實驗改良氏法測蛋白含量

關(guān)于實驗改良氏法測蛋白含量實驗室規(guī)則按規(guī)章操作，保障實驗安全；進(jìn)入實驗室要著白大衣；禁止大聲喧嘩，保持實驗環(huán)境的安靜；維持實驗室的整潔。第2頁,共21頁，2024年2月25日，星期天?實驗課的考試?

實驗分組?

實驗室衛(wèi)生?

實驗報告的書寫第3頁,共21頁，2024年2月25日，星期天實驗名稱姓名：班級：學(xué)號：實驗原理：實驗?zāi)康模簩嶒灢襟E：文字簡潔，盡可能采用圖表實驗結(jié)果：原始數(shù)據(jù)、計算過程、結(jié)論實驗討論：結(jié)果分析、實驗注意事項實驗日期：同組人員：實驗報告的書寫第4頁,共21頁，2024年2月25日，星期天一、玻璃儀器的常規(guī)清洗二、試劑瓶、吸量管、試管的放置基本操作三、刻度吸量管的使用第5頁,共21頁，2024年2月25日，星期天分光光度計分光光度計的原理分光光度計的操作第6頁,共21頁，2024年2月25日，星期天

T=I/I0，A=-lgT

1、A1/A2=c1/c22、標(biāo)準(zhǔn)曲線法Lambert-Beer定律A=KcL分光光度計的原理I0ILK：吸光系數(shù)c：溶液濃度L：溶液厚度C第7頁,共21頁，2024年2月25日，星期天光源I0I單色器樣品池狹縫檢測系統(tǒng)分光光度計的構(gòu)造第8頁,共21頁，2024年2月25日，星期天分光光度計的使用1.打開電源，調(diào)節(jié)旋鈕至需要的波長，預(yù)熱20~30min2.1檔（空白管），T模式調(diào)100%，顯示“Blank”、“100”3.拉桿拉至1.5檔，T模式調(diào)0%，顯示“0.00”4.切換到A模式，拉至2、3、4檔，讀取各個樣品的吸光度5.使用完畢后，置于休息檔（1.5檔）拉桿，1-4檔樣品池讀數(shù)波長第9頁,共21頁，2024年2月25日，星期天1檔，空白對照，A=0，T=100%1.5檔，隔板，A=+∞，T=0%2檔，樣品1，A=？3檔，樣品2，A=？4檔，樣品3，A=？第10頁,共21頁，2024年2月25日，星期天1、分清光面、毛面手只可接觸毛面，光線須從光面通過2、用溶液潤洗2-3次，裝至2/3至4/5體積3、粗紙吸水、柔紙擦亮光面4、從低到高依次測量，不需清洗比色杯5、蒸餾水沖洗3-5次，擦干，倒扣放置比色皿的使用毛面光面第11頁,共21頁，2024年2月25日，星期天改良Lowry氏法測定蛋白質(zhì)含量實驗1第12頁,共21頁，2024年2月25日，星期天實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)改良Lowry氏法測定蛋白質(zhì)含量的原理及方法2、了解標(biāo)準(zhǔn)曲線在物質(zhì)定量測定中的應(yīng)用及繪制要點(diǎn)第13頁,共21頁，2024年2月25日，星期天實驗原理凱氏定氮法16%紫外吸收280nm呈色反應(yīng)第14頁,共21頁，2024年2月25日，星期天Pr.Cu2+OH-Pr-Cu2+

螯合物

(紫紅色)酚試劑鉬藍(lán)-鎢藍(lán)混合物

(藍(lán)色，深淺與蛋白含量呈正比)（雙縮脲反應(yīng)）Pr.Cu2+改良Lowry法第15頁,共21頁，2024年2月25日，星期天費(fèi)時較長，而且要精確控制操作時間。顯色程度與時間有關(guān)。專一性較差，干擾物質(zhì)較多。靈敏度高雙縮脲法的檢出限為0.2~1.7mg/ml，而本法的檢出限為0.015~0.110mg/ml。優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)第16頁,共21頁，2024年2月25日，星期天實驗步驟試劑（ml）蛋白標(biāo)準(zhǔn)品樣品測定管012345Pr標(biāo)準(zhǔn)液00.10.20.40.60.8待測血清1.0生理鹽水1.00.90.80.60.40.20試劑A0.9ml,

混勻后，37℃水浴10min試劑B0.1ml,

混勻后，室溫放置10min試劑C3ml,

立即混勻，37℃水浴10min第17頁,共21頁，2024年2月25日，星期天0x1x2x3x4Y3OD650蛋白質(zhì)量（mg）/蛋白濃度（mg/ml）1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和實測樣本濃度的求得Y2Y1樣品吸光度樣品濃度實驗結(jié)果第18頁,共21頁，2024年2月25日，星期天2、濃度換算樣品體積實測蛋白質(zhì)量待測蛋白濃度（g/L）=實測蛋白濃度╳稀釋倍數(shù)待測蛋白濃度（g/L）=╳稀釋倍數(shù)注意終體積相同的前提下，可以用質(zhì)量代表濃度例如：1號管中，蛋白質(zhì)量為0.02mg，而其終濃度為0.004mg/ml注意溶液的稀釋倍數(shù)例如：若以濃度為橫坐標(biāo)，根據(jù)吸光度得到實測蛋白濃度為0.02mg/ml,

則待測蛋白濃度=0.02mg/mlx5x1000=100mg/ml

若以質(zhì)量為橫坐標(biāo)，根據(jù)吸光度得到實測蛋白質(zhì)量為0.1mg,

則待測蛋白濃度=(0.1mg/1ml)x1000=100mg/ml第19頁,共21頁，2024年2月25日，星期天未知濃度蛋白溶液實測蛋白溶液1ml終體積5ml測吸光度1:1000稀釋加入A、B、C試劑計算出終濃度c實測蛋白濃度為

cx5未知蛋白濃度為

cx5x1000濃度換算過程解析未知濃度蛋白溶液的處理過程