腫瘤發(fā)病學(xué)課件

*Pathogenesis,癌變機(jī)制Carcinogenesis一、前言●長(zhǎng)時(shí)間：數(shù)年、十幾年、幾十年●多因素:多種致癌因素●多基因:原癌基因、抑癌基因、凋亡調(diào)控基因…●多階段：GDMUBLGDMUBL*二、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)的發(fā)展●慢性炎癥學(xué)說(shuō)與胚胎殘余學(xué)說(shuō)（20世紀(jì)50年代）慢性炎癥學(xué)說(shuō)：子宮頸炎與子宮頸癌炎癥與腫瘤相關(guān)性文獻(xiàn)：CNKI42663篇截止2016/11/30

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及治療與炎癥的關(guān)系

Medline:74301篇GDMUBL*GDMUBL*●慢性炎癥學(xué)說(shuō)與胚胎殘余學(xué)說(shuō)（20世紀(jì)50年代）胚胎殘余學(xué)說(shuō)如：顱咽管瘤—顱咽管上皮組織，皮樣囊腫—外、中胚層異位組織，表皮樣囊腫—外胚層異位組織，畸胎瘤—三胚層，脊索瘤—?dú)埩舻募顾鹘M織。這些組織具有增殖分化的潛力，在一定的條件下發(fā)展為腫瘤

二、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)的發(fā)展GDMUBL*基因突變學(xué)說(shuō)與基因調(diào)控失常學(xué)說(shuō)正常細(xì)胞在致瘤因子作用下發(fā)生基因突變并異常增殖并遺傳下去證據(jù)腫瘤細(xì)胞染色體數(shù)量異常瘤細(xì)胞表型可以遺傳環(huán)境致癌物誘導(dǎo)基因突變DNA修復(fù)障礙者，腫瘤發(fā)病率高二、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)的發(fā)展GDMUBL*GDMUBL*二、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)的發(fā)展基因調(diào)控失常學(xué)說(shuō)基因未突變，表達(dá)調(diào)控異常而致瘤證據(jù)有些腫瘤染色體數(shù)目無(wú)異常腫瘤特異性抗原未被鑒定胚胎期基因的異?；钚阅[瘤細(xì)胞可被正常逆轉(zhuǎn)

惡性腫瘤的逆轉(zhuǎn)治療

將腫瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)為普通細(xì)胞的關(guān)鍵基因GDMUBL*二、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)的發(fā)展乳腺癌與HER2基因擴(kuò)增人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HumanEpidermalgrowthFactorReceptor2，Her2)為原癌基因，與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，對(duì)治療藥物的選擇至關(guān)重要(如赫賽酊,曲妥珠，Herceptin)。檢測(cè)方法：IHC：-,+，++，+++FISH：紅色/綠色信號(hào)1.8-2.2CISHRT-PCR

乳腺癌患者Her2基因FISH法檢測(cè)的臨床應(yīng)用研究GDMCBL*GDMUBL*癌基因(oncogene)學(xué)說(shuō)1911年Rous用雞肉瘤的無(wú)細(xì)胞濾液復(fù)制雞肉瘤病毒癌基因與細(xì)胞癌基因1969年Huebner與Todaro提出癌基因?qū)W說(shuō)三、癌基因?qū)W說(shuō)GDMUBL*原癌基因分類(lèi)及功能生長(zhǎng)因子家族:sis,int-2生長(zhǎng)因子受體家族:erbB,kit,ros,met…蛋白酪氨酸激酶家族:abl,src,yes...G蛋白家族:H-ras,K-ras,N-ras核蛋白轉(zhuǎn)錄因子家族:fos,jun,myc三、癌基因?qū)W說(shuō)GDMUBL*三、癌基因?qū)W說(shuō)原癌基因活化機(jī)制病毒癌基因啟動(dòng)子插入:SRC點(diǎn)突變:RAS,ErbB2基因擴(kuò)增:UBE2C,SIS,MYC,ErbB2染色體重排或易位:MYC,BCR/ABL原癌基因低甲基化與抑癌基因的高甲基化:RAS,RB,P16,APCGDMUBL*Burkitt’slymphoma

c-myc基因染色體轉(zhuǎn)位

GDMUBL*原癌基因活化機(jī)制相關(guān)腫瘤Ras點(diǎn)突變肺癌，結(jié)腸癌Myc易位Burkitt淋巴瘤、肺癌bcl-2易位B細(xì)胞淋巴瘤erb-B2擴(kuò)增乳腺癌、肺癌、胃癌Sis過(guò)度表達(dá)骨肉瘤GDMUBL*

