臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)

臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)，是臨床生化檢驗(yàn)質(zhì)量控制的重要基礎(chǔ)工作。當(dāng)建立一個(gè)新的方法，或引進(jìn)新的方法、都應(yīng)對(duì)它們的技術(shù)性能作出評(píng)價(jià)，以便科學(xué)的選擇和應(yīng)用。5/8/20241臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)5/8/20242臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)一檢驗(yàn)方法和標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)（一）方法的分級(jí)

臨床生化檢驗(yàn)方法根據(jù)其準(zhǔn)確度與精密度的不同可以分為決定性方法、參考方法、常規(guī)方法等三級(jí)。

5/8/20243臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)1．決定性方法（definitivemethod）是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過(guò)詳細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法。用于發(fā)展及評(píng)價(jià)參考方法和一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。

5/8/20244臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)2．參考方法（referencemethod）是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)充分證實(shí)的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測(cè)定的隨機(jī)誤差相比可以忽略不計(jì)，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異性及較寬的分析范圍。這類方法在條件許可的實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)經(jīng)常使用。用于評(píng)價(jià)常規(guī)方法和試劑盒，鑒定二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。5/8/20245臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)

3．常規(guī)方法（routinemethod）指性能指標(biāo)符合臨床或其他目的的需要，有足夠的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和適當(dāng)?shù)姆治龇秶医?jīng)濟(jì)實(shí)用。這類方法經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可后可稱為推薦方法（recommendedmethod），推薦方法應(yīng)具有足夠的實(shí)驗(yàn)證據(jù)5/8/20246臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)三級(jí)方法的相互關(guān)系常規(guī)方法參考方法決定性方法準(zhǔn)確度增加應(yīng)用范圍增加5/8/20247臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)（二）標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)將標(biāo)準(zhǔn)品（參考物）的定義為：一類具有一種或多種成分、且含量均勻確定的物質(zhì)。

；被用于校正儀器或用于評(píng)價(jià)一種測(cè)定方法的物質(zhì)，并將其分成三級(jí)。

5/8/20248臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)（二）標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)1．一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品（原級(jí)參考物，primaryreferencematerial

）是一種穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)也已經(jīng)定量，且有證書；用于校正決定性方法，評(píng)價(jià)及校正參考方法以及為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品定值。5/8/20249臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)2．二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品（次級(jí)參考物，secondaryreferencematerial

）包括用于常規(guī)分析的標(biāo)準(zhǔn)液。這類標(biāo)準(zhǔn)品可由實(shí)驗(yàn)室自已配制或?yàn)樯唐罚氖局当仨氂靡患?jí)標(biāo)準(zhǔn)品和參考方法并由訓(xùn)練有素的，能熟練掌握參考方法的操作者確定；主要用于常規(guī)方法的評(píng)價(jià)或?yàn)榭刂莆锒ㄖ岛统Ｒ?guī)測(cè)定的結(jié)果計(jì)算。5/8/202410臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)3．校準(zhǔn)品（calibrator）用二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測(cè)定得到校準(zhǔn)品，用于常規(guī)測(cè)定中的標(biāo)準(zhǔn)4.控制物（controlmaterial）具有與檢測(cè)過(guò)程相適應(yīng)的特性，其成分及基質(zhì)與檢測(cè)樣本相同或相似，且均勻、穩(wěn)定。用于質(zhì)量控制，控制患者樣本的測(cè)定誤差5/8/202411臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)各級(jí)實(shí)驗(yàn)方法與參考物的相互關(guān)系決定性方法用途：評(píng)價(jià)參考方法及為一級(jí)參考物定值一級(jí)參考物用途：發(fā)展和評(píng)價(jià)參考方法，校正決定性方法和參考方法，產(chǎn)生二級(jí)參考物參考方法用途：為二級(jí)參考物及控制物定值，評(píng)價(jià)常規(guī)方法（標(biāo)準(zhǔn)化、偏差、干擾因素）

