JJF 2056-2023 阻抗法全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范

中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)范JJF2056—2023阻抗法全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范CalibrationSpecificationforAutomaticMicrobialDetectionSystemsbasedonImpedanceMethod2023-06-30發(fā)布2023-12-30實(shí)施國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布JJF2056—2023一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一阻抗法全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范CalibrationSpecificationfor一一一一一一一一一一一一一JJF2056—2023歸口單位:全國(guó)生物計(jì)量技術(shù)委員會(huì)主要起草單位:中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院參加起草單位:湖南省計(jì)量檢測(cè)研究院重慶市計(jì)量檢測(cè)研究院本規(guī)范委托全國(guó)生物計(jì)量技術(shù)委員會(huì)負(fù)責(zé)解釋JJF2056—2023本規(guī)范主要起草人:張玲(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院)隋志偉(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院)劉思淵(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院)參加起草人:胡楚征(湖南省計(jì)量檢測(cè)研究院)彭建春(重慶市計(jì)量檢測(cè)研究院)JJF2056—2023Ⅰ引言 (Ⅱ)1范圍 (1)2引用文件 (1)3概述 (1)4計(jì)量特性 (1)5校準(zhǔn)條件 (2)5.1環(huán)境條件 (2)5.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和校準(zhǔn)設(shè)備 (2)6校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法 (2)6.1溫度示值誤差、溫度波動(dòng)度和溫度均勻度 (2)6.2線性相關(guān)系數(shù) (3)6.3檢出限 (3)6.4重復(fù)性 (3)7校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá) (4)8復(fù)校時(shí)間間隔 (4)附錄A培養(yǎng)基和試劑 (5)附錄B校準(zhǔn)證書(shū)內(nèi)頁(yè)格式 (7)附錄C校準(zhǔn)原始記錄格式 (8)附錄D溫度示值誤差校準(zhǔn)結(jié)果不確定度評(píng)定示例 (10)JJF2056—2023ⅡJJF1071《國(guó)家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫(xiě)規(guī)則》、JJF1001《通用計(jì)量術(shù)語(yǔ)及定義》和JJF1059.1《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》共同構(gòu)成支撐本規(guī)范制定工作的基礎(chǔ)性系列規(guī)范。校準(zhǔn)方法及計(jì)量特性等主要參考了JJF1101—2019《環(huán)境試驗(yàn)設(shè)備溫度、濕度參數(shù)校準(zhǔn)規(guī)范》、GB4789.38—2012《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)》,GB/T26428—2010《飼用微生物制劑中枯草芽孢桿菌的檢測(cè)》,國(guó)外食品檢本規(guī)范為首次發(fā)布。JJF2056—20231阻抗法全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范1范圍校準(zhǔn)。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:JJF1101—2019環(huán)境試驗(yàn)設(shè)備溫度、濕度參數(shù)校準(zhǔn)規(guī)范凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3概述阻抗法全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)檢測(cè)系統(tǒng))是通過(guò)測(cè)量微生物代謝引起的培養(yǎng)基電特性的變化來(lái)測(cè)定樣品中微生物含量的儀器。在培養(yǎng)過(guò)程中,微生物的新陳代謝作用可使培養(yǎng)基中電惰性的大分子底物,如碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝為電活性的小分子產(chǎn)物,使培養(yǎng)基導(dǎo)電性增強(qiáng)。檢測(cè)系統(tǒng)由溫控系統(tǒng)和電子分析器組成。接種了樣品的生長(zhǎng)培養(yǎng)基置于一個(gè)裝有一對(duì)不銹鋼電極的樣品管內(nèi),樣品管在裝配溫控系統(tǒng)和電子分析器的恒溫培養(yǎng)艙中培養(yǎng),檢測(cè)系統(tǒng)每過(guò)一定時(shí)間記錄每個(gè)樣品阻抗的變化,比照內(nèi)部設(shè)定的陽(yáng)性檢出