四、抑癌基因的發(fā)現(xiàn)及作用機(jī)制抑癌基因Tumorsuppressorgene是一類(lèi)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)起負(fù)調(diào)節(jié)作用的基因主要作用是抑制細(xì)胞的過(guò)度增殖丟失、突變或過(guò)甲基化時(shí)細(xì)胞惡性生長(zhǎng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)HarrisH,etal.Suppressionofmalignancybycellfusion.Nature.1969Jul26;223(5204):363-8.“兩次突變假說(shuō)（twohithypothesis)”等位基因的雜合型丟失（lossofheterozygosity，LOH）GDMUBL*抑癌基因功能相關(guān)腫瘤Rb調(diào)節(jié)細(xì)胞周期RB、成骨肉瘤、胃癌p53轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌WT負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子WT、橫紋肌肉瘤、肺癌NF-1抑制RAS信號(hào)和p21

神經(jīng)纖維瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤p21CDK抑制因子前列腺癌GDMUBL*四、抑癌基因?qū)W說(shuō)Rb基因第一個(gè)被克隆的抑癌基因（1986）GDMUBL*四、抑癌基因?qū)W說(shuō)Rb基因與E2F結(jié)合而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期磷酸化/去磷酸化是其活性的調(diào)節(jié)機(jī)制（磷酸化后解除與E2F因子的結(jié)合）細(xì)胞周期G0、G1期，表現(xiàn)為去磷酸化，G2、S、M期則處于磷酸化狀態(tài)RB基因缺失、突變失活，或者與腫瘤病毒產(chǎn)物結(jié)合而失活，誘導(dǎo)細(xì)胞增殖GDMUBL*GDMUBL*p53基因1983年被克隆，1989年確定為抑癌基因17p13.1，全長(zhǎng)20kb，11外顯子，10內(nèi)含子，編碼53kDa核蛋白與DNA和蛋白質(zhì)結(jié)合，功能復(fù)雜（參與細(xì)胞周期，細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤進(jìn)展）具有突變熱點(diǎn)區(qū)域缺失與突變與50%~60%人類(lèi)腫瘤有關(guān)四、抑癌基因?qū)W說(shuō)GDMUBL*GDMUBL*GDMUBL*四、抑癌基因?qū)W說(shuō)p16基因BRCA基因nm23基因APC基因

……GDMUBL*五、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)-其他基因細(xì)胞周期調(diào)控基因Cyclins-CDKs-CDKIs

細(xì)胞周期調(diào)控與腫瘤

細(xì)胞周期與抗腫瘤治療展望

細(xì)胞周期標(biāo)記物在腫瘤中的應(yīng)用CyclinD鼻咽粘膜增生CyclinD鼻咽癌GDMUBL*五、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)-其他基因DNA修復(fù)基因易感腫瘤的遺傳性疾病與DNA修復(fù)基因異常有關(guān)Bloom綜合征（先天性毛細(xì)血管擴(kuò)張紅斑及發(fā)育異常）著色性干皮?。ɑ颊咴?0歲之前會(huì)在紫外線暴露部位發(fā)生腫瘤，其中皮膚基底細(xì)胞癌，鱗狀細(xì)胞癌及惡性黑素瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)比正常人高出1000倍）Fanconi貧血人類(lèi)DNA修復(fù)基因DNA修復(fù)基因與肝癌關(guān)系的研究進(jìn)展GDMUBL*五、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)-其他基因凋亡相關(guān)基因Bcl-2及Bcl-2家族:Bcl2/Bax比值變化P53C-mycICE及ICE家族BCL-2免疫組化染色GDMUBL*三氧化二砷誘導(dǎo)腫瘤凋亡As2O3作用PML基因治療M3中國(guó)工程院院士王振義和中國(guó)科學(xué)院院士陳竺將As2O3

（俗稱砒霜）與西藥結(jié)合起來(lái)用于治療白血病，使急性早幼粒細(xì)胞白血病患者的“五年無(wú)病生存率”從約25%躍升至約95%。這種聯(lián)合療法目前是全世界急性早幼粒細(xì)胞白血病的標(biāo)準(zhǔn)療法GDMUBL*五、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)-其他基因分化相關(guān)基因AMLM3PML-RARα融合蛋白