二級(jí)參考物用途：常規(guī)方法的工作標(biāo)準(zhǔn)及為控制物定值5/8/202412臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)二常規(guī)方法選擇的原則（一）適用性微量快速方法簡(jiǎn)便安全可靠成本低廉（二）可靠性較高精密度、準(zhǔn)確度較好檢測(cè)范圍5/8/202413臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)（二）方法選擇的步驟（一）提出要求（二）獲取資料（三）選定候選方法（四）候選方法的初步試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍和重復(fù)性；重復(fù)試驗(yàn)——精密度；對(duì)比試驗(yàn)——準(zhǔn)確度；5/8/202414臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)第二節(jié)臨床生化檢驗(yàn)方法學(xué)評(píng)價(jià)方法學(xué)評(píng)價(jià)（evaluationofmethodology）通過(guò)實(shí)驗(yàn)途徑測(cè)定分析方法的技術(shù)性能，并評(píng)價(jià)其是否能接受。

評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)的過(guò)程就是對(duì)誤差的測(cè)定。

一、方法學(xué)評(píng)價(jià)的意義和內(nèi)容5/8/202415臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)主要的方法技術(shù)性能指標(biāo)：

準(zhǔn)確度(accuracy)

靈敏度(sensitivity)

特異度(specificity)

分析測(cè)量范圍(analyticalmeasurerange,AMR)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)的過(guò)程就是對(duì)誤差的測(cè)定。

5/8/202416臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)確定方法的質(zhì)量目標(biāo)選定及進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕沂痉治稣`差類型的實(shí)驗(yàn)收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析判斷方法的可接受性二、方法學(xué)評(píng)價(jià)的基本步驟5/8/202417臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)三、誤差的分類和表示1.系統(tǒng)誤差（SE）定義：指測(cè)定值與真值存在的同一傾向的偏差。系統(tǒng)誤差或正或負(fù)，即具有單向性，一般由恒定的因素引起，并在一定條件下多次測(cè)定中重復(fù)出現(xiàn)。5/8/202418臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)三、誤差的分類和表示2.系統(tǒng)誤差分類恒定系統(tǒng)誤差（CE）指測(cè)定值與真值之間存在恒定的誤差，其大小與干擾物濃度相關(guān)，而與被測(cè)物濃度無(wú)關(guān)。比例系統(tǒng)誤差（PE）誤差大小與被測(cè)物濃度成正比。5/8/202419臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)三、誤差的分類和表示3.隨機(jī)誤差（RE）定義：多次重復(fù)測(cè)定某一物質(zhì)時(shí)出現(xiàn)的誤差，誤差無(wú)一定的大小和方向，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布。5/8/202420臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)誤差類型示意圖比較方法結(jié)果試驗(yàn)方法結(jié)果比例系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差隨機(jī)誤差5/8/202421臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)揭示誤差類型的實(shí)驗(yàn)

誤差類別實(shí)驗(yàn)隨機(jī)誤差（RE）重復(fù)性比例誤差（PE）回收恒定誤差（CE）干擾系統(tǒng)誤差（SE）方法對(duì)比總誤差（TE）重復(fù)性和方法對(duì)比5/8/202422臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)一、方法評(píng)價(jià)方案（一）精密度評(píng)價(jià)

1．目的要求反映精密度好壞的指標(biāo)是變異系數(shù)CV，CV越小精密度越好，反之則差，故有人稱其為不精密度。變異系數(shù)CV包括：批內(nèi)、批間、日間和總CV，其中總CV最重要，它代表整個(gè)分析體系的可重復(fù)程度。

5/8/202423臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)2．評(píng)價(jià)前的準(zhǔn)備①對(duì)于評(píng)價(jià)對(duì)象和評(píng)價(jià)方案均應(yīng)熟悉。②實(shí)驗(yàn)試劑應(yīng)是同批次配制，或同一批號(hào)的商品試劑盒和參考物，儀器也應(yīng)處于良好的工作狀態(tài)③實(shí)驗(yàn)用標(biāo)本一般選擇2個(gè)（亦可更多），一個(gè)在正常范圍或在醫(yī)學(xué)決定水平附近，另一個(gè)為異常值，實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的介質(zhì)應(yīng)與臨床標(biāo)本一致。④先作一個(gè)初步的批內(nèi)精密度測(cè)定，即一個(gè)標(biāo)本重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算出均值，標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)5/8/202424臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)3．評(píng)價(jià)步驟用2個(gè)標(biāo)本每天測(cè)定2次（2次測(cè)定間隔不得少于2小時(shí)），每次測(cè)定均作雙份，共測(cè)定20天。每次測(cè)定至少做一個(gè)質(zhì)控。

