溶血對生化檢驗結(jié)果的影響

關(guān)于溶血對生化檢驗結(jié)果的影響一、溶血的定義溶血是紅細胞破壞,紅細胞的一些組分釋放進入血清或血漿，導致實驗樣品出現(xiàn)特有的紅色增加。很多因素都可以使紅細胞破壞，發(fā)生溶血，從而干擾監(jiān)測，使檢驗結(jié)果失去真實性和準確性，影響疾病的診斷和治療。第2頁,共29頁，2024年2月25日，星期天溶血是臨床生化檢驗中最常見的一種干擾和影響因素。溶血后顯著增高的有AST、ALT、LDH、K+、TBIL、TP、ALB等；溶血后顯著降低的項目有GLU、CR等。第3頁,共29頁，2024年2月25日，星期天（一）溶血對肝功能測定的影響1.天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）溶血造成AST升高可能是由以下兩個方面的原因引起(1)人類紅細胞中AST活性約為血清中的40倍，當標本溶血時紅細胞破裂后釋放AST，勢必引起血清AST活性的升高從而使溶血標本的結(jié)果明顯高于未溶血標本。(2)溶血后血清顏色加深，致使測得的吸光度值增高。第4頁,共29頁，2024年2月25日，星期天2、谷氨酸-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）紅細胞中ALT活性約是血清中7～15倍。嚴重溶血（Hb約6.5g/L）時，可使血清ALT由20U/L增高到26.5U/L（增加約27%）。因此溶血后ALT含量測定的增高主要來源于細胞內(nèi)ALT的大量釋放?？梢娕cAST相比，ALT受溶血影響輕些。第5頁,共29頁，2024年2月25日，星期天3、乳酸脫氫酶（LDH）

紅細胞和血小板中含有豐富的LDH，紅細胞中LDH的含量是血清的160～200倍，故受溶血影響最大。在測定環(huán)節(jié)上都有可能發(fā)生不同程度的血小板破壞，而影響LDH測定，使其測定結(jié)果偏高。第6頁,共29頁，2024年2月25日，星期天4、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）由于紅細胞內(nèi)GGT含量很低，輕微溶血對其測定結(jié)果影響不大，但重度溶血則有影響第7頁,共29頁，2024年2月25日，星期天5、總蛋白（TP）

總蛋白的測定通常選用雙縮脲法，主波長540nm,而血紅蛋白在555nm有吸收峰，試驗表明如果溶血標本中［Hb］≤0.5g／L時無干擾；而高［Hb］，會使結(jié)果偏高，可以做樣品空白來消除影響。第8頁,共29頁，2024年2月25日，星期天6、總膽紅素（TBIL）重氮法測定TBIL，最后生成紅紫色的偶氮膽紅素，主要在波長為540nm～560nm處有光吸收。而Hb在波長540nm～550nm處有光吸收，恰與偶氮膽紅素的比色波長相近。因此溶血后細胞破裂時大量Hb進入血清,勢必造成TBIL測定值的升高,是TBIL測定的正向干擾因素。第9頁,共29頁，2024年2月25日，星期天此外，由于Hb重氮試劑反應形成的產(chǎn)物可破壞偶氮膽紅素，溶血對重氮法測定膽紅素同時存在負向干擾，使測定結(jié)果偏低，但該作用較輕微，因此溶血后由于Hb對測定結(jié)果的干擾，TBIL的測定結(jié)果往往偏高。第10頁,共29頁，2024年2月25日，星期天（二）溶血對血脂測定的影響1、總膽固醇（TC）

試驗表明如果溶血標本中［Hb］≤1.5g／L無干擾；而高濃度時因Hb的固有顏色干擾，會使結(jié)果偏高。第11頁,共29頁，2024年2月25日，星期天2、甘油三酯（TG）

除去上述如總膽固醇影響因素外，目前所用甘油磷酸氧化酶—過氧化物酶法和乙酰丙醇顯色法都以測量甘油為基礎，而紅細胞膜磷脂可被磷脂酶作用，產(chǎn)生游離甘油，所以溶血后測定結(jié)果偏高。第12頁,共29頁，2024年2月25日，星期天3、載脂蛋白A(APOA)及載脂蛋(APOB)

免疫透射比濁法使用最廣泛，以抗原抗體為基礎，血紅蛋白可使測定結(jié)果升高，故標本溶血后測定結(jié)果偏高。第13頁,共29頁，2024年2月25日，星期天（三）溶血對腎功能測定的影響1、尿素（UREA)無論是二乙?！糠ㄟ€是脲酶法，溶血均可導致光譜藍色部分吸光度值升高對結(jié)果都有干擾，導致結(jié)果偏高。第14頁,共29頁，2024年2月25日，星期天2、尿酸(UA)