維甲酸誘導(dǎo)分化

誘導(dǎo)分化療法應(yīng)用的現(xiàn)狀

分化相關(guān)基因NDRG1與腫瘤GDMUBL*五、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)-其他基因端粒及端粒酶telomereandtelomerase

GDMUBL*端粒1、概念：真核細(xì)胞線性染色體末端的一組重復(fù)DNA序列，通常由富含鳥(niǎo)嘌呤核苷酸(G)的短的串聯(lián)重復(fù)序列組成。2、組成：

DNA：短的串聯(lián)重復(fù)序列，不含功能基因。蛋白質(zhì)：與單鏈富G端粒DNA結(jié)合的蛋白；與雙鏈端粒DNA結(jié)合的蛋白GDMCBL*GDMUBL*端粒酶1、概念：端粒酶是一種RNA與蛋白的復(fù)合體，它以自身RNA上的一個(gè)片段為模板通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄合成端粒重復(fù)序列，并通過(guò)一種RNA依賴性聚合酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）機(jī)制加到染色體3’末端以延伸端粒。2、組成：RNA（作為模板）蛋白質(zhì)（反轉(zhuǎn)錄酶）3、作用機(jī)制：在端粒DNA的復(fù)制時(shí)，端粒酶既有模板，又有逆轉(zhuǎn)錄酶這兩方面的作用。其與端粒3′端結(jié)合后，以其RNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)端粒，從而保護(hù)DNA雙鏈末段免遭降解及相互融合。GDMUBL*五、細(xì)胞癌變學(xué)說(shuō)-其他基因miRNA真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼RNA大小長(zhǎng)約20~25個(gè)核苷酸成熟的miRNAs是由較長(zhǎng)的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物經(jīng)過(guò)一系列核酸酶的剪切加工而產(chǎn)生的，隨后組裝進(jìn)RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式識(shí)別靶mRNA，并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯miRNA參與各種各樣的調(diào)節(jié)途徑GDMUBL*miRNA特點(diǎn)廣泛存在于真核生物中,是一組不編碼蛋白質(zhì)的短序列RNA,它本身不具有開(kāi)放閱讀框架(ORF);通常的長(zhǎng)度為18～25nt,但在3′端可以有1～2個(gè)堿基的長(zhǎng)度變化;成熟的miRNA5′端有一磷酸基團(tuán),3′端為羥基,這一特點(diǎn)使它與大多數(shù)寡核苷酸和功能RNA的降解片段區(qū)別開(kāi)來(lái)；多數(shù)miRNA還具有高度保守性、時(shí)序性和組織特異性。GDMUBL*miRNAs與癌癥約50%得到注解的miRNAs在基因組上定位于與腫瘤相關(guān)的脆性位點(diǎn)（fragilesite）。這說(shuō)明miRNAs在腫瘤發(fā)生過(guò)程中起至關(guān)重要的作用，這些miRNAs所起的作用類(lèi)似于抑癌基因和癌基因的功能，有研究人員將miRNA命名為“oncomirs”GDMUBL*充當(dāng)抑癌基因作用的miRNAmir-125b-1:位于染色體的11q24脆性位點(diǎn)，乳腺癌、肺癌、卵巢癌、子宮癌病人中11q924位點(diǎn)常有缺失，而這一位點(diǎn)并不存在已知的抑癌基因。miR-15a和miR-16-1:負(fù)調(diào)控BCL2，這兩個(gè)miRNAs的缺失或下調(diào)，導(dǎo)致了BCL2表達(dá)的升高，促進(jìn)了白血病、淋巴瘤和前列腺癌的發(fā)生。mir-143和mir-145:結(jié)腸癌中明顯下調(diào)。其發(fā)夾結(jié)構(gòu)的前體分子在腫瘤和正常組織中含量相似，這表明，可能是由于其成熟過(guò)程受到破壞。mir-143和mir-145的腫瘤抑制基因功能不僅僅局限于結(jié)腸癌，在乳腺癌、前列腺癌、子宮癌、淋巴癌等細(xì)胞系中其表達(dá)量也明顯下調(diào)