5/8/202425臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)（二）準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)1．方法比較試驗(yàn)將試驗(yàn)方法（待評(píng)價(jià)或待驗(yàn)證的方法）與比較方法（參考方法或準(zhǔn)確度已知的方法）進(jìn)行比較，用于評(píng)價(jià)試驗(yàn)方法的恒定和比例系統(tǒng)誤差。5/8/202426臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)（二）準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)1．方法比較試驗(yàn)(1)要求比較方法應(yīng)是參考方法或推薦方法，如該測(cè)定沒有參考方法或推薦方法亦可用公認(rèn)的常規(guī)方法。但須具備：①比較試驗(yàn)方法有更好的精密度。②干擾影響已知。③與試驗(yàn)方法使用相同的計(jì)算單位。5/8/202427臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)(2)比較前準(zhǔn)備①實(shí)驗(yàn)者應(yīng)熟悉所用的儀器、試驗(yàn)方法、比較方法和評(píng)價(jià)方案。②實(shí)驗(yàn)標(biāo)本應(yīng)收集新鮮的正常和異常的臨床標(biāo)本，應(yīng)有足夠?qū)挼臐舛确秶?，各濃度?yīng)有合適的比例。如不能及時(shí)測(cè)定，標(biāo)本應(yīng)妥善保存并應(yīng)在分析物的穩(wěn)定期內(nèi)測(cè)定。5/8/202428臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)(3)方法比較步驟①樣本數(shù)至少為40個(gè)標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本用2種方法分別作雙份測(cè)定，如臨床標(biāo)本的量太少可將2份含量相近的標(biāo)本混合。②每天測(cè)定8個(gè)標(biāo)本，雙份測(cè)定時(shí)第一次按順序1，2……7，8，第二次8，7……2，1，共測(cè)試5天。5/8/202429臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)結(jié)果分析(1)作圖分析1)差異分析2)對(duì)比分析––差異圖:Y軸:試驗(yàn)方法與比較方法之差X軸:比較方法的測(cè)定值––對(duì)比圖:Y軸:試驗(yàn)方法測(cè)定值X軸:比較方法的測(cè)定值5/8/202430臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)差異分析圖對(duì)比分析圖比較方法結(jié)果零線差異（試驗(yàn)－比較）比較方法結(jié)果測(cè)定方法結(jié)果5/8/202431臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)2．回收試驗(yàn)所謂回收即分析方法正確測(cè)定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。目的是測(cè)定比例系統(tǒng)誤差，以衡量候選方法的準(zhǔn)確度。

（1）方法：將被分析的純品標(biāo)準(zhǔn)液加入樣品中，成為分析樣品，原樣品加入同量的無(wú)分析物的溶液作基礎(chǔ)樣品，然后用實(shí)驗(yàn)方法分析，兩者測(cè)定結(jié)果的差值為回收量。

5/8/202432臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)

（2）回收率計(jì)算：理想的回收率為100%，如某法測(cè)血鈣的回收率為95.7%，有4.3%的比例誤差，表明一個(gè)含鈣真值為2.5mmol/l的標(biāo)本,若用該方法測(cè)定,約為2.39mmol/l(2.5×95.79%)，誤差為0.11mmol/L(2.5×4.3%)。5/8/202433臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)（3）注意事項(xiàng)：①準(zhǔn)確吸量,因?yàn)楸环治鑫锏睦碚撝凳歉鶕?jù)加入標(biāo)準(zhǔn)液體積及原樣品的體積計(jì)算所得，吸量稍有不準(zhǔn)，就會(huì)影響結(jié)果；②樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)液后,總的濃度必須在方法的分析范圍內(nèi)，一般須加入高、中、低不同濃度做回收試驗(yàn)，計(jì)算平均回收率；③加入標(biāo)準(zhǔn)液后，最好使實(shí)驗(yàn)樣品的被測(cè)濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)決定濃度；④加入標(biāo)準(zhǔn)液的體積一般在10%以內(nèi)。若稀釋過(guò)大，誤差將發(fā)生改變，甚至消失。5/8/202434臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)（三）線性評(píng)價(jià)1．目的要求線性范圍是分析方法的一個(gè)重要技術(shù)指標(biāo)，它能判斷對(duì)某一分析方法測(cè)得的濃度或活性值與設(shè)定的濃度或活性值之間的比例關(guān)系的范圍。常規(guī)方法應(yīng)具有較寬的分析范圍，一般應(yīng)覆蓋臨床可能出現(xiàn)的高值。

