消毒滅菌技術及效果監(jiān)測

關于消毒滅菌技術及效果監(jiān)測2滅菌－殺滅或除去所有微生物的繁殖體和芽胞。消毒－殺滅或除去病原微生物。防腐－抑制微生物的生長與繁殖。抑菌劑或防腐劑。無菌—不含有任何的活菌一消毒與滅菌技術

基本概念第2頁,共30頁，2024年2月25日，星期天3二消毒與滅菌方法

1物理滅菌法熱力滅菌法（干熱滅菌、濕熱滅菌）輻射滅菌法（紫外線、電離幅射、微波）濾過除菌法（除菌濾器、適用物品）其他超聲波（機制：裂解細菌，主要用于粉碎細胞、提取抗原）干燥與低溫抑菌第3頁,共30頁，2024年2月25日，星期天4熱力滅菌法原理使微生物蛋白質，酶變性凝固；膜結構破壞微生物體內的DNA斷裂，核蛋白解體。方法

干熱滅菌法濕熱滅菌法熱力滅菌法第4頁,共30頁，2024年2月25日，星期天5

焚燒----最徹底的滅菌方法燒灼----直接用火焰滅菌方法如接種環(huán)、試管口、三角瓶口干烤----加熱160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷1、干熱滅菌法滅菌效果：可殺死營養(yǎng)體和芽胞如尸體等第5頁,共30頁，2024年2月25日，星期天62.濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法（熱壓滅菌法）最有效的濕熱滅菌法121℃15-20mim（殺芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(殺繁殖體)-2h(殺芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15-30mim(殺繁殖體)反復多次流動蒸汽間歇加熱滅菌(殺芽胞）較低的溫度61℃30mim/71℃30s（殺致病菌）效果比干熱好第6頁,共30頁，2024年2月25日，星期天7利用化學藥物（消毒防腐劑）破壞微生物的化學組成、物理結構和生理活動，達到防腐滅菌目的。消毒與滅菌方法

2化學消毒法第7頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

三、醫(yī)院消毒效果監(jiān)測范圍

日常監(jiān)測重點科室（手術室、層流潔凈病房、ICU、產房、新生兒科、母嬰同室病房、透析室、血液病房、燒傷病房、供應室、內鏡室、治療室、換藥室發(fā)生醫(yī)院內感染時應在發(fā)生感染的科室及相關科室采樣監(jiān)測

第8頁,共30頁，2024年2月25日，星期天四、醫(yī)院消毒效果監(jiān)測分類

消毒滅菌效果監(jiān)測：使用中消毒液或無菌器械保存液滅菌設備（壓力蒸汽滅菌器、環(huán)氧乙烷滅菌器）紫外線燈滅菌物品環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測：空氣物表醫(yī)務人員手

第9頁,共30頁，2024年2月25日，星期天1、空氣消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：消毒處理后、操作前進行采樣。

2、布點及采樣方法：（1）Ⅰ類環(huán)境布點、采樣方法：依據《醫(yī)院潔凈手術部建筑技術規(guī)范》(GB50333-2002)10.3.13、手術區(qū)：需要特別保護的手術臺及其周圍區(qū)域。

Ⅰ級手術室的手術區(qū)是指手術臺兩側邊至少各外推0.9m、兩端至少各外推0.4m后（包括手術臺）的區(qū)域；

Ⅱ級手術室的手術區(qū)是指手術臺兩側邊至少各外推0.6m、兩端至少各外推0.4m后(包括手術臺)的區(qū)域；

Ⅲ級手術室的手術區(qū)是指手術臺四邊至少各外推0.4m后（包括手術臺）的區(qū)域。

Ⅳ級手術室不分手術區(qū)和周邊區(qū)。周邊區(qū)：潔凈手術室內除去手術區(qū)以外的其他區(qū)域。第10頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

Ⅰ類環(huán)境采樣方法

將普通營養(yǎng)瓊脂平皿（直徑為9cm）放在室內手術區(qū)和周邊區(qū)各采樣點處，采樣高度離地面≤0.8米，采樣時將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露30分鐘，蓋好，于37℃培養(yǎng)24小時，分別計數(shù)手術區(qū)和周邊區(qū)的平均菌落數(shù)。第11頁,共30頁，2024年2月25日，星期天Ⅱ、Ⅲ類環(huán)境布點、采樣方法

依據《消毒技術規(guī)范》(衛(wèi)生部2002年版)3.17.8。室內面積≤30M2，設內、中、外對角線3點，內、外點布點部位距墻壁1M處；室內面積>30M2，設4角及中央5點（雙對角線），4角的布點部位距墻壁1M處。將普通營養(yǎng)瓊脂平皿(直徑為9cm)放在室內各采樣點處，采樣高度距地面1.5米（GB15982-1995：0.8～1.5米），采樣時將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露5分鐘，蓋好立即送檢，于37℃培養(yǎng)48小時，計數(shù)平板菌落數(shù)，并計算出空氣細菌菌落總數(shù)。

第12頁,共30頁，2024年2月25日，星期天空氣采樣時的注意事項

1、（消毒前）前提將放置平皿的采樣臺準備好。

2、開門方式：自動門,推拉式彈簧門,有把手的門。

3、行走路線（盡可能少在室內走動）動作要輕。先布皿后開蓋。

4、動態(tài)環(huán)境

5、同一房間空氣、物表采樣，先采空氣，后采物表；最好由同一人操作。

54321第13頁,共30頁，2024年2月25日，星期天2、物體表面消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：消毒處理后進行采樣。

2、采樣方法：用5cm×5cm的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉棉拭子，連續(xù)采樣4個，剪去手接觸部位后，投入10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內，進行細菌菌落總數(shù)和致病菌檢測。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣第14頁,共30頁，2024年2月25日，星期天物體表面消毒效果監(jiān)測