GDMUBL*肺癌病人的let-7表達(dá)顯著降低，并且這導(dǎo)致這些病人更差的預(yù)后，非小細(xì)胞肺癌病人的let-7表達(dá)水平越低，其預(yù)后越差，術(shù)后生存期越短。體外組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明，在人的肺癌細(xì)胞中瞬時(shí)的表達(dá)let-7可以抑制細(xì)胞的增殖，這也說(shuō)明let-7在肺組織中可能是一個(gè)抑癌基因。實(shí)驗(yàn)表明，在人類(lèi)細(xì)胞中l(wèi)et-7通過(guò)3’非翻譯區(qū)域直接抑制癌基因Ras的表達(dá)。大約有15-30%的人類(lèi)腫瘤都含有Ras突變，而激活的突變導(dǎo)致這個(gè)蛋白表達(dá)上升可以引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化。因此，能夠調(diào)節(jié)Ras蛋白表達(dá)的let-7，可以控制細(xì)胞的增殖速度。GDMUBL*充當(dāng)癌基因作用的miRNAmiR-21:膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中表達(dá)量比正常組織高5-100倍。反義核酸的研究發(fā)現(xiàn)這個(gè)miRNA通過(guò)抑制凋亡而并非影響細(xì)胞增殖控制細(xì)胞生長(zhǎng)，這預(yù)示著這個(gè)miRNA具有癌基因的功能。另一項(xiàng)獨(dú)立研究，利用芯片來(lái)檢測(cè)腫瘤和正常組織的245個(gè)miRNAs的表達(dá)水平，也發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中miR-21表達(dá)升高。由于mir-21不是一個(gè)大腦特異性的基因，在乳腺癌樣品中表達(dá)也有增加，這個(gè)基因可能在腫瘤發(fā)生中起到廣泛的作用。GDMUBL*Metzler等人發(fā)現(xiàn)，在BIC基因上具有一段138個(gè)核苷酸的保守序列，編碼mir-155的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。該研究組還發(fā)現(xiàn)在Burkitt淋巴瘤中，miR-155表達(dá)量上升了100倍，此外的研究也發(fā)現(xiàn)，Hodgkin淋巴瘤等腫瘤中miR-155水平也有提高。因此，mir-155可能是作為一個(gè)癌基因和MYC協(xié)同作用，而其正常功能是在B細(xì)胞的分化中起作用，其可能的靶基因是那些對(duì)抗MYC信號(hào)通路的基因。GDMUBL*miRNA鑒定及功能研究手段目前鑒定miRNA常用的方法包括直接克隆鑒定，miRNA芯片分析和生物信息學(xué)預(yù)測(cè)。計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)的miRNA必須經(jīng)過(guò)RT-PCR或Northern試驗(yàn)分析才能鑒定，另外也可以通過(guò)miRNAmimics和inhibitors從功能上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)鑒定。GDMUBL*miRNAmimics是模擬生物體內(nèi)源的miRNAs，運(yùn)用化學(xué)合成的方法合成，能增強(qiáng)內(nèi)源性miRNA的功能。而miRNAinhibitor是化學(xué)修飾的專門(mén)針對(duì)細(xì)胞中特異的靶miRNA的抑制劑。GDMCBL*MechanismofRNAi(shRNA/miRNA）GDMUBL*miRNA與腫瘤microRNA

腫瘤發(fā)生

miR-9

神經(jīng)母細(xì)胞瘤miR-10b乳腺癌miR-15、miR-15a白血病、垂體腺瘤

miR-16、miR-16-1

白血病、垂體腺瘤

miR-17-5p、miR-17-92肺癌、淋巴瘤miR-20a肺癌、淋巴瘤miR-21乳腺癌、膽管腺癌、頭頸癌、白血病、宮頸癌miR-29、miR-29b白血病，膽管腺癌miR-31結(jié)腸直腸癌miR-34a胰腺癌

miR-96結(jié)腸直腸癌miR-98頭頸癌

miR-103胰腺癌miR-107

白血病、胰腺癌

miR-125a、miR-125b神經(jīng)母細(xì)胞瘤、乳腺癌miR-128膠質(zhì)母細(xì)胞瘤miR-133b結(jié)腸直腸癌miR-135b結(jié)腸直腸癌GDMUBL*miR-143結(jié)腸癌、宮頸癌miR-145乳腺癌、結(jié)腸直腸癌miR-146甲狀腺癌miR-155乳腺癌、白血病、胰腺癌miR-181、miR-181a、miR-181b、miR-181c肺癌、白血病、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、甲狀腺癌