5/8/202435臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)2．評(píng)價(jià)前準(zhǔn)備①熟悉儀器、評(píng)價(jià)方案和試劑。②評(píng)價(jià)標(biāo)本的介質(zhì)應(yīng)與實(shí)際測(cè)定的標(biāo)本相一致，理想的標(biāo)本是病人的低值或高值標(biāo)本，這往往不易收集到，亦可用病人的混合標(biāo)本加入分析物作為高值標(biāo)本，用正常人標(biāo)本作為低值標(biāo)本。③濃度范圍應(yīng)以分析項(xiàng)目的線性要求為準(zhǔn)。5/8/202436臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)線性評(píng)價(jià)應(yīng)有5個(gè)不同濃度，可選擇低值和高值標(biāo)本各一個(gè)，低值標(biāo)本為1號(hào)，高值標(biāo)本為5號(hào)，二者3：1混勻?yàn)?號(hào)，等份混勻?yàn)?號(hào)，1：3混勻?yàn)?號(hào)，2-4號(hào)標(biāo)本的濃度按下式計(jì)算：

標(biāo)本濃度=（C1V1+C5V5）/（V1+V5）C：濃度，V：體積。5/8/202437臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)（四）干擾試驗(yàn)1．目的要求判斷評(píng)價(jià)方法給出的結(jié)果是否受非分析物影響及影響程度。①干擾是指在測(cè)定某分析物的濃度或活性時(shí)，受另一非分析物影響而導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果增高（正干擾）或降低（負(fù)干擾）。②干擾物質(zhì)可分為內(nèi)源性（標(biāo)本中存在的）和外源性（外界污染的）兩類。5/8/202438臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)③干擾的機(jī)理，可有物理作用、化學(xué)作用以及非特異反應(yīng)等。④干擾可能是造成誤差的一個(gè)重要原因，如果干擾物是恒定的將引起恒定誤差，如干擾物隨病理生理因素影響，將引起隨機(jī)誤差。因此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)了解各種測(cè)定方法的干擾情況

5/8/202439臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)2．試驗(yàn)前準(zhǔn)備①應(yīng)做的主要干擾物為病人標(biāo)本中常常出現(xiàn)的黃疸，脂血和溶血；某些藥物如維生素C等；實(shí)驗(yàn)常用的抗凝劑，防腐劑和穩(wěn)定劑。②質(zhì)量保證，不存在系統(tǒng)誤差；批內(nèi)精密度在可接受范圍內(nèi)；應(yīng)不存在前后結(jié)果的交叉污染；實(shí)驗(yàn)過(guò)程有質(zhì)控監(jiān)督。

5/8/202440臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)3．干擾試驗(yàn)方法

(1)"配對(duì)差異"試驗(yàn):即將不同濃度的干擾物加入到實(shí)驗(yàn)標(biāo)本中，然后分別測(cè)定加與不加干擾物的標(biāo)本，比較二者有無(wú)偏差，并了解干擾物濃度與偏差程度的關(guān)系。

(2)用病人標(biāo)本作偏差分析:5/8/202441臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)第三節(jié)方法學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)（舉例）一、批內(nèi)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)重復(fù)性試驗(yàn)依據(jù)時(shí)間間隔可分為批內(nèi)、天內(nèi)、天間三種重復(fù)性試驗(yàn)。方法學(xué)評(píng)價(jià)重復(fù)性試驗(yàn)應(yīng)由實(shí)驗(yàn)者作批內(nèi)(或天內(nèi))及天間重復(fù)性試驗(yàn)。

