骨髓細(xì)胞學(xué)檢查本課件

第三節(jié)—骨髓細(xì)胞學(xué)檢查

內(nèi)容

Contents1.骨髓細(xì)胞學(xué)檢查（骨髓分析）2.常用血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色3.常見血液病的血液學(xué)特征2主要內(nèi)容

骨髓細(xì)胞學(xué)檢查：

骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的臨床意義

骨髓和外周血細(xì)胞化學(xué)染色

常見血液病的血液學(xué)特征：

缺鐵性貧血1、貧血

巨幼細(xì)胞性貧血

溶血性貧血

再生障礙性貧血3主要內(nèi)容常見血液病的血液學(xué)特征：2、白血?。?/p>

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分型（FAB分型）MMICM分型

免疫表型分析（免疫學(xué)）I染色體分析（細(xì)胞遺傳學(xué)）C基因診斷（分子生物學(xué))M3、原發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）4、骨髓瘤（MM）

4

病例：

患者：男性，41歲，左上腹不適，乏力，消瘦3

月余而入院體檢：T37.3C，R21次/分，P68次/分，Bp14/8kPa

肝肋下1cm,脾肋下3cm；

下一步做什么檢查？5病例

實(shí)驗(yàn)室檢查：1、血液常規(guī)檢驗(yàn)

Hb：150g/LWBC：250×109/L

PLT：559×109/L

分類：

原始粒細(xì)胞1%

早幼粒細(xì)胞

4%

中、晚幼粒細(xì)胞41%

嗜酸性粒細(xì)胞8%

嗜堿性粒細(xì)胞6%

問題在哪里？

6實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)laboratory78實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)laboratory9實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)laboratory10病例2、骨髓細(xì)胞檢查

骨髓極度增生以粒細(xì)胞增生為主外周血分類：原始粒細(xì)胞2%1%早幼粒細(xì)胞4%4%

中晚幼粒細(xì)胞46%41%

紅細(xì)胞系統(tǒng)6%

中晚幼紅為主

形態(tài)正常11病例細(xì)胞化學(xué)染色：

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（ALP）陰性細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn)：

Ph染色體陽性分子生物學(xué)（基因）檢查：

BCR/ABL112如何分析？如何診斷？原始及幼稚細(xì)胞病例分析13最后的診斷

慢性粒細(xì)胞性白血病（急性期）14普通光學(xué)顯微鏡15白血病細(xì)胞16淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞17骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)

細(xì)胞化學(xué)染色

一種簡單、歷史悠久的診斷手段18破骨細(xì)胞19骨髓細(xì)胞201233341---原粒2---早幼粒3---中幼粒4---晚幼粒21骨髓報(bào)告骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查22二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

臨床意義23

臨床應(yīng)用

1．適應(yīng)癥

血細(xì)胞減少或增多，外周血出現(xiàn)幼稚細(xì)胞；不明原因的骨痛、骨質(zhì)破壞、腎功能異常、

黃疸、紫癜；

不明原因的發(fā)熱，肝、脾、淋巴結(jié)腫大；血液系統(tǒng)疾病化療后的定期復(fù)查及療效觀察；

其他：骨髓活檢、造血干細(xì)胞培養(yǎng)、染色體分析、

微生物培養(yǎng)及寄生蟲檢查24

臨床應(yīng)用

2、禁忌癥：

出血傾向、血友病、晚期妊娠

25骨髓標(biāo)本的采集骨髓取材的部位和方法部位：胸骨、棘突、髂骨等處方法：多用穿刺法吸取26

穿刺部位的選擇部位：胸骨，髂后上棘,髂前上棘，胸骨穿刺髂后上棘穿刺27標(biāo)本采集骨穿針骨髓液的采集骨髓量：0.2mL抗凝：EDTA-K2骨髓涂片3-5張迅速揮干281、骨髓穿刺術(shù)常規(guī)消毒，局部麻醉29骨髓穿刺術(shù)局部麻醉30骨髓穿刺術(shù)進(jìn)骨髓穿刺針31骨髓穿刺術(shù)抽吸骨髓液，制備骨髓片32骨髓片制備情況涂片制備良好涂片制備良好涂片制備不佳涂片制備差332、骨髓涂片的顯微鏡檢查