miR-183直腸結(jié)腸癌miR-184

神經(jīng)母細(xì)胞瘤miR-196a-2

胰腺癌miR-221膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、甲狀腺癌、胰腺癌

miR-222甲狀腺癌miR-223

白血病miR-301胰腺癌miR-376

胰腺癌let-7、let-7a、let-7a-1、hsa-let-7a-2、let-7a-3肺癌、結(jié)腸癌*MaturemiRNA的檢測(cè)利用PAP（PolyAPolymerase）加尾法通用性高；適用于同一樣本檢測(cè)多種miRNA經(jīng)濟(jì)、方便GDMCBL*miRNAPrimerArray個(gè)性化PrimerArray提供的六種排布形式，如上所示（不同顏色代表檢測(cè)樣品，同色中的各孔代表檢測(cè)的各個(gè)基因）：A.每96-well-Plate可進(jìn)行8基因、12個(gè)樣品的檢測(cè)；B.每96-well-plate可進(jìn)行16基因、6樣品檢測(cè)；C.每96-well-Plate可進(jìn)行24基因、4樣品檢測(cè)；D.每96-well-Plate可進(jìn)行32基因、3樣品檢測(cè)；E.每96-well-Plate可進(jìn)行48基因、2樣品檢測(cè)；F.每96-well-Plate可進(jìn)行96基因、單樣品檢測(cè)。GDMUBL*miRNATarget的分析

研究發(fā)現(xiàn)，在哺乳動(dòng)物中，miRNAs的基因抑制作用是通過(guò)其5’一段長(zhǎng)為6－8nt的核苷酸與mRNAs3’端非翻譯區(qū)域相結(jié)合實(shí)現(xiàn)的。一般這段核苷酸位于miRNA序列5’的2~8個(gè)nt，被稱為seed區(qū)。GDMUBL*有關(guān)miRNA文獻(xiàn)/pubmed應(yīng)用微陣列芯片分析人不同分化鼻咽癌細(xì)胞株miRNA的表達(dá).在線工具：MiRanda、TargetScan、PicTar、DIANA-microT軟件/GDMUBL*六、癌變過(guò)程的多階段性與多步多擊性癌變過(guò)程的啟動(dòng)、促進(jìn)與進(jìn)展啟動(dòng):致癌物引起染色體基因突變或基因外DNA突變促進(jìn):閾下劑量致癌劑刺激后促癌劑再多次刺激誘導(dǎo)癌變進(jìn)展:轉(zhuǎn)化細(xì)胞成瘤并出現(xiàn)異質(zhì)性GDMUBL*實(shí)驗(yàn) 處理方法 癌腫iiiiiiiiiiiiii+(3/102iooooooooo -opppppppp -(1/106)ippppp+(36/83)ppppi -I：9,10—二甲—1,2苯并蒽(DMBA)P：巴豆油1942Berenblun實(shí)驗(yàn)GDMUBL*致癌物與促癌物的協(xié)同作用致癌的二階段學(xué)說(shuō)致癌物激發(fā)過(guò)程促癌物促進(jìn)過(guò)程GDMUBL*七、癌變的發(fā)生是個(gè)多階段的過(guò)程正常上皮

過(guò)度增生

早期腺瘤

中期腺瘤

晚期腺瘤

結(jié)腸腺癌GDMUBL*癌變多階段的分子基礎(chǔ)體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中癌基因協(xié)同效應(yīng)（invitro）Land實(shí)驗(yàn)表明，在絕大多數(shù)情況下單個(gè)癌基因并不足以引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化