5/8/202442臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【目的與要求】掌握方法學(xué)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)原理和基本方法及統(tǒng)計(jì)分析；熟悉重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)?？陀^評(píng)價(jià)GOD-POD法測(cè)血糖隨機(jī)誤差的大小。

5/8/202443臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【原理】批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)是指在相同條件下對(duì)同一標(biāo)本在盡可能短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行m輪，每輪n次重復(fù)測(cè)定，以獲得批內(nèi)精密度數(shù)據(jù)的試驗(yàn)方法。其結(jié)果能反映各次測(cè)定結(jié)果相互接近的程度，用于客觀評(píng)價(jià)GOD-POD法測(cè)血糖隨機(jī)誤差的大小。

【操作步驟】

將血清標(biāo)本用GOD-POD法作5輪，每輪4次血糖測(cè)定，即可獲得20個(gè)測(cè)定數(shù)據(jù)。

5/8/202444臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【結(jié)果計(jì)算】1．檢驗(yàn)20次測(cè)定數(shù)據(jù)中的離群值（用Grubbs檢驗(yàn)準(zhǔn)則，檢驗(yàn)離群值）2．按照批內(nèi)精密度的計(jì)算公式計(jì)算5輪每輪4次測(cè)定值的平均數(shù)()、標(biāo)準(zhǔn)差(S)和變異系數(shù)(CV%)。

5/8/202445臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)5/8/202446臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)5/8/202447臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)】

如試驗(yàn)求得的血清葡萄糖GOD-POD測(cè)定法的CV值＜WHO對(duì)中等實(shí)驗(yàn)室提出的OCV(±3%)標(biāo)準(zhǔn)，即表明實(shí)驗(yàn)條件的控制達(dá)到最佳條件，試驗(yàn)結(jié)果可按OCV%報(bào)告。作為方法探討實(shí)驗(yàn)，其變異系數(shù)應(yīng)該＜OCV標(biāo)準(zhǔn)。

5/8/202448臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【注意事項(xiàng)】1.血糖的醫(yī)學(xué)決定水平值為2.8、6.7、8.9mmol/L。分析物濃度應(yīng)選擇醫(yī)學(xué)決定水平值才更具價(jià)值。

2.為了縮小測(cè)定值的離散程度，操作中必須準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)液及標(biāo)本量，并嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間，準(zhǔn)確讀數(shù)。

3．計(jì)算批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(Sw)時(shí)不可誤用連續(xù)測(cè)定精密度的統(tǒng)計(jì)學(xué)公式。否則會(huì)使Sw的估計(jì)值明顯偏低。

5/8/202449臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【思考題】

1.重復(fù)性試驗(yàn)依據(jù)時(shí)間間隔可分為幾種？哪種最符合臨床實(shí)際？

2.重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果反映了什么誤差？

3.方法評(píng)價(jià)的批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)在標(biāo)本濃度、樣本數(shù)、測(cè)試方法及統(tǒng)計(jì)方法方面有什么要求？5/8/202450臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)二、回收試驗(yàn)回收即分析方法正確測(cè)定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。用于測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法的比例系統(tǒng)誤差。這種誤差常隨分析物的濃度增加而增加，常因樣品中其它物質(zhì)與分析物競(jìng)爭(zhēng)分析試劑并與之發(fā)生反應(yīng)而引起。

5/8/202451臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【目的與要求】掌握方法學(xué)回收實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)原理和基本方法及統(tǒng)計(jì)分析；熟悉回收實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)?？陀^評(píng)價(jià)GOD-POD法測(cè)血糖比例系統(tǒng)誤差的大小。

5/8/202452臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【原理】回收試驗(yàn)是發(fā)現(xiàn)分析方法比例系統(tǒng)誤差的有效評(píng)價(jià)方法。通過(guò)測(cè)定GOD-POD法測(cè)血糖的回收率，能較確切地判斷該分析方法比例系統(tǒng)誤差的有無(wú)或大小，可以對(duì)方法的準(zhǔn)確性作出可靠評(píng)價(jià)。

5/8/202453臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【操作步驟】1．樣品制備

基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml+0.1ml生理鹽水。

回收樣品Ⅰ：血清0.9ml＋0.01ml80mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液＋0.09ml生理鹽水。

