤的重要輔助治療方法,為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)、改善生存質(zhì)量提供了新途徑。一般在放療、化療后間隔2～4周,機(jī)體免疫力有所恢復(fù)時(shí),輸入CIK細(xì)胞,可提高腫瘤患者的緩解率并在清除微小殘留病灶方面發(fā)揮重要作用。116可編輯課件PPTCombinedtranscatheterarterialchemoembolizationandcytokineinducedkillersforhepatocellularcarcinoma67patientswithhepatocellularcarcinoma21patientsweretreatedwithTACE+CIK46patientsweretreatedwithTACEonly.Result:Themediansurvivalperiodofcontrolledgroupandobservedgroupis22months(95%C7,37),10months(95%C8,12)respectively.Thesix-month,oneyear,andtwoyearslivingrateswere85.71%,58.35%,48.62%and69.05%,32.74%,3.97%respectively117可編輯課件PPTKaplan-Meieranalysissurvivalfor67hepatocellularcarcinoma118可編輯課件PPT典型病例患者，男，61歲，于2009.6.25因“右上腹悶痛1周”住我院，入院查B超:右肝實(shí)性占位（結(jié)合臨床：傾向原發(fā)性肝癌）伴門脈癌栓形成。MRI(NO.9401):1.右肝占位，考慮肝硬化惡變并門脈癌栓形成，腫瘤大小約：11.2x6cm。2.脾腫大并少量腹水3.雙腎囊腫。AFP:204628ng/ml。診斷為：1.原發(fā)性肝癌伴門脈主干癌栓（IIIA期）2.乙肝后肝硬化3.右肺錯(cuò)構(gòu)瘤術(shù)后4.C7、T9局部骨質(zhì)缺損。入院后予2009.6.29、2009.7.22、2009.8.24行介入治療，共用FUDR3.0、艾恒600mg。同時(shí)配合CIK細(xì)胞免疫療法。2009.8.31復(fù)查AFP:49249ng/ml。MRI:1.原發(fā)性肝癌介入治療后較前好轉(zhuǎn)，部分病灶存活，腫瘤大小約：6.4x4.88cm。療效評(píng)價(jià)：好轉(zhuǎn)。119可編輯課件PPT典型病例患者，男，38歲，于2008.10.24以“反復(fù)腹脹痛1月”為主訴就診我院。當(dāng)時(shí)B超、CT:右肝多發(fā)實(shí)性占位，考慮原發(fā)性肝癌（最大者大小約11.4x10.2x15cm），門脈高壓并脾腫大；AFP:375.3ng/ml，AFP-L3:18.5；肝穿細(xì)胞學(xué)見(jiàn)肝細(xì)胞癌。分別于2008.10.31、2008.11.30、2009.1.6、2009.2.23，2009.6.22行肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)，共用澤菲7.2，艾恒900mg，碘化油93ml，治療后出現(xiàn)栓塞后綜合癥，對(duì)癥處理后緩解。期間配合CIK免疫治療2療程。2009.8.19復(fù)查AFP:2.79ng/ml，MRI：肝癌介入治療后：腫瘤存活區(qū)域較前縮小。120可編輯課件PPT典型病例患者，男，51歲。2003.2.21因“右上腹悶痛”在外院查彩超示：肝右后下段占位性病變，約3.0cm。AFP1274ng/ml。擬診“原發(fā)性肝癌硬化型”，在上海逸仙醫(yī)院行“肝右葉部分切除術(shù)”。術(shù)后病理：肝細(xì)胞癌分化中等伴壞死,癌旁腺管內(nèi)見(jiàn)癌栓。2003.4.21復(fù)查AFP51.79ng/ml，我院行TACE術(shù)，予“脫氧氟尿苷、0.75、順鉑60mg、表阿霉素20mg”肝動(dòng)脈灌注；另“表阿霉素30mg+碘油5ml”，其中4ml肝右動(dòng)脈、余1ml肝左動(dòng)脈灌注。于2003.5.31、2003.6.6復(fù)查AFP分別為255ng/ml、309ng/ml。遂于2003.6.19再行TACE術(shù)，予“表阿霉素40mg+碘油5ml”肝固有動(dòng)脈灌注。術(shù)后復(fù)查AFP正常。2003.6、2003.8、2003.10、2003.12分別給予CIK一療程（隔天一次，共4次）配合白介素-2免疫治療，無(wú)明顯反應(yīng)。2004.5，2005.3，2005.11分別行3療程的CIK治療。目前身體狀況良好，每半年復(fù)查1次，各項(xiàng)指標(biāo)均正常，未做其他治療。2009.5.21檢查，乙肝病毒DNA＜500拷貝數(shù)/毫升，甲胎蛋白2.07ng/ml，甲胎蛋白異質(zhì)體＜25ng/ml，肝功正常。121可編輯課件PPT典型病例患者，女，52歲。于2003.08在我院診斷為“左乳腺癌”，行左乳腺癌改良根治術(shù)，期間查CT示：肝內(nèi)多發(fā)肝硬化結(jié)節(jié)。2005.03在福州軍區(qū)總醫(yī)院查PET/CT示：肝右葉內(nèi)異常代謝灶，考慮惡性腫瘤。后在上海中山醫(yī)院診斷為”肝癌“，查AFP2603ng/ml，2005.3.17行TACE術(shù)1次，用FUDR1000mg，艾恒200mg，EADM50mg，碘油10ml。2005.4.15在我院復(fù)查肝CT示：肝內(nèi)多發(fā)病變（最大約8.0cmX5.0cm）介入治療后，血AFP28.9ng/ml。于2005.4、2005.7、2005.10行CIK免疫治療3療程。其間2005.8查AFP1.16ng/ml。2007.4、2008.11分別給予CIK一療程，目前身體狀況良好，每3個(gè)月復(fù)查1次，各項(xiàng)指標(biāo)均正常。2009.4.8檢查，甲胎蛋白＜0.61ng/ml，肝功正常，但CEA4.08ng/ml，CA153正常。122可編輯課件PPTCIK輸注不良反應(yīng)

