微生物的純培養(yǎng)與顯微技術(shù)

關(guān)于微生物的純培養(yǎng)與顯微技術(shù)第一節(jié)微生物的分離和純培養(yǎng)一、相關(guān)概念培養(yǎng)物（culture）：在微生物學(xué)中，指在人為規(guī)定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體。純培養(yǎng)物（pureculture）：只有一種微生物的培養(yǎng)物。無菌技術(shù)（aseptictechnique）：指在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時防止其被其他微生物污染的技術(shù)。第2頁,共63頁，2024年2月25日，星期天二、無菌條件1、微生物培養(yǎng)用的常用器具

試管、玻璃三角燒瓶、平皿2、滅菌方式

高壓蒸汽滅菌、高溫干熱滅菌、化學(xué)試劑、紫外射線、微波、過濾等3、接種操作1）、對操作環(huán)境滅菌2）、對接種工具的滅菌3）、接種過程的無菌操作第3頁,共63頁，2024年2月25日，星期天高壓蒸汽滅菌鍋超凈工作臺第4頁,共63頁，2024年2月25日，星期天三、固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)（一）相關(guān)概念1、菌落（colony）：單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長群體。2、菌苔（lawn）：當(dāng)固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片時，便成為菌苔。第5頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細(xì)菌菌落形態(tài)第6頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第7頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第8頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第9頁,共63頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物分離的手段1、稀釋倒平板法（pourplatemethod）

分離材料無菌水倍比稀釋取不同稀釋液少許

倒入45-50℃瓊脂培養(yǎng)基混合倒入培養(yǎng)皿培養(yǎng)第10頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2、涂布平板法（spreadplatemethod）一定稀釋度的樣品滴加在平板表面

無菌玻璃涂棒涂布菌液均勻分散整個平板表面

第11頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3、平板劃線法（streakplatemethod）第12頁,共63頁，2024年2月25日，星期天4、稀釋搖管法（dilutionshakeculturemethod）第13頁,共63頁，2024年2月25日，星期天四、液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)1、原因不是所有的微生物都能在固體培養(yǎng)基上生長。例如：許多原生動物、藻類、大細(xì)胞細(xì)菌等。2、方法

稀釋法（必須在同一個稀釋度的許多平行試管中，應(yīng)超過95%表現(xiàn)為不生長）第14頁,共63頁，2024年2月25日，星期天五、單細(xì)胞（孢子）分離直接采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。第15頁,共63頁，2024年2月25日，星期天六、選擇培養(yǎng)分離（一）原因：1、單一培養(yǎng)不能滿足所有微生物生長。2、微生物對培養(yǎng)條件的選擇。3、微生物對營養(yǎng)的竟?fàn)帯＃ǘ┓蛛x方法1、利用選擇平板進行直接分離

依據(jù)：利用微生物自身特點選擇分離條件，如耐高溫、產(chǎn)特殊酶類等。第16頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2、富集培養(yǎng)

本質(zhì)：使要分離的目的微生物的數(shù)量大大增加。

富集條件：根據(jù)所需分離的微生物的特點進行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養(yǎng)等等許多方面。

第17頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3、微生物的直接培養(yǎng)

方法：利用微生物自然生長條件下加入選擇條件。

原理：自然條件下微生物的多樣性，代謝的多樣性，微生物作用的協(xié)調(diào)性（分工合作）。第18頁,共63頁，2024年2月25日，星期天七、二元培養(yǎng)物（一）概念

二元培養(yǎng)物：培養(yǎng)物中只含有二種微生物，而且是有意識的保持二者之間的特定關(guān)系的培養(yǎng)物。（二）應(yīng)用方面

嚴(yán)格寄生物的分離、特殊共生關(guān)系的微生物的分離。第19頁,共63頁，2024年2月25日，星期天八、微生物的保藏技術(shù)1、意義2、菌種保藏機構(gòu)（P19）3、保藏方法1）傳代培養(yǎng)保藏注意：a、應(yīng)根據(jù)微生物不同特性選擇培養(yǎng)基。b、傳代時間

2）冷凍保藏

注意：a、冰晶形成對細(xì)胞傷害。b、要快速升降溫。c、加入保護劑第20頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3）干燥保藏法

a、沙土管保存

適用于產(chǎn)孢子的微生物，如芽孢桿菌、放線菌等。

b、冷凍真空保藏

將有保護劑樣品先凍結(jié)，然后真空作用下除去水分，置真空或惰性氣體的密閉環(huán)境中低溫保存。4）其它方法紙片保藏、薄膜保藏、寄主保藏等第21頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)顯微鏡下的微生物第22頁,共63頁，2024年2月25日，星期天一、細(xì)菌、放線菌和古生菌

原核微生物分為真細(xì)菌和古生菌，真細(xì)菌又分為細(xì)菌、放線菌。1、細(xì)菌的形態(tài)和排列

1）一般形態(tài)球狀、桿狀與螺旋狀三種

第23頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第24頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2)細(xì)菌的排列