回收樣品Ⅱ：血清0.9ml＋0.06ml80mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液＋0.04ml生理鹽水。

回收樣品Ⅲ：血清0.9ml＋0.09ml80mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液＋0.01生理鹽水。

2．血糖濃度測(cè)定按GOD-POD法測(cè)定各制備樣品的血糖濃度，每份樣品作雙份檢測(cè)，結(jié)果取平均值。5/8/202454臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【結(jié)果計(jì)算】5/8/202455臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)5/8/202456臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【注意事項(xiàng)】1．分析物濃度應(yīng)選擇醫(yī)學(xué)決定水平，血糖測(cè)定的醫(yī)學(xué)決定水為平2.8、6.7、8.9mmol/L。

2．純標(biāo)準(zhǔn)品溶液的加入體積不得超過(guò)血清樣品的10%，避免將血清稀釋過(guò)度，引起誤差的改變或消失。

3．準(zhǔn)確加量是最主要的技術(shù)關(guān)鍵。

5/8/202457臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【結(jié)果判斷】一般檢驗(yàn)方法要求回收率在95%-105%之間，最為理想的回收率應(yīng)是100%。

【思考題】

1.什么叫回收試驗(yàn)？在回收試驗(yàn)的樣品制備中應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？

2.回收試驗(yàn)反映的是方法的哪種誤差？

3.回收率怎樣計(jì)算？

5/8/202458臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)三、干擾試驗(yàn)干擾試驗(yàn)用于測(cè)定某物質(zhì)加到樣品中產(chǎn)生的系統(tǒng)誤差，干擾物濃度一定時(shí)，產(chǎn)生的誤差是恒定系統(tǒng)誤差，誤差的實(shí)際大小隨干擾物的濃度而異。干擾試驗(yàn)既用于檢測(cè)某方法的特異性，也用于檢測(cè)干擾物質(zhì)對(duì)方法的干擾作用，以評(píng)價(jià)分析方法的準(zhǔn)確性。

5/8/202459臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【目的與要求】掌握方法學(xué)干擾實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)原理和基本方法及統(tǒng)計(jì)分析；熟悉干擾實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)?？陀^評(píng)價(jià)GOD-POD法測(cè)血糖恒定系統(tǒng)誤差的大小。

5/8/202460臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【原理】干擾試驗(yàn)是測(cè)定特異性和干擾二者引起的誤差。在具體方法學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)中，首先要確定被試可疑物質(zhì)是否引起誤差；若能引起誤差，再進(jìn)一步探討其誤差的來(lái)源是因方法特異性差還是干擾，若加入的物質(zhì)本身和分析試劑反應(yīng)并產(chǎn)生讀數(shù)，這是特異性差，若加入物質(zhì)并不與分析試劑反應(yīng)，但它改變了分析物和分析試劑間的反應(yīng)，這是干擾。本實(shí)驗(yàn)選用尿酸做GOD-POD法測(cè)血糖的干擾試驗(yàn)，尿酸可以和GOD反應(yīng)生成的H2O2發(fā)生反應(yīng)，使部分H2O2不能參與第二步POD的偶聯(lián)反應(yīng)，從而降低顯色強(qiáng)度，產(chǎn)生負(fù)的測(cè)定誤差。因此，尿酸對(duì)該反應(yīng)有干擾，但不是尿酸被測(cè)定。5/8/202461臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【操作步驟】1．樣品制備

基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml＋蒸餾水0.1ml。

干擾樣品Ⅰ：血清0.9ml＋9.0mmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液0.05ml+蒸餾水0.05ml。

干擾樣品Ⅱ：血清0.9ml＋9.0mmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml。

尿酸樣品：蒸餾水0.9ml＋9.0mmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml。

2．血糖值測(cè)定取各樣品按GOD-POD法操作。

5/8/202462臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【結(jié)果計(jì)算】5/8/202463臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)5/8/202464臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【注意事項(xiàng)】1．可疑干擾物濃度加入可疑干擾物的濃度應(yīng)明顯高于通常所見濃度的上限，有可能時(shí)應(yīng)達(dá)到病理標(biāo)本的最高值，尿酸升高的變動(dòng)范圍在0.42-0.9mmol/L之間。