免疫活性細(xì)胞回輸后患者可出現(xiàn)一過(guò)性類流感樣癥狀，如發(fā)熱（體溫37.5～39.5℃），輕度頭痛、乏力、關(guān)節(jié)酸痛，持續(xù)時(shí)間均不超過(guò)12h，可自行緩解，所有患者均能很好耐受治療。123可編輯課件PPT

由于該治療技術(shù)能在一定程度上打破免疫耐受、進(jìn)而清除病毒和腫瘤細(xì)胞，成為主要的抗腫瘤細(xì)胞療法。2001年CIK療法作為經(jīng)常性醫(yī)療項(xiàng)目，進(jìn)入《全國(guó)醫(yī)療服務(wù)價(jià)格項(xiàng)目規(guī)范》。目前在我省也列入各級(jí)醫(yī)保項(xiàng)目。124可編輯課件PPT6、DC-CIKMarten等將外周血來(lái)源的CIK細(xì)胞和同源DC細(xì)胞共培養(yǎng)一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn),DC和CIK細(xì)胞的增殖能力明顯增強(qiáng),共培養(yǎng)14d后CIK細(xì)胞的增殖倍數(shù)比共培養(yǎng)7d時(shí)高出2倍左右。共培養(yǎng)24h后,DC細(xì)胞白細(xì)胞介素－12的分泌量為單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)的6.93倍,與DC細(xì)胞共培養(yǎng)的CIK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性顯著提高。在當(dāng)前對(duì)腫瘤特異性抗原了解相對(duì)較少的情況下,應(yīng)用DC－CIK細(xì)胞作為腫瘤放化療和手術(shù)后的輔助治療有重要臨床意義。125可編輯課件PPT7、NK細(xì)胞是機(jī)體固有免疫的重要成員，它的作用不僅是參與免疫巡邏并向宿主“報(bào)告”損傷，還有其內(nèi)在的抗腫瘤活性，包括溶解腫瘤細(xì)胞和釋放細(xì)胞因子或阻斷血管發(fā)生以阻礙腫瘤生長(zhǎng)。126可編輯課件PPTNK細(xì)胞受體和配體

127可編輯課件PPTMICA分子MIC(MHCclassI-relatedmolecules,MIC)為MHC-I類相關(guān)分子人類MIC家族共有7個(gè)基因(MICA～MICG)與經(jīng)典的HLA基因產(chǎn)物相比MICA的表達(dá)不受HLA-I類和II類的限制128可編輯課件PPTMICA分子

NKG2DMICANKcellTumorcell乳腺癌患者：惡性組織：（53.2±5.6）%良性組織：（38.5±7.5）%正常組織：不表達(dá)129可編輯課件PPT

因此，腫瘤細(xì)胞表面MICA存在是NK細(xì)胞殺傷腫瘤的重要分子機(jī)制。通過(guò)測(cè)定腫瘤細(xì)胞表面MICA的表達(dá)水平，可預(yù)測(cè)NK細(xì)胞為主的免疫治療的療效。換句話說(shuō)，可以根據(jù)患者腫瘤組織MICA水平?jīng)Q定是否進(jìn)行免疫治療或采取何種免疫治療，避免了盲目性。

－－美國(guó)已經(jīng)開(kāi)始該方面的臨床治療研究130可編輯課件PPT