H-Ras轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞后可使其發(fā)生停泊非依賴性生長(zhǎng)而在軟瓊脂中產(chǎn)生集落，但在連續(xù)傳代時(shí)細(xì)胞死亡，也不能在裸鼠體內(nèi)產(chǎn)生腫瘤。把兩個(gè)癌基因(如H-Ras與活化的Myc)一起導(dǎo)入成纖維細(xì)胞就能使其發(fā)生有效轉(zhuǎn)化。Land據(jù)此認(rèn)為H-Ras基因產(chǎn)物使細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變并降低對(duì)血清需求而導(dǎo)致其出現(xiàn)停泊非依賴性生長(zhǎng)，而Myc基因產(chǎn)物則使細(xì)胞永生化。GDMUBL*癌變多階段的分子基礎(chǔ)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型提供了癌基因協(xié)同效應(yīng)的體內(nèi)證據(jù)（invivo）1987年Sinn等利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型成功地證實(shí)了癌基因在體內(nèi)的協(xié)同效應(yīng)以小鼠乳腺腫瘤病毒MMTV作為調(diào)控序列，構(gòu)建MMTV-c-Myc轉(zhuǎn)基因，所產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因小鼠在3～4個(gè)月時(shí)發(fā)生乳腺腫瘤，而且腫瘤呈散發(fā)性分布，局灶性成長(zhǎng)而構(gòu)建的MMTV-Ras轉(zhuǎn)基因所形成的轉(zhuǎn)基因鼠發(fā)瘤時(shí)間較MMTV-c-Myc早；當(dāng)上述兩種轉(zhuǎn)基因鼠交配所獲的F1代小鼠，其發(fā)生乳腺腫瘤的速率大大高于單一攜帶Myc或Ras的轉(zhuǎn)基因鼠。GDMUBL*八、癌基因?qū)W說(shuō)在腫瘤防治中的意義腫瘤的基因診斷從基因的角度對(duì)疾病作出診斷,又稱DNA診斷基因診斷的利用例子：地中海貧血乳腺癌HER2FISHtest淋巴瘤染色體異位檢測(cè)IGH/BCL2t(14;18)(q32;q21)

染色體易位IGH/MYCt(8;14)(q24;q32)

染色體易位IGH/CCND1t(11;14)(q13;

q32)

染色體易位API2/MALT1t(11;18)(q21;q21)染色體易位IGH/MALT1t(14;18)(q32;q21)染色體易位BCR/ABLt(9;22)染色體易位【費(fèi)城染色體】GDMUBL*基因診斷的內(nèi)容明確特定基因是否正常明確疾病相關(guān)基因的異常情況基因擴(kuò)增情況基因酶切位點(diǎn)情況基因連鎖分析基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物分析GDMUBL*基因診斷基因診斷的方法DNA重組技術(shù)細(xì)胞成分示蹤技術(shù)mRNA與蛋白的檢測(cè)基因診斷流程GDMUBL*腫瘤基因診斷例子GDMUBL*Her2基因檢測(cè)流程石蠟組織標(biāo)本IHC檢測(cè)再用FISH方法檢測(cè)—1+3+2+—+Herceptin治療+再用FISH方法檢測(cè)Herceptin治療FISH檢測(cè)+—再用FISH方法檢測(cè)+GDMUBL*疾病名稱檢測(cè)探針標(biāo)記顏色探針定位探針名稱乳腺癌GLPHer2/CSP17紅/綠Her2：17q11.2-q12CSP17:17p11.1q11.1CSP17:17號(hào)染色體著絲粒正常:2紅/2綠異常:紅信號(hào)大于2為異常細(xì)胞(綠色信號(hào)不少于2個(gè)的細(xì)胞)Her-2基因FISH

探針組GDMUBL*DAPI染色后與HE切片對(duì)比圖觀察浸潤(rùn)部分導(dǎo)管內(nèi)癌GDMUBL*結(jié)果判斷統(tǒng)計(jì)Ratio值（計(jì)數(shù)浸潤(rùn)性部分的20個(gè)細(xì)胞）

Ratio值＝20個(gè)細(xì)胞核中紅信號(hào)總數(shù)/綠信號(hào)總數(shù)

Ratio＜1.8為陰性結(jié)果

Ratio＞2.2或眾多信號(hào)連接成簇時(shí)可不計(jì)算為陽(yáng)性結(jié)果比值2～4為低度擴(kuò)增

4～10為中度擴(kuò)增

>10為高度擴(kuò)增Ratio在1.8-2.2之間時(shí)，則需要再計(jì)數(shù)20個(gè)細(xì)胞核中的信號(hào)。如仍為臨界值，則應(yīng)在FISH檢測(cè)報(bào)告中注明。GDMUBL*A.無(wú)須計(jì)數(shù)的大簇團(tuán)信號(hào)（高度擴(kuò)增）B.

顆粒狀信號(hào)（R>10，高度擴(kuò)增）C.