許多細(xì)菌也常以成對、成鏈、成簇的形式生長。第25頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第26頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3）其它形態(tài)柄桿菌（prosthecatebacteria）細(xì)胞上有柄（stalk）、菌絲（hyphae）、附器（appendages）等細(xì)胞質(zhì)伸出物，細(xì)胞呈桿狀或梭狀，并有特征性的細(xì)柄。第27頁,共63頁，2024年2月25日，星期天fivecellsareatachedbytheirstalks.第28頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

Anelectronmicrographofametal-shadowedpreparationofPlanctomycesmaris.Asinglecellisabout1-1.5umlong.Notethefibrillarnatureofthestalk.Piliarealsoabundant.Notealsotheflagella(curlyappendages)oneachcellandthebudthatisdevelopingfromthenonstalkedpoleofonecell.第29頁,共63頁，2024年2月25日，星期天PhotomicrographsofcellsofHyphomicrobium.Byphasecontrast,showingtypicalfields.Noticethelonghyphaeandtheoccasionalbuddingcell第30頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

球衣菌（Sphaerotilus），能形成衣鞘（sheath），桿狀的細(xì)胞呈鏈狀排列在衣鞘內(nèi)而成為絲狀.第31頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細(xì)胞呈星形和方形的細(xì)菌

第32頁,共63頁，2024年2月25日，星期天支原體（Mycoplasma）由于只有細(xì)胞膜，沒有細(xì)胞壁，故細(xì)胞柔軟，形態(tài)多變，具有高度多形性。第33頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第34頁,共63頁，2024年2月25日，星期天Donotproducecellwalls

Haveagramnegative-likemembranestructure第35頁,共63頁，2024年2月25日，星期天4）繁殖方式：無性繁殖：裂殖

第36頁,共63頁，2024年2月25日，星期天有性繁殖：細(xì)菌結(jié)合conjugation第37頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2、放線菌1）菌絲形態(tài)：營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和孢子絲（鑒定指標(biāo)）第38頁,共63頁，2024年2月25日，星期天ChainofconidiosporesAgarsurfaceSubstratemyceliumAerialhyphae第39頁,共63頁，2024年2月25日，星期天孢子絲不同形態(tài)第40頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3、古生菌

古生菌與細(xì)菌具有類似的個體形態(tài)，但它們多生活于一些生存條件十分惡劣的極端環(huán)境中，例如高溫、高鹽、高酸等。隱蔽熱網(wǎng)菌（Pyrodictiumoccultum）是迄今所發(fā)現(xiàn)的最耐熱的生物之一，它的最適生長溫度為105℃

第41頁,共63頁，2024年2月25日，星期天從熱泉中分離出的火山熱原體（Thermoplasmavolcanium）細(xì)胞電鏡照片熱原體（Thermoplasma）沒有細(xì)胞壁，其形態(tài)也象細(xì)菌中的支原體一樣呈多形性。第42頁,共63頁，2024年2月25日，星期天4、原核生物的細(xì)胞大小1）隨種類不同而變化2）影響細(xì)菌形態(tài)變化的因素

第43頁,共63頁，2024年2月25日，星期天二、真菌

1、特點：

種類繁多，形態(tài)各異、大小懸殊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)多樣。2、霉菌（mold）

霉菌菌體均由分枝或不分枝的菌絲（hypha）構(gòu)成。許多菌絲交織在一起，稱為菌絲體（mycelium）。Filamentousfungi第44頁,共63頁，2024年2月25日，星期天1）無隔膜菌絲(nonseptatehypha)

整個菌絲為長管狀單細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有多個核。其生長過程只表現(xiàn)為菌絲的延長和細(xì)胞核的裂殖增多以及細(xì)胞質(zhì)的增加。如根霉、毛霉、犁頭霉等。第45頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2）有隔膜菌絲(septatehypha)

菌絲由橫隔膜分隔成成串多細(xì)胞，每個細(xì)胞內(nèi)含有一個或多個細(xì)胞核。第46頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3）相關(guān)概念營養(yǎng)菌絲：在固體培養(yǎng)基上，部分菌絲伸入培養(yǎng)基內(nèi)吸收養(yǎng)料的菌絲。氣生菌絲：向空中生長的菌絲。繁殖菌絲：由氣生菌絲發(fā)育到一定階段，分化而成的。第47頁,共63頁，2024年2月25日，星期天4）繁殖方式無性生殖：菌絲斷裂、產(chǎn)生孢子

厚垣孢子第48頁,共63頁，2024年2月25日，星期天分節(jié)孢子

第49頁,共63頁，2024年2月25日，星期天分生孢子第50頁,共63頁，2024年2月25日，星期天有性生殖：準(zhǔn)性生殖第51頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第52頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3、酵母菌1）繁殖方式無性生殖：芽殖或裂殖

第53頁,共63頁，2024年2月25日，星期天有性繁殖：產(chǎn)生子囊孢子新型隱球酵母（Cryptococcusneoformans）第54頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2）形態(tài)單細(xì)胞呈卵圓形、圓形、圓柱形或檸檬形第55頁,共63頁，2024年2月25日，星期天多細(xì)胞相連成為鏈狀：假絲酵母第56頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3）作用

a、有利面：在釀造、食品、醫(yī)藥、飼料方面應(yīng)用。

b、