3、檢測方法：（1）細菌總數(shù)檢測：檢測方法按《消毒技術規(guī)范》3.17.6.3（1）執(zhí)行。小型物體表面的結果計算，用cfu/件。（2）致病菌檢測：檢測方法按《消毒技術規(guī)范》3.17.15原則執(zhí)行。

4、結果判定

Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。

Ⅲ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。

Ⅳ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。第15頁,共30頁，2024年2月25日，星期天采樣注意事項

1、空氣、物表采樣由同一人操作。

2、物表采樣應由近及遠，兼顧上下中左右

3、母嬰同室、血透室屬Ⅱ類環(huán)境

4、樣品標識一定要清楚，能朔源、追蹤，以便整改。

5、致病菌包括金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、溶血性鏈球菌（產房、新生兒科、母嬰同室加測沙門氏菌）

6、采樣棉簽在現(xiàn)場要做空白對照。

第16頁,共30頁，2024年2月25日，星期天3、手消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：消毒后立即采樣。

2、采樣方法：被檢人五指并攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉動采樣的棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內，進行細菌菌落總數(shù)和致病菌檢測。第17頁,共30頁，2024年2月25日，星期天手消毒效果監(jiān)測檢測方法

（1）細菌總數(shù)檢測：將采樣管在混勻器上振蕩20秒或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內加入已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。采樣結果計算方法：細菌總數(shù)（cfu/cm2）=

（2）致病菌檢測：按《消毒技術規(guī)范》3.17.15原則執(zhí)行。

平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)

采樣面積（cm2）第18頁,共30頁，2024年2月25日，星期天結果判定

Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌為消毒合格。

Ⅲ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。

Ⅳ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒科及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、黃色葡萄球菌。第19頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

注意事項

1、分清普通衛(wèi)生洗手和外科洗手衛(wèi)生手消毒。外科洗手標準值?Ⅱ類環(huán)境：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌(產房、母嬰同室、新生兒科加測沙門氏菌、溶血性鏈球菌)Ⅲ類環(huán)境：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌第20頁,共30頁，2024年2月25日，星期天4、使用中消毒液或無菌器械保存液監(jiān)測

1、使用中消毒液有效成分的測定

2、使用中消毒液或無菌器械保存液染菌量的測定（1）涂抹法：（2）傾注法：用無菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入到9ml含相應中和劑的無菌生理鹽水采樣管中混勻，分別取0.5ml放入2只滅菌平皿內，加入已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一平板置20℃培養(yǎng)7天，觀察霉菌生長情況；另一個平板置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)72h，計數(shù)菌落數(shù)。同時按3.17.15檢測致病菌。使用中消毒液或無菌器械保存液染菌量（cfu/ml）=每個平板上的菌落數(shù)×20

結果判定：消毒液染菌量≤100cfu/ml，并未檢出致病菌為合格。第21頁,共30頁，2024年2月25日，星期天注意事項：1、必須是使用中消毒液或無菌器械保存液。

2、要求采樣后1h內檢測，實際工作中由于各種原因做不到，采5ml樣品放在滅菌試管中（試管中不放中和劑）帶回實驗室。

3、樣品名稱一定要標識清楚，不僅要注明采樣地點，而且要注明消毒液的名稱、有效濃度等，例：勁康消毒劑、0.1%健之素消毒液、80%漂白粉溶液、0.5%洗必泰等標識都是不正確的。

4、消毒液細菌菌落總數(shù)標準值≤100cfu/ml，無菌器械保存液細菌菌落總數(shù)標準值是不得檢出。

5、致病菌檢測包括金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、溶血性鏈球菌。第22頁,共30頁，2024年2月25日，星期天5、滅菌物品消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：在滅菌處理后，存放有效期內采樣。

2、采樣方法：按《消毒技術規(guī)范》3.17.5.2原則執(zhí)行

3、結果判定：陽性對照在24小時內應有菌生長，陰性對照在培養(yǎng)期間應無菌生長,如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內均為澄清或雖顯渾濁但經證明并非有菌生長，判為滅菌合格；如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯渾濁并證實有菌生長，應重新取樣，分別同法復試2次，除陽性對照外，其他各管均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。第23頁,共30頁，2024年2月25日，星期天滅菌物品消毒效果監(jiān)測注意事項1、無菌檢驗應在潔凈度為100級單向流空氣區(qū)域內進行，最好把滅菌包帶回在百級實驗室打開。應嚴格遵守無菌操作，避免微生物污染。

2、應采有效期內的樣品（高壓滅菌：一般是兩周；還氧乙烷：兩年）第24頁,共30頁，2024年2月25日，星期天6、滅菌器滅菌效果監(jiān)測1、監(jiān)測方法：工藝監(jiān)測化學監(jiān)測（化學指示卡、指示膠帶）生物監(jiān)測2、常用滅菌器種類壓力蒸汽滅菌器環(huán)氧乙烷滅菌器3、生物指示物嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC7953）,壓力蒸汽滅菌器枯草桿菌黑色變種芽胞（ATCC9372）環(huán)氧乙烷滅菌器第25頁,共30頁，2024年2月25日，星期天7、壓力蒸汽滅菌器滅菌效果監(jiān)測

檢測方法

生物指示菌片布放方法（《消毒技術規(guī)范》）（1）將兩個嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片分別裝入滅菌小紙袋內，置于標準試驗包中心部位。（2）下排氣壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內，排氣口上方放置一個標準試驗包預真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內，排氣口上方放置一個標準試驗包手提壓力蒸汽滅菌器：通用貯物盒代替標準試驗包，貯物盒內盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩支滅菌試管內，貯物盒放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。第26頁,共30頁，2024年2月25日，星期天8、環(huán)氧乙烷滅菌