須計(jì)數(shù)的顆粒狀信號(hào)（R=3.5，低度擴(kuò)增）ACBHer-2基因擴(kuò)增狀況GDMCBL*Her-2基因無(wú)擴(kuò)增情況紅信號(hào)數(shù)>2，同時(shí)綠信號(hào)非整倍體R<1.8，無(wú)擴(kuò)增紅信號(hào)與綠信號(hào)均為兩點(diǎn)，R=1GDMUBL*熒光原位雜交與免疫組化檢測(cè)Her-2結(jié)果比較GDMUBL*IHC01+2+3+FISH無(wú)擴(kuò)增

1334020擴(kuò)增

22102943總數(shù)(n=15)(n=5)(n=14)(n=29)（n=63）Her2表達(dá)IHC（2+）標(biāo)本中，基因擴(kuò)增率為71.41%Her2表達(dá)IHC（3+）標(biāo)本中，基因擴(kuò)增率為100%（文獻(xiàn)報(bào)道：90-95%）GDMUBL*>30%的腫瘤細(xì)胞全部的細(xì)胞膜高強(qiáng)度著色免疫組化（3+）與FISH對(duì)比圖×40×100浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅱ級(jí)IHC：+++FISH：呈簇團(tuán)狀高度擴(kuò)增×100GDMUBL*免疫組化（2+）與FISH對(duì)比圖1.>30%的腫瘤細(xì)胞全部的細(xì)胞膜弱至中等著色×40浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅱ級(jí)IHC：++FISH：Ratio>5，中度擴(kuò)增×100GDMUBL*免疫組化（2+）與FISH對(duì)比圖2.>30%的腫瘤細(xì)胞全部的細(xì)胞膜弱至中等著色×40×100浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅱ級(jí)IHC：++FISH：Ratio＝1.45，無(wú)擴(kuò)增GDMUBL*>30%的腫瘤細(xì)胞弱的著色免疫組化（1+）與FISH對(duì)比圖1×40×100浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅱ級(jí)IHC：+FISH：Ratio＝1.62，無(wú)擴(kuò)增GDMUBL*免疫組化（1+）與FISH對(duì)比圖2×40×100浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅲ級(jí)IHC：+FISH：簇狀擴(kuò)增>30%的腫瘤細(xì)胞弱的著色GDMUBL*免疫組化（－）與FISH對(duì)比圖1×100×40浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅱ級(jí)IHC：－FISH：Ratio＝1.02，Her2基因無(wú)擴(kuò)增<30%的腫瘤細(xì)胞弱的著色或不著色GDMUBL*免疫組化（－）與FISH對(duì)比圖2浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅱ級(jí)IHC：－FISH：呈簇狀擴(kuò)增腫瘤細(xì)胞不著色×40×100GDMUBL*FISH技術(shù)檢測(cè)染色體易位在淋巴瘤分型中的應(yīng)用GDMUBL*淋巴瘤的診斷與分型難HE＋I(xiàn)HC+cytogenesis=解決!GDMUBL*

不同類(lèi)型的淋巴瘤有各自不同的染色體易位使控制細(xì)胞發(fā)育分化過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白失活與淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)GDMUBL*IGH/BCL2t(14;18)(q32;q21)

染色體易位IGH/MYCt(8;14)(q24;q32)

染色體易位IGH/CCND1t(11;14)(q13;

q32)

染色體易位API2/MALT1t(11;18)(q21;q21)染色體易位IGH/MALT1t(14;18)(q32;q21)染色體易位BCR/ABLt(9;22)染色體易位【費(fèi)城染色體】目前開(kāi)展的染色體易位檢測(cè)（6種）：GDMUBL*

t(14;18)(q32;q21)

染色體易位意義：

t(14;18)易位后形成的IGH/BCL2基因能編碼完整BCL2

蛋白，IGH基因附近的增強(qiáng)子使BCL2過(guò)表達(dá)

t(14;18)為FL的標(biāo)志（低級(jí)別更易出現(xiàn)）,檢出率達(dá)93%～100%DLBCL20%～30%出現(xiàn)易位影響檢出率的原因：

石蠟標(biāo)本中DNA的降解

FL3b接近DLBCL，其易位率低，影響總體檢出率53CregionVregionJregion14q32region3MCRMBR18q21regionIGH/BCL2DualColor,DualFusionTranslocationProbe

GDMUBL*探針雜交示意圖腫瘤細(xì)胞核IGH/BCL2雙色雙融合易位探針雜交后顯示1O1G2F信號(hào)細(xì)胞核IGH/BCL2雙色雙融合易位探針雜交后顯示2R2G信號(hào)檢測(cè)探針標(biāo)記顏色探針定位

IGH

/BCL2green/orange

IGH:

14q32

BCL2:

