實驗一油鏡的使用和細菌形態(tài)觀察及革蘭氏染色

關于實驗一油鏡的使用和細菌形態(tài)觀察及革蘭氏染色實驗要求堅持課前預習不遲到，不早退，更不能無故缺課；嚴格按正確規(guī)范實驗方法進行實驗，作好記錄；保持實驗室整潔注意安全事實求是地、獨立地寫好實驗報告第2頁,共24頁，2024年2月25日，星期天實驗報告姓名、班級和學號實驗題目實驗原理（略寫）實驗操作（（略寫）實驗結果畫圖文字描述分析和討論思考題第3頁,共24頁，2024年2月25日，星期天實驗一、顯微鏡油鏡的使用和細菌形態(tài)的觀察、細菌的革蘭氏染色

教學目標或要求：鞏固和掌握顯微鏡油鏡的正確使用；學習細菌制片和單染色技術；對人體微生物染色檢查，初步建立無菌操作的概念。學習細菌的革蘭氏染色方法

第4頁,共24頁，2024年2月25日，星期天顯微鏡油鏡的使用油鏡頭的識別和重要參數油鏡物鏡的工作原理油鏡的使用方法和注意事項第5頁,共24頁，2024年2月25日，星期天油鏡頭的識別和重要參數放大倍數數值孔徑工作距離第6頁,共24頁，2024年2月25日，星期天油鏡物鏡的工作原理使用油質作為玻片與接物鏡之間的介質——油浸系可以增加顯微鏡的放大倍數可以增加視野的照明度可以增大顯微鏡的分辨率第7頁,共24頁，2024年2月25日，星期天油鏡的使用方法和注意事項1、用低倍鏡對光。最大光圈2、低倍鏡觀察（尋找觀察目標）。適當縮小光圈3、高倍鏡觀察（選取理想的觀察目標）。4、油鏡觀察：高倍鏡觀察后-上升鏡筒-油鏡轉至正下方，在載玻片上加一小滴油-小心地下降鏡筒使鏡頭浸在油里-用粗螺旋將鏡筒緩慢上升，尋找目標（物象）用細螺旋調節(jié)，使物象清晰-觀察記錄。最大光圈5、觀察完畢。上升鏡筒，轉動物鏡轉換器，使油鏡物鏡偏位。用干凈擦鏡紙擦去鏡頭上的油跡，再取一張擦鏡紙醮上二甲苯擦去鏡頭上殘留的香柏油，最后再用一張干凈的擦鏡紙擦去殘留在鏡頭上的二甲苯。6、將顯微鏡各部分還原，放回箱中。第8頁,共24頁，2024年2月25日，星期天細菌的制片與染色單染色復染色第9頁,共24頁，2024年2月25日，星期天染料①堿性染料（basicdye）—帶正電染料。其陽離子部分為發(fā)色基團，可與細胞中帶負電的組分結合。如結晶紫沙黃,甲基藍,堿性復紅等。②酸性染料（Aciddye）—帶負電染料。其陰離子部分為發(fā)色基團，可與細胞中帶正電的組分結合。如剛果紅、酸性復紅等。③脂溶性染料—如Sudanblack。

多數染料都是中性有機鹽。據著色基的不同可分為以下類型：第10頁,共24頁，2024年2月25日，星期天涂片干燥固定染色1~2min水洗、吸干鏡檢細菌的單染色第11頁,共24頁，2024年2月25日，星期天步驟：結果:

陽性菌——紫色

陰性菌——紅色結晶紫初染碘液媒染乙醇脫色番紅復染涂片固定由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立。革蘭氏染色法（GramStain）第12頁,共24頁，2024年2月25日，星期天革蘭氏染色法操作步驟涂片——干燥——固定結晶紫1min——水洗I-KI1min——水洗95%乙醇脫色約10~20s——水洗沙黃或石炭酸復紅1min——水洗干燥——鏡檢第13頁,共24頁，2024年2月25日，星期天革蘭氏染色注意事項

p45第14頁,共24頁，2024年2月25日，星期天實驗內容1、用美藍對蘇云金芽孢桿菌進行單染色，在顯微鏡油鏡下觀察形態(tài)；2、用混合涂片的方法對大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌進行革蘭氏染色3、自選材料：用牙簽挑取牙垢觀察第15頁,共24頁，2024年2月25日，星期天實驗報告繪出革蘭氏染色后大腸桿菌和蘇云金芽孢桿菌的形態(tài)圖并說明染色結果思考題：你認為那些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結果的正確性？其中最關鍵的環(huán)節(jié)是什么？如何使你的染色結果可信？第16頁,共24頁，2024年2月25日，星期天第17頁,共24頁，2024年2月25日，星期天第18頁,共24頁，2024年2月25日，星期天第19頁,共24頁，2024年2月25日，星期天第20頁,共24頁，2024年2月25日，星期天第21頁,共24頁，2024年2月25日，星期天第22頁,共24頁，