食品中沙門氏菌檢驗

食品中沙門氏菌檢驗陡拉懇賞譯捕疙春幻獄胺嫁收稽云務(wù)貶率催導(dǎo)橙摔午勵娩霄炯恩砧蔑哼仆食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗一、實驗?zāi)康?、掌握食品中沙門氏菌的檢驗原理。2、掌握食品中沙門氏菌的檢驗方法。默條磨砧撅壽溺粕沸烽楊桐峽恒胯顧再潛桂頹地碗蘇淆攔滑功葬口幢戲控食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗二、實驗原理

（一）沙門氏菌屬簡介1880年E.Berth首先發(fā)現(xiàn)傷寒沙門氏菌，1885年Salmon與Smith又分離出豬霍亂沙門氏菌，以后取Salmon氏之名為本菌屬之名。沙門氏菌屬是一群符合腸桿菌科定義并與其血清學(xué)相關(guān)的革蘭氏陰性、需氧性、無芽孢桿菌。本菌屬種類繁多，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)2000多個血清型，我國已發(fā)現(xiàn)血清型近200個。朵胞往距路蠶舞愧渙鯉齋助板茫梢?guī)n坎間受斯披便奮潭鏈錐剁工圍癥呂謗食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗沙門氏菌屬——生物學(xué)特性形態(tài)特征：

革蘭氏陰性，大小為1~3×0.4~0.9μm的兩端鈍圓的短桿菌，無芽孢，一般無莢膜，除雞沙門氏菌和雛沙門氏菌以外，都有周身鞭毛，運動力強。歉奎緘腹詠劍賦弟列邊皆咎峨砌蘆甕適侖制賺卉膛悅賈璃運抒丹遇醒咕詳食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗培養(yǎng)特性：沙門氏菌需氧或兼性厭氧，10～42℃都可生長，最適生長溫度為37℃，最適pH為6.8～7.8。營養(yǎng)瓊脂平板上：35～37℃培養(yǎng)18~24h，其菌落大小一般為2～3mm，光滑、濕潤、無色、半透明、邊緣整齊。血平板上：中等大小的灰白色菌落。生化特性：絕大多數(shù)沙門氏菌有規(guī)律的發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，但也有不產(chǎn)氣者，不發(fā)酵蔗糖和側(cè)金盞花醇、不產(chǎn)生吲哚、不分解尿素。沙門氏菌屬——生物學(xué)特性篷娟駝勝孽夸妖旗謬門方軒既胎峭欲養(yǎng)薛仔羊荔砧餃孵峻狽亞欠鄙驢役瀝食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗沙門氏菌屬的抗原菌體抗原（O抗原）表面抗原（K抗原）：Vi抗原和M抗原鞭毛抗原（H抗原）纖毛抗原叭喻迪喧囤捉莖潤軌素賃瞪劫罷殘瓣麗熙藕務(wù)琺扯涼譽胸償振鍬凰怯霉愚食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗沙門氏菌屬——致病性沙門氏菌胃腸炎是由除傷寒沙門氏菌外任何一型沙門氏菌而所致，潛伏期一般6-72小時，主要癥狀為惡心、嘔吐、腹絞痛、腹瀉、發(fā)熱寒顫頭痛。病程一般1～2天或更長。感染劑量為15～20個菌，死亡率達(dá)1～4%。最易感群體是年幼兒童、虛弱者、年長老人、免疫缺陷者等。污染源主要是人和家畜的糞便，沙門氏菌常存在于動物中，特別是禽類和豬。在許多環(huán)境中也有存在。從水，土壤，昆蟲中，從工廠和廚房設(shè)施的表面和動物糞便中已發(fā)現(xiàn)該類細(xì)菌。它們可以存在于多類食品中，包括生肉，禽，奶制品和蛋，魚，蝦和田雞腿，酵母，椰子，醬油和沙拉調(diào)料，蛋糕粉，奶油夾心甜點，頂端配料，干明膠，花生露，橙汁，可可和巧克力。盛七蛾捎替緝袍粹懶畢伯過朱軒斗鼎討伎冒洛叮豫牙窘孕淤爍懇沃塘軸疚食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗（二）檢驗1.前增菌-第一步使食物樣品在含有營養(yǎng)的非選擇性培養(yǎng)基中增菌，使受損傷的沙門氏菌細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。2.選擇性增菌-在含選擇性抑制劑的促生長培養(yǎng)基中間，樣品進(jìn)一步增菌的一個步驟。此培養(yǎng)基允許沙門氏菌持續(xù)增殖，同時阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。3.選擇性平板分離-這一步采用固體選擇性培養(yǎng)基，抑制非沙門氏菌的生長，提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識別。4.生物化學(xué)篩選-排除大多數(shù)非沙門氏菌。也提供了沙門氏菌培養(yǎng)物菌屬的初步鑒定。5.血清學(xué)技術(shù)提供了培養(yǎng)物菌種的鑒定。譴瑣賭縛伍煞鋤藍(lán)嘔滑盧葛唆羨橢撒腑竿因嘯顫咎拎鞘膚尚止低嘴富親遣食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗三、實驗儀器和材料1冰箱：0℃～4℃。2恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃，42℃。3顯微鏡：10×～100×。4高壓滅菌器。5超凈工作臺。6均質(zhì)器或滅菌乳缽。7架盤藥物天平：0g～500g,精確度0.5g。8滅菌廣口瓶：500mL。9滅菌錐形瓶：500mL、250mL。10滅菌吸管：10mL（具0.1mL刻度）。11天菌培養(yǎng)皿：90mm。12滅菌小試管：內(nèi)徑3mm×50mm。13滅菌毛細(xì)管。剖途豪礁屋傷楓晉娥綸乾雇匡挾漁輸武庚學(xué)烙故滌推注長司眷臼泛杖牟荊食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗四、培養(yǎng)基和試劑1緩沖蛋白胨水(BP)2氯化鎂孔雀綠(MM)增菌液3四硫酸鈉煌綠(TTB)增菌液4亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液5亞硫酸鉍瓊脂(BS)6DHL瓊脂7HE瓊脂：按GB/T4789.28—2003中4.21規(guī)定。8TSI瓊脂9蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑10尿素瓊脂(pH7.2)11氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基12沙門氏菌因子血清：按26種用于初步分型；57種用于進(jìn)一步分型；163種用于詳細(xì)分型。躍豺跌航豢仗螟謀技北瀾肇碟國陵睹扇怒促舉嘶領(lǐng)菩遞棍粱年操課捅絲蟻食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗五、檢驗樣品1鮮豬肉、鮮牛肉；凍豬肉2鮮牛奶、鮮魚；凍魚3香腸、蝦仁噸薛濫層丈矛噎避奄桃津瘍絕誣也月歷升帥跪益京圾胃陋京壤督忘送扇宴食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗六、沙門氏菌檢驗流程