1、低倍鏡檢查：

（1）觀察骨髓涂片質(zhì)量:

取材：骨髓小粒、脂肪小滴。

制片：厚薄，頭、體、尾分布

染色：細(xì)胞著色情況34（2）骨髓增生程度分級增生程度 有核細(xì)胞：RBC常見原因 平均增生極度活躍1:1 各型白血病增生明顯活躍 1:10 各型白血病、增生性貧血增生活躍 1:20正常骨髓像、某些貧血增生減低 1:50 再障（慢性型）、粒缺增生極度減低 1:200再障（急性型）骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查35骨髓增生程度分級(高倍鏡）36

（3）巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)

巨核細(xì)胞的數(shù)量:

低倍鏡計(jì)數(shù)，油鏡分類；骨髓涂片（1.5cm×3.0cm血膜上）

37異常細(xì)胞38各類轉(zhuǎn)移癌392、油鏡檢查：1）有核細(xì)胞分類：計(jì)數(shù)200-500個(gè)有核細(xì)胞（增生極度活躍100個(gè)增生明顯活躍-500個(gè)）計(jì)算各系統(tǒng)各階段細(xì)胞百分率選擇合適部位402、油鏡檢查：（2）計(jì)數(shù)粒紅比例（G∶E）（3）觀察各系細(xì)胞形態(tài)有無異常（4）觀察有無其他特殊細(xì)胞及寄生蟲。41細(xì)胞形態(tài)觀察①粒系②紅系③單核④淋巴⑤漿細(xì)胞、⑥巨核細(xì)胞⑦其他細(xì)胞的數(shù)量。⑧骨髓小粒的成份。⑨有無寄生蟲及其他異常細(xì)胞。⑩全片復(fù)查增生情況，各階段細(xì)胞所占的比例、大小、形態(tài)、核染色質(zhì)、核仁、核形、胞質(zhì)量多與少、漿、顆粒42

正常骨髓象報(bào)告：

1)增生活躍

2)粒紅比值正常（M∶E2～4：1）

3)粒系增生良好：

a.占有核細(xì)胞的40～60%；

b.各階段細(xì)胞比例適當(dāng)

原粒＜2%，早幼粒＜

5%，中晚幼粒各＜

15%，桿狀核百分率＞分葉核，嗜酸性粒細(xì)胞＜

5%，嗜堿性粒細(xì)胞＜

1%；

c.細(xì)胞形態(tài)無明顯異常。骨髓細(xì)胞學(xué)檢查43

4)紅系增生良好：

a.占有核細(xì)胞的15～20%左右

b.各階段比例適當(dāng)；

原紅細(xì)胞<1%，

早幼紅細(xì)胞<5%，以中、晚幼紅細(xì)胞為主，各占10%；

c．形態(tài)無明顯異?；虺墒旒t細(xì)胞形態(tài)大致正常。骨髓細(xì)胞學(xué)檢查44

5)淋巴細(xì)胞系統(tǒng)占20～25%；

（主要是成熟細(xì)胞）

6）單核細(xì)胞系統(tǒng)<4%

（主要是成熟細(xì)胞）

7）漿細(xì)胞系統(tǒng)<2%

（主要是成熟細(xì)胞）骨髓細(xì)胞學(xué)檢查45

8)巨核細(xì)胞

a.數(shù)量/全片：7～35個(gè)(1.5cm×3.0cm)

b.各階段情況正常；原巨核細(xì)胞0～5%

幼巨核細(xì)胞

0～10%，

顆粒巨核細(xì)胞10～50%，

產(chǎn)血小板巨核細(xì)胞20～70%，

裸核型

0～30%，

血小板易見、成堆狀存在，形態(tài)正常。

骨髓細(xì)胞學(xué)檢查46

8)其他細(xì)胞:

組織細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肥大細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞及組織嗜堿細(xì)胞等歐間，未見異常。

9)無特殊細(xì)胞及寄生蟲。骨髓細(xì)胞學(xué)檢查47骨髓報(bào)告的診斷價(jià)值

肯定性、

支持性、

排除性、

形態(tài)學(xué)描寫

療效判斷48骨髓象檢查的注意事項(xiàng)

正確認(rèn)識細(xì)胞

檢查者必須反復(fù)實(shí)踐，積累經(jīng)驗(yàn)，需經(jīng)較長時(shí)間的鍛煉才能熟練掌握。

不要根據(jù)一兩個(gè)特點(diǎn)就做出肯定或否定的判斷。

寧可看得仔細(xì)而少看，不可貪多而馬虎。49（四）骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)的

臨床意義50血液細(xì)胞51紅細(xì)胞形態(tài)的診斷價(jià)值52紅細(xì)胞形態(tài)的診斷價(jià)值53紅細(xì)胞形態(tài)的診斷價(jià)值54粒細(xì)胞系統(tǒng)異常的臨床意義55淋巴細(xì)胞的異常

(白血病)56紅白血病57瘧原蟲微絲蚴58利什曼原蟲弓形體蟲59小結(jié)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)的診斷價(jià)值肯定性診斷支持性診斷、排除性診斷、形態(tài)學(xué)描述療效判斷60細(xì)胞形態(tài)

主觀辨別？61三、常用的血細(xì)胞化學(xué)染色定義：血細(xì)胞化學(xué)染色是以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，根據(jù)化學(xué)反應(yīng)原理,將骨髓片染色,觀察單個(gè)細(xì)胞內(nèi)在的生化特性，了解它們的代謝活動(dòng)，生理功能和病理變化.

鑒別各種類型血液細(xì)胞62本節(jié)主要內(nèi)容

常見的細(xì)胞化學(xué)染色及臨床應(yīng)用（POX、ALP、ACP、PAS、SE、NSE染色）

63細(xì)胞化學(xué)染色方法

酶脂類糖原鐵64（一）過氧化物酶染色

(Peroxidase,POX)

[原理]

H2O2細(xì)胞內(nèi)

POX[O]↑

聯(lián)苯胺[O]聯(lián)苯胺藍(lán)+

亞硝基氰化鈉暗藍(lán)色顆粒(定位于胞漿內(nèi))計(jì)數(shù)100個(gè)原始細(xì)胞報(bào)告百分率

[結(jié)果]

粒系：強(qiáng)陽性單核系：弱陽性淋巴系：陰性

[臨床意義]

鑒別急粒和急淋65過氧化物酶（POX）66各型白血病的MPO反應(yīng)

粒系白血病細(xì)胞淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞67（二）酯酶染色

EsteraseStaining方法

偶氮偶聯(lián)法1特異性酯酶染色

萘酚AS-D氯乙酸酯酶染色（SpecificEsteraseStaining）（NAS-DCEorCAE）

（粒細(xì)胞酯酶）

（單核細(xì)胞酯酶）

2.非特異性酯酶染色

Non-SpecificEsteraseStaining）

α-乙酸萘酚酯酶染色

（α-NAE)а-丁酸萘酚酯酶染色（a-NBE）分類68氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

naphytholAS-Dchloroacetateesterase,AS-DCAE細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)69臨床評價(jià)

急性白血病的鑒別：1.急性粒白血病M31+～2+2+～3+2.急性單核細(xì)胞白血病

原、幼單核細(xì)胞---陰性3.急性淋巴細(xì)胞白血病

原、幼淋細(xì)胞----陰性

細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)70α-丁酸萘酚酯酶染色結(jié)果

（單核細(xì)胞酯酶）骨髓細(xì)胞學(xué)檢查71臨床評價(jià)