2．凡可疑干擾物都應(yīng)做，這里僅是舉例示范。

3．無(wú)論是方法特異性差或是受干擾，都影響到測(cè)定結(jié)果的正確性，影響的程度與分析物的濃度無(wú)關(guān)，但與非分析物的量有關(guān)，所以產(chǎn)生的誤差都是恒定系統(tǒng)誤差，常以偏差Bias作為統(tǒng)計(jì)量。Bias指所有測(cè)定值系統(tǒng)性的偏離真值，表示系統(tǒng)誤差的大小。在干擾試驗(yàn)中，偏差等于干擾樣品測(cè)定值與基礎(chǔ)樣品測(cè)定值之差。

其它注意事項(xiàng)與回收試驗(yàn)相同。5/8/202465臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【結(jié)果判斷】Bias＜允許誤差(EA)的臨界值，表明由干擾物引起的偏差對(duì)臨床診斷和治療不產(chǎn)生不良影響，可被接受。血糖2.8、6.7、8.9mmol/L時(shí)的EA為0.56mmol/L。

5/8/202466臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【思考題】1.請(qǐng)闡述干擾和特異的概念，怎樣用實(shí)驗(yàn)來(lái)加以區(qū)分？

2.干擾試驗(yàn)的樣品制備與回收試驗(yàn)的樣品制備有何相同點(diǎn)和不同點(diǎn)？

3.干擾試驗(yàn)反映的是何種誤差？干擾率怎樣計(jì)算？5/8/202467臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)四、方法比較試驗(yàn)方法比較試驗(yàn)是用兩種方法同時(shí)測(cè)定一批標(biāo)本計(jì)算出兩種方法間測(cè)定結(jié)果的差值，以此來(lái)估計(jì)被評(píng)價(jià)方法在實(shí)際測(cè)定病人標(biāo)本時(shí)可能引入的總系統(tǒng)誤差的水平。

5/8/202468臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【目的與要求】掌握方法比較實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)原理和基本方法及統(tǒng)計(jì)分析；熟悉方法比較實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)?？陀^評(píng)價(jià)GOD-POD法測(cè)血糖系統(tǒng)誤差的大小。

5/8/202469臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【原理】方法比較試驗(yàn)是將候選方法與準(zhǔn)確度已知的方法(如參考方法)作對(duì)比分析，以評(píng)價(jià)候選方法的準(zhǔn)確度，是考核候選方法是否可被采用的重要試驗(yàn)。方法比較試驗(yàn)是用于檢測(cè)候選方法系統(tǒng)誤差的大小包括恒定誤差和比例誤差，如對(duì)適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)進(jìn)行分析，也可以提供誤差的性質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)以HK法測(cè)血糖的參考方法作對(duì)比來(lái)評(píng)價(jià)GOD-POD法測(cè)定血糖的總系統(tǒng)誤差。5/8/202470臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【數(shù)據(jù)處理】1．將對(duì)比試驗(yàn)數(shù)據(jù)作散點(diǎn)圖，圖中以x軸代表對(duì)比方法的測(cè)定值，y軸代表被評(píng)價(jià)方法的測(cè)定數(shù)據(jù)，在方格紙上作圖應(yīng)散布于整個(gè)測(cè)定范圍之內(nèi)。

散點(diǎn)圖能夠提供初步的印象。如果所有測(cè)定值的對(duì)應(yīng)點(diǎn)在直角坐標(biāo)圖中大致呈45°角的直線分布，提示被評(píng)價(jià)方法與對(duì)比方法的測(cè)定結(jié)果之間存在密切的相關(guān)關(guān)系；若呈明顯的曲線分布，雖然在統(tǒng)計(jì)學(xué)上可按照非線性資料處理，但在這種情況下，候選方法被采用的可能性極小。5/8/202471臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)2．如果x、y之間呈直線關(guān)系,即可用經(jīng)典的直線回歸分析法作統(tǒng)計(jì)處理，其結(jié)果可以顯示候選方法的測(cè)定結(jié)果有無(wú)系統(tǒng)誤差存在，這種誤差可分為三類，即恒定系統(tǒng)誤差、比例系統(tǒng)誤差和(或)兼有兩種誤差。