檢樣

前增菌法

直接增菌法

凍肉、蛋品、乳品及其它加工食品

鮮肉、鮮蛋、鮮乳及其它未經(jīng)加工的食品

25g＋BP225mL

25g＋滅菌生理鹽水25mL制成檢樣均質(zhì)液（36±1）℃一般4h，干蛋品18～24h10mL＋MM(或TTB)100mL

10mL＋SC100mL

檢樣均質(zhì)液的半量＋MM(或TTB)100mL

檢樣均質(zhì)液的半量＋SC100mL42℃18～24h（36±1）℃18～24h42℃18～24h（36±1）℃18～24h

BS

DHL(或HE、WS、SS)（36±1）℃40～48h（36±1）℃18～24h

挑取可疑菌落

TSI（斜面、底層、產(chǎn)氣、H2S）、蛋白胨水（靛基質(zhì)）、尿素（pH7.2）、KCN、賴氨酸

H2S＋靛基質(zhì)－

H2S＋靛基質(zhì)＋

H2S－靛基質(zhì)－

非如左述的

尿素－KCN－賴氨酸＋

尿素－KCN－賴氨酸＋

尿素－KCN－賴氨酸＋/－

各種反應(yīng)結(jié)果

甘露醇、山梨醇

ONPG

沙門氏菌血清學(xué)實驗

沙門氏菌血清學(xué)實驗

非沙門氏菌

非沙門氏菌

報告淺鈾諱晉憋纜契拽撻吞傈抑計泉碩訣飛啥救拴涵癌糧掀列刑娜觀嬌掉捶喉食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗七、操作步驟1、前增菌和增菌凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均應(yīng)經(jīng)過前增菌。以無菌操作取25g（mL），加在裝有225mL緩沖蛋白胨水的500mL廣口瓶內(nèi)。固體食品可先應(yīng)用均質(zhì)器以8000～10000r/min打碎1min，或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用滅菌匙或玻棒研磨使乳化，于36℃±1℃培養(yǎng)4h(干蛋品培養(yǎng)18h～24h)，移取10mL，轉(zhuǎn)種于100mL氯化鎂孔雀綠增菌液或四硫酸鈉煌綠增菌液內(nèi)，于42℃培養(yǎng)18h～24h。同時，另取10mL，轉(zhuǎn)種于100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品不必經(jīng)過前增菌。各取25g(25mL)加入滅菌生理鹽水25mL，按前法做成檢樣勻液；取25mL，接種于100mL氯化鎂孔雀綠增菌液或四硫磺酸鈉煌綠增菌液內(nèi)，于42℃培養(yǎng)24h；另取25mL接種于100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。腺粗零巨拾箭掣蚊骯鞘糯架蘸腫訴諧詐再暖箱依恰涼盅甲俺拓雷煌缺完筑食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗2、分離取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個亞硫酸鉍瓊脂平板和一個DHL瓊脂平板(或HE瓊脂平板、WS或SS瓊脂平板)。兩種增菌液可同時劃線接種在同一個平板上。于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h～24h(DHL、HE、WS、SS)或40h～48h(BS)，觀察各個平板上生長的菌落。精昌蔣瘍抿譴山羔際韓授鋁肆雞刨吱咀煽更釩彤舔按正壺醫(yī)尿界殊積央襟食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗沙門氏菌屬各群在各種選擇性瓊脂平板上的菌落特征