試驗表明如果溶血標本中［Hb］>1g／L會干擾；是因為測定波長546mm時因Hb固有顏色潛在影響使測定結(jié)果偏高(比色法)。

第15頁,共29頁，2024年2月25日，星期天3、肌酐（Cre）

苦味酸法測定Cre的特異性較差，易受其它還原性物質(zhì)影響，主要是維生素C、酮體、丙酮酸等假肌酐干擾。假肌酐物質(zhì)亦可與苦味酸形成顏色反應，導致測定值發(fā)生偏差。這種假肌酐物質(zhì)紅細胞中最多，血清中較少，故溶血后紅細胞中假肌酐物質(zhì)的釋放是造成測定值發(fā)生偏差的主要原因。第16頁,共29頁，2024年2月25日，星期天溶血釋放出的物質(zhì)導致Jaffe反應而致測定結(jié)果的升高。Jaffe反應指血漿中的肌酐與堿性苦味酸鹽反應，生成黃紅色的苦味酸肌酐復合物的反應。第17頁,共29頁，2024年2月25日，星期天（四）溶血對電解質(zhì)測定的影響1、鉀（K+）

細胞內(nèi)液的主要陽離子，約98％的鉀存于細胞內(nèi)，紅細胞內(nèi)鉀濃度約為105mmol/L，而血清中僅有3.5

mmol/L～5.4

mmol/L，紅細胞中鉀的含量比血清中高23倍。因此溶血造成血清鉀明顯升高，增高主要來源于紅細胞內(nèi)鉀的大量釋放。第18頁,共29頁，2024年2月25日，星期天有報道表明血清游離血紅蛋白在2.5～2.8g/L時血清鉀增高14%～16%，血清游離血紅蛋白達6.6g/L時血清鉀增高可達41%，所以應在樣品采集后1h內(nèi)應將紅細胞與血清分離。并且在分析血清鉀的結(jié)果時應引起高度注意。第19頁,共29頁，2024年2月25日，星期天2、氯（CL-）血漿中氯約為103mmol/L，紅細胞中氯約為49~54mmol/L。溶血會導致細胞內(nèi)的氯離子轉(zhuǎn)移到血清中，從而引起了血清氯離子測定值的升高第20頁,共29頁，2024年2月25日，星期天3、磷（P）

實驗表明如果溶血標本中［Hb］≤1g/L影響很小，而在［Hb］等于2.8g／L時影響較大，所以應在采血后30min內(nèi)分離血細胞，否則會因磷酸酯從RBC中釋放而會使結(jié)果偏高。第21頁,共29頁，2024年2月25日，星期天（五）溶血對葡萄糖測定的影響葡萄糖(GLU)

葡萄糖氧化酶法測定GLU的特異性較強，干擾物較少，但過氧化氫酶易受到其它物質(zhì)的影響，如維生素C、谷胱苷肽均因能競爭H2O2而導致負偏差，樣品中某些強的酶會促使GLU降解而導致測定值明顯下降的。如果在血清或血漿加入NaF、KF作為酵解抑制劑樣品收集后立即去蛋白時，溶血樣品也可以用。第22頁,共29頁，2024年2月25日，星期天（六）溶血對心肌酶譜測定的影響由于LDH、HBDH在紅細胞內(nèi)的含量皆明顯高于胞外，故溶血后結(jié)果都升高，雖然紅細胞中不含CK，但含有大量的腺苷酸激酶(AK)，可干擾測定CK的偶聯(lián)法的反應體系，人為地引起CK結(jié)果的升高。第23頁,共29頁，2024年2月25日，星期天三、標本溶血的原因1、環(huán)境溫度變化，氣溫較低時血清不易分離，標本需經(jīng)多次離心，離心后容易出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。2、標本運送過程中導致碰撞，從而使離心后也會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。3、采血量不足，相對低滲抗凝導致溶血。第24頁,共29頁，2024年2月25日，星期天4、特殊人群如肥胖者、小孩等血管不易找到或太細導致抽血時多次操作或壓迫時間過長也會引起溶血現(xiàn)象。5、針頭過細或抽血速度過快，負壓太大，紅細胞通過針尖時破壞而溶血。第25頁,共29頁，2024年2月25日，星期天四、溶血標本的處理1、主動與臨床聯(lián)系，結(jié)合臨床首先排除體內(nèi)溶血的可能，若不是體內(nèi)溶血，建議重新采取標本，否則應在檢驗報告單上注明“標本溶血”，以提醒臨床醫(yī)生注意.2、利用溶血指數(shù)變化值，根據(jù)各項目的回歸方程，對易受溶血影響的AST、CK、CK-MB、LDH,

K+

的測定結(jié)果進行部分糾正，尤其對輕中度溶血效果較好，但對重度溶血標本則應重新復查。第26頁,共29頁，2024年2月25日，星期天3、從方法學上克服或減少溶血的干擾，如通過設置樣品空白或改用雙波長比色、導數(shù)分光光度法和動力學方法，對參與分析法化學反應的溶血