（單核細(xì)胞白血病）72

α-乙酸萘酚酯酶（α-NAE）

染色結(jié)果（非特異性酯酶）

細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)73臨床評價(jià)鑒別白血病類型；同時(shí)必須做NaF抑制試驗(yàn)細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)74

2張相同標(biāo)本同時(shí)固定后，配制2缸孵育液，其中一缸內(nèi)加入NaF（抑制酶活性），然后將2張標(biāo)本分別放入2個(gè)缸內(nèi)各自染色。最后分別進(jìn)行積分，求出抑制率。（﹥50％）氟化鈉抑制試驗(yàn)（NaFInhibittest

）NaF抑制率＝抑制前陽性率或積分抑制后陽性率或積分抑制前陽性率或積分×100％-細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)75

結(jié)果急性粒細(xì)胞白血病

---

原粒細(xì)胞弱陽性，不被NaF抑制急性單核細(xì)胞白血病---

原單核細(xì)胞陽性，被NaF抑制；細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)76非特異性酯酶+NaF77一種特異性酯酶染色加一種特異性酯酶染色臨床意義：粒、單核細(xì)胞白血病酯酶雙染78酯酶雙染（粒單細(xì)胞白血?。?/p>

兩種酯酶在同一張片子上染色細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)79（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（alkalinephosphataseALP）

80

報(bào)告方式：

百分率：計(jì)數(shù)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，計(jì)算其陽性率。

積分值：計(jì)數(shù)100個(gè)成熟粒細(xì)胞，按反應(yīng)強(qiáng)度作出分級，將其百分率乘以級數(shù)然后相加。81[參考值]

正常：百分率10-40%，

積分7-51[臨床意義]

1.區(qū)別CML

、類白血病反應(yīng)↓↓積分為0;↑積分>200分2.AA時(shí)↑PNH↓3.化膿性感染↑病毒性感染時(shí)↓

4、真性紅細(xì)胞增多癥↑繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥N82類白血病反應(yīng)慢粒白血病反應(yīng)83慢性粒細(xì)胞性白血病ALP

Chronicmyeloidleukemia

陰性84（四）糖原染色（過碘酸-雪夫反應(yīng)）

（periodicacid–Schiff,PAS）各系細(xì)胞糖原結(jié)果判斷85臨床評價(jià)陽性或強(qiáng)陽性：紅細(xì)胞系統(tǒng)疾?。海ㄓ准t細(xì)胞）

紅血病、紅白血病、MDS淋巴細(xì)胞系統(tǒng)疾?。?/p>

急淋（原淋、幼淋巴細(xì)胞）單核細(xì)胞系統(tǒng)疾?。?/p>

急單（原單、幼單核細(xì)胞）86紅血病、紅白血?。ㄔ技t細(xì)胞）87淋巴細(xì)胞判斷88（四）、酸性磷酸酶

（acidphoshataseACP)原理：硫化鉛和偶帶偶聯(lián)法結(jié)果：胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒者為陽性（硫化鉛）

胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)亮紅色顆粒者為陽性（偶氮偶聯(lián)法）

89臨床意義

鑒別多毛細(xì)胞白血病，不被L-酒石酸所抑制90鑒別T細(xì)胞白血病與B細(xì)胞白血病

陽性陰性鑒別Gaucher病與Nienann-Pick病

陽性陰性Gaucher病Nienann-Pick病91細(xì)胞形態(tài)和血液病細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞化學(xué)染色鑒別血液病92本節(jié)主要內(nèi)容

常見的細(xì)胞化學(xué)染色及臨床應(yīng)用（POX、ALP、ACP、PAS、SE、NSE染色）93主要內(nèi)容

1、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查：

骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

臨床意義

2、骨髓和外周血--

細(xì)胞化學(xué)染色

94常見血液病的血液學(xué)特征

缺鐵性貧血1、貧血

巨幼細(xì)胞性貧