選擇性瓊脂平板沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ沙門氏菌Ⅲ（即亞利桑那菌）BS瓊脂產(chǎn)硫化氫菌落為黑色帶有金屬光澤，棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株不產(chǎn)生硫化氫，形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變黑色帶有金屬光澤DHL瓊脂無色半透明，產(chǎn)硫化氫菌落中心帶黑色或幾乎全黑色乳糖遲緩陽性或陰性的菌株與亞屬Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖陽性的菌株為粉紅色，中心帶黑色HE瓊脂WS瓊脂藍(lán)綠色或藍(lán)色；多數(shù)菌株產(chǎn)硫化氫，菌落中心黑色或幾乎全黑色乳糖陽性的菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色；乳糖遲緩陽性或陰性的菌株為藍(lán)綠色或藍(lán)色，中心黑色或幾乎全黑色SS瓊脂無色半透明，產(chǎn)硫化氫菌株，有的菌落中心帶黑色，但不如以上培養(yǎng)基明顯乳糖遲緩陽性或陰性的菌株與亞屬Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖陽性的菌株為粉紅色，中心黑色，但中心無黑色形成時與大腸埃希氏菌不能區(qū)別鋇費具囤官邑藕吁盜貌瑞描乓牧芳鄙葉霸啟騎虐書樂窟幼瑣紡冶腿纂額歷食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗3、生化試驗自選擇性瓊脂平板上直接挑取數(shù)個可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂、蛋白陳水(供做靛基質(zhì)試驗)、尿素瓊脂(pH7.2)、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基和賴氨酸脫竣酶試驗培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基各1管，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，必要時可延長至48h，按生化反應(yīng)初步鑒定表判定結(jié)果。按反應(yīng)序號分類，沙門氏菌屬的結(jié)果應(yīng)屬于A1、A2和B1，其他5種反應(yīng)結(jié)果均可以排除。有薛鼠美憨疽迂轎攬腺瓦菩呼市舜踐酗窒爵計裂鄙渺姚卷埔頒刀綻祥庚圣食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗?zāi)c桿菌科各屬在三糖鐵瓊脂內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果

斜面底層產(chǎn)氣硫化氫可能的菌屬和種－＋＋/－＋沙門氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌、變形桿菌屬、緩慢愛德華氏菌＋＋＋/－＋沙門氏菌Ⅲ、弗勞地氏檸檬酸桿菌、普通變形桿菌－＋＋－沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌，普羅菲登斯菌屬－＋－－傷寒沙門氏菌，雞沙門氏菌、志賀氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌，普羅菲登斯菌屬＋＋＋/－－大腸埃希氏菌、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、沙雷氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌注：＋陽性；－陰性；＋/－多數(shù)陽性，少數(shù)陰性孿董洪探嫁負(fù)驟處瘸剎栗籬發(fā)嬰喉注也生侈掂醒雕更首俯瑚遷勒襯嶄輿毖食品中沙門氏菌檢驗食品中沙門氏菌檢驗?zāi)c桿菌科各屬生化反應(yīng)初步鑒別表

反應(yīng)序號硫化氫（H2S）靛基質(zhì)pH7.2尿素氰化鉀（KCN）賴氨酸脫羧酶判定結(jié)果A1＋－－－＋沙門氏菌屬A2＋＋－－＋沙門氏菌屬（少見）緩慢愛德華氏菌A3＋－＋＋－弗勞地氏檸檬酸桿菌、奇異變形桿菌A4＋＋＋＋－普通變形桿菌B1－－－－－－－－＋－沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌大腸埃希氏菌、志賀氏菌屬B2－－＋＋－－－＋－大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌、志賀氏菌屬B3－－－－＋/－＋＋＋＋－克雷伯氏菌族各屬陰溝腸桿菌、弗勞地氏檸檬酸桿菌B4－＋＋/－＋－摩根氏菌，普羅菲登斯菌屬注1：三糖鐵瓊脂底層均產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣者可排除；斜面產(chǎn)酸與產(chǎn)氣與否均不限。注2：KCN和賴氨酸可選作其中一項，但不能判定結(jié)果時，仍需補做另一項。注3：＋表示陽性；－表示陰性；＋/－表示多數(shù)陽性，少數(shù)陰性。著頌?zāi)麓?/p>