18q21

正常:2O/2G

異常:1O/1G/1F陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn):>7%的細(xì)胞出現(xiàn)黃色融合信號(hào)GDMUBL*病例1：男，74y

腹腔腫物；FISH：54%的細(xì)胞可見(jiàn)融合信號(hào)；

診斷：FLⅡ~Ⅲ。4×40×100×GDMUBL*病例2：女、36

頸部腫物抗炎治療后（出現(xiàn)變性壞死）診斷：DLBCLFISH：陽(yáng)性，10%的細(xì)胞可見(jiàn)融合信號(hào)

40×IHC:BCL2100×GDMUBL*腫瘤的基因治療基因治療概念將遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入機(jī)體細(xì)胞，達(dá)到治療（預(yù)防）疾病的目的美國(guó)已經(jīng)批準(zhǔn)613項(xiàng)試驗(yàn)性基因治療，歐洲批準(zhǔn)了213項(xiàng)，我國(guó)也批準(zhǔn)了3項(xiàng)，包括腫瘤和血友病。全世界有超過(guò)4000名患者參與了實(shí)驗(yàn)性基因治療。

基因治療方式基因原位修復(fù)基因增補(bǔ)GDMUBL*

基因治療基因增補(bǔ)療法需要考慮的因素靶點(diǎn)選擇目的基因?qū)氲耐緩脚c方法（invivoandexvivo)病毒介導(dǎo)法化學(xué)介導(dǎo)法物理介導(dǎo)法GDMUBL*基因治療腫瘤基因治療策略直接應(yīng)用抗癌基因治療抑癌基因如p53重組人p53腺病毒注射液（商品名今又生）。

2003年10月16日，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)重組人p53腺病毒注射液新藥證書(shū)，意味著世界上第一個(gè)癌癥基因治療藥物在中國(guó)誕生反義核酸或核酶“自殺基因”：HSV-TK增強(qiáng)腫瘤免疫原性：B7，MHC增強(qiáng)抗癌細(xì)胞免疫因子：ILs，TNF逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥：多藥耐藥基因（MDR）GDMUBL*基因治療腫瘤基因治療存在的問(wèn)題基因治療的安全性基因?qū)胄始罢{(diào)控表達(dá)水平基因治療載體系統(tǒng)精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)Precisionmedicine概念是應(yīng)用現(xiàn)代遺傳技術(shù)、分子影像技術(shù)、生物信息技術(shù)，結(jié)合患者生活環(huán)境和臨床數(shù)據(jù)，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的疾病分類(lèi)及診斷，制定具有個(gè)性化的疾病預(yù)防和治療方案意義提高疾病診治水平，惠及民生與國(guó)民健康;推動(dòng)醫(yī)學(xué)科技前沿發(fā)展，增強(qiáng)國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力;發(fā)展醫(yī)藥生物技術(shù)，促進(jìn)醫(yī)療體制改革;形成經(jīng)濟(jì)新增長(zhǎng)點(diǎn)，帶動(dòng)大健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展。GDMUBL*Precisionmedicine美國(guó)版PM提出2011年美國(guó)國(guó)家科學(xué)院（NAS）、美國(guó)國(guó)家工程院（NAE）、美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院（NIH）及美國(guó)國(guó)家科學(xué)委員會(huì)（NSB）共同發(fā)出邁向精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的倡議2015年1月20日美國(guó)總統(tǒng)奧巴馬在國(guó)情咨文演講中提出了“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)計(jì)劃”（PMI），呼吁美國(guó)要增加醫(yī)學(xué)研究經(jīng)費(fèi)，推動(dòng)個(gè)體化基因組學(xué)研究2015年1月30日奧巴馬總統(tǒng)正式批準(zhǔn)PMI，提議國(guó)會(huì)在2016年財(cái)年向該計(jì)劃投入2.15億美元，以推動(dòng)個(gè)性化醫(yī)療的發(fā)展同時(shí)，F(xiàn)DA計(jì)劃建立一個(gè)精準(zhǔn)A平臺(tái)，為研究人員、新一代測(cè)序技術(shù)開(kāi)發(fā)者提供存放和共享基因信息的云工具PM的關(guān)鍵詞是遺傳學(xué)信息與診斷和治療GDMUBL*Precisionmedicine中國(guó)版PM的提出國(guó)家973計(jì)劃首席科學(xué)家、中國(guó)科學(xué)院副院長(zhǎng)、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)副