sAPRIL結(jié)合肽提高結(jié)直腸癌LOVO細胞對5-FU的敏感性的實驗研究的開題報告

sAPRIL結(jié)合肽提高結(jié)直腸癌LOVO細胞對5--FU的敏感性的實驗研究的開題報告一、選題背景結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，其病因復(fù)雜，發(fā)病率逐年上升?；熓墙Y(jié)直腸癌治療的重要手段之一，5-氟尿嘧啶（5-FU）是一種廣泛應(yīng)用于結(jié)直腸癌化療的藥物，但由于其耐藥性等限制，導(dǎo)致效果不太理想。因此，探索新的方法提高結(jié)直腸癌細胞對5-FU的敏感性，是目前該領(lǐng)域研究的熱點和難點之一。sAPRIL（solubleapoptosis-associatedspeck-likeproteincontainingaCARD）是一種細胞因子，其參與腫瘤細胞凋亡的調(diào)控過程。前期研究數(shù)據(jù)顯示，sAPRIL對結(jié)直腸癌細胞株HCT15的增殖和生存具有明顯的抑制作用。但是，sAPRIL是否可以提高結(jié)直腸癌細胞對5-FU的敏感性尚未明確。因此，本研究旨在探究sAPRIL結(jié)合肽（sAPRILbindingpeptide，ABP）對結(jié)直腸癌LOVO細胞對5-FU的敏感性調(diào)控作用，為進一步完善結(jié)直腸癌化療方案提供理論依據(jù)。二、研究目的本研究旨在探究sAPRIL結(jié)合肽對結(jié)直腸癌LOVO細胞株對5-FU的敏感性調(diào)控作用，為提高結(jié)直腸癌化療效果提供新的思路和方法。三、研究內(nèi)容及方法1.研究內(nèi)容（1）構(gòu)建sAPRIL結(jié)合肽（ABP）表達質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染入結(jié)直腸癌LOVO細胞株中。（2）參照前期研究方法，采用MTT法、AnnexinV/PI法和Westernblot法等多種方法，比較sAPRIL結(jié)合肽對LOVO細胞的生長、凋亡以及caspase3和p-AKT表示量的影響。（3）采用流式細胞術(shù)法，直接檢測sAPRIL結(jié)合肽聯(lián)合5-FU對LOVO細胞凋亡率的影響，進一步驗證sAPRIL結(jié)合肽對LOVO細胞對5-FU的敏感性調(diào)控作用。2.研究方法（1）構(gòu)建sAPRIL結(jié)合肽表達質(zhì)粒：將sAPRIL結(jié)合肽序列克隆入表達質(zhì)粒中，并通過酶切、測序等方法驗證其正確性。（2）轉(zhuǎn)染：將表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入LOVO細胞中，采用Westernblot法確認轉(zhuǎn)染效果。（3）MTT法：檢測細胞增殖情況，進一步驗證sAPRIL結(jié)合肽對細胞生存的影響。（4）AnnexinV/PI法：采用流式細胞術(shù)檢測細胞的凋亡情況。（5）Westernblot法：檢測caspase3和p-AKT等相關(guān)蛋白質(zhì)表達量的變化。（6）流式細胞術(shù)：直接檢測sAPRIL結(jié)合肽聯(lián)合5-FU對LOVO細胞凋亡率的影響。四、預(yù)期結(jié)果研究結(jié)果預(yù)計有以下幾點：（1）構(gòu)建了sAPRIL結(jié)合肽表達質(zhì)粒，并將其成功轉(zhuǎn)染入LOVO細胞中。（2）sAPRIL結(jié)合肽對LOVO細胞的增殖和生存具有一定的抑制作用。（3）sAPRIL結(jié)合肽可以通過調(diào)控caspase3和p-AK