5/8/202472臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)在評(píng)價(jià)一個(gè)候選方法時(shí)，最理想的情況是回歸直線通過(guò)零點(diǎn)，呈45°角分布，這時(shí)a＝0，b(x/y比值)＝1.0，表明既無(wú)恒定誤差，又無(wú)比例誤差存在。但x和y都會(huì)有隨機(jī)誤差，a和b只是估計(jì)值，是會(huì)有所波動(dòng)的。如果a≠0，b的數(shù)值稍偏離1.0，但只要這種偏離程度比較小(可以忽略不計(jì))，據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷這一候選方法可以被接受，就能適用于臨床檢驗(yàn)的常規(guī)分析。假如要對(duì)回歸系數(shù)b作出較嚴(yán)密的統(tǒng)計(jì)判斷，就需要進(jìn)一步作回歸系數(shù)的顯著性檢驗(yàn)。5/8/202473臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)3．根據(jù)計(jì)算出的回歸方程的a、b值，可以計(jì)算出候選方法系統(tǒng)誤差(SE)的大小，并與不同醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)的允許誤差(EA)作比較，對(duì)被評(píng)價(jià)方法的系統(tǒng)誤差的可接受性作出判斷。

5/8/202474臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)4．作相關(guān)分析在方法比較試驗(yàn)中，相關(guān)系數(shù)(r)可作為被評(píng)價(jià)方法可否被接受的一項(xiàng)統(tǒng)計(jì)學(xué)指標(biāo)。

相關(guān)系數(shù)(r)按下列公式計(jì)算：

5/8/202475臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【結(jié)果判斷】1.回歸方程計(jì)算出候選方法系統(tǒng)誤差(SE)的大小，與不同醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)的允許誤差(EA)作比較，對(duì)被評(píng)價(jià)方法的系統(tǒng)誤差的可接受性作出判斷。

SE的可接受性判斷指標(biāo)為：

2.試驗(yàn)方法（Y）與比較方法（X）相關(guān)性，r≥0.975或r2≥0.95說(shuō)明二法的相關(guān)良好。5/8/202476臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【注意事項(xiàng)】1．選擇試驗(yàn)樣品一般作40-100例，包括常規(guī)工作中可能遇到的整個(gè)分析范圍，選擇合適的樣品分析范圍比增加樣品的數(shù)目更為重要。

2．試驗(yàn)方法一般每個(gè)樣品用兩種方法各測(cè)一次，最好每個(gè)樣品用兩種方法各測(cè)定兩次，不是平行測(cè)定，而是分兩批進(jìn)行，最好在4h內(nèi)進(jìn)行。

3．對(duì)比方法對(duì)比方法的選擇十分重要，一般應(yīng)選參考方法或決定性方法，這樣方法間的任何分析誤差均可歸于被評(píng)價(jià)的候選方法。5/8/202477臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)【思考題】

1.方法比較試驗(yàn)反映的是何種誤差？比較方法為何要用參考方法？

2.方法比較試驗(yàn)的樣本有何具體要求？

3.方法比較試驗(yàn)后尚需做哪些統(tǒng)計(jì)分析？這些統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別說(shuō)明方法的哪些性能？

4.做方法比較試驗(yàn)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？

5/8/202478臨床生化檢驗(yàn)方法的選擇和評(píng)價(jià)分離純化小麥胚芽中酸性磷酸酶【原理】酸性磷酸酶(ACP)在自然界中廣泛分布于植物種子、霉菌、以及動(dòng)物肝臟和前列腺中。植物種子中的ACP在發(fā)芽時(shí)含量最豐富。本實(shí)驗(yàn)選用新鮮小麥胚芽作為原料來(lái)分離和純化ACP。ACP能溶解于稀緩沖液和水中；溶于35%飽和度的硫酸銨溶液中，在57%飽和度的硫酸銨溶液中可沉淀析出；在中性及高溫條件下不穩(wěn)定，在70℃時(shí)相對(duì)穩(wěn)定；pH小于6.5時(shí)穩(wěn)定性增加，枸櫞酸和乙酸可增加ACP酶溶液的穩(wěn)定性；Mg2+、Mn2+為ACP激活劑，而Cu2+、Hg2+、