GB-T生物產(chǎn)品降解霉菌毒素功效評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范征求意見稿

ICS07.080

A21

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—201X

生物產(chǎn)品降解霉菌毒素功效評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationsforefficacyevaluationofmycotoxin

degradationbybiologicalproduct

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)1化管理委員會(huì)

GB/T××××—201×

GB/T××××—201×

生物產(chǎn)品降解霉菌毒素功效評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了生物產(chǎn)品降解霉菌毒素的功效評(píng)價(jià)原理、試劑與材料、儀器設(shè)備與器具、分析步驟和

結(jié)果分析。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于微生物和酶生物產(chǎn)品降解霉菌毒素的效果評(píng)價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T17480-2008飼料中黃曲霉毒素B1的測定酶聯(lián)免疫吸附法

GB5009.209-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中玉米赤霉烯酮的測定

3術(shù)語與定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件：

3.1

降解率degradationrate

降解實(shí)驗(yàn)前后，樣品中霉菌毒素含量差與樣品中初始濃度的比值，用百分?jǐn)?shù)表示。

4原理

具有霉菌毒素降解功效的生物產(chǎn)品，與加入的霉菌毒素進(jìn)行混合培養(yǎng)后，體系中游離的霉菌毒素含

量發(fā)生變化，通過測定培養(yǎng)周期內(nèi)培養(yǎng)液中霉菌毒素的減少量，計(jì)算霉菌毒素的降解率，從而評(píng)價(jià)生物

產(chǎn)品對霉菌毒素的降解功效。

5試劑和材料

除特殊說明外，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純，水均為符合GB/T6682中規(guī)定的二級(jí)水。

5.11mg/mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液

準(zhǔn)確稱取5mg黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品，用5mL甲醇（5.1）溶解，臨用前現(xiàn)配。

5.21mg/mL脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液

準(zhǔn)確稱取5mg脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)品，用5mL甲醇（5.1）溶解，臨用前現(xiàn)配。

1

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5.31mg/mL玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品溶液

準(zhǔn)確稱取5mg玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品，用5mL甲醇（5.1）溶解，臨用前現(xiàn)配。

5.4霉菌毒素試驗(yàn)溶液配制

將霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用甲醇10倍梯度稀釋，配制成終濃度為10μg/ml的試驗(yàn)溶液，備用。

5.5基礎(chǔ)營養(yǎng)基溶液

準(zhǔn)確稱量20g葡萄糖，15g蛋白胨，5g氯化鈉，0.5g牛肉膏，純水定容至1L，pH7.1?；A(chǔ)營

養(yǎng)基溶液121oC，30min滅菌后待用。

5.60.01M磷酸鹽緩沖液，pH7.4

準(zhǔn)確稱量9gNaCl,0.296gNaH2PO4,2.9gNa2HPO4·12H2O溶于純水中，用純水定容至1L。

5.7酶聯(lián)免疫吸附試劑盒

黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，試劑盒靈敏度為0.03ng/ml；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇酶聯(lián)免疫

吸附試劑盒，試劑盒靈敏度為4ng/ml；玉米赤霉烯酮酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，試劑盒靈敏度為0.2ng/ml。

6儀器和設(shè)備

6.1電子分析天平：精度為0.1mg。

6.2移液槍：規(guī)格20μL，200μL，1000μL，5000μL。

6.3恒溫水浴鍋:溫度控制范圍在30℃-60℃之間，精度為0.1℃。

6.4全自動(dòng)酶標(biāo)儀:帶450nm濾光片。

6.5離心機(jī)：相對離心力≥4000g。

6.6生化培養(yǎng)箱：溫度控制范圍在5℃-45℃之間，精度為0.1℃。

6.7壓力蒸汽滅菌鍋：額定溫度126℃，額定壓力0.14MPa。

7試驗(yàn)步驟

7.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

不同類型生物產(chǎn)品降解霉菌毒素功效試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)符合表1要求

表1生物產(chǎn)品降解霉菌毒素功效試驗(yàn)設(shè)計(jì)

產(chǎn)品種類

項(xiàng)目

微生物產(chǎn)品酶產(chǎn)品

處理設(shè)計(jì)1.供試樣品

2.失活樣品

3.空白對照

2

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重復(fù)次數(shù)不少于3次

7.2供試樣本處理

7.2.1供試微生物樣本處理

將供試微生物接種到含有200mL基礎(chǔ)營養(yǎng)基溶液（5.4）三角瓶中，生化培養(yǎng)箱120rpm/min條件下

37℃振蕩培養(yǎng)36h，即得供試微生物液體樣本。

7.2.2供試酶制劑樣本處理

準(zhǔn)確稱取1g酶制劑，用50mL0.01MpH7.4磷酸鹽緩沖液(5.5)溶解，即得供試酶制劑液體樣本。

7.3失活樣品處理

取一半處理好的供試樣品進(jìn)行121oC，30min殺菌處理，即得失活樣本。

7.4降解處理試驗(yàn)

7.4.1微生物降解處理

分別取18mL基礎(chǔ)營養(yǎng)基溶液（5.4），供試樣品和失活樣品菌液上清加入降解瓶中。再分別加入

需降解的霉菌毒素試驗(yàn)溶液（5.3）2mL，32℃，120rpm/min條件下振蕩培養(yǎng)48h，分別取100μL降

解液待測。

7.4.2酶制劑降解處理

分別取18mL磷酸鹽緩沖液（5.5），供試樣品和失活樣品加入降解瓶中。再分別加入需降解的霉

菌毒素試驗(yàn)溶液（5.3）2mL37℃孵育48h，48h時(shí)后，分別取100μL降解液待測。

7.5反應(yīng)液中霉菌毒素含量測定

將空白樣品、失活樣品和供試樣品待測液按照GB5009.209-2016和GB/T17480-2008中的方法或

用市售霉菌毒素ELISA試劑盒進(jìn)行檢測。

8結(jié)果計(jì)算

8.1降解率

按照式（1）計(jì)算：

.................................................................(1)

?????(???0)

式中：?=?×100%

R——降解率（%）；

C——空白樣品中霉菌毒素濃度（μg/mL）；

C0——失活樣品降解反應(yīng)終點(diǎn)霉菌毒素濃度（μg/mL）；

Ce——供試樣品降解反應(yīng)終點(diǎn)霉菌毒素濃度（μg/mL）。

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9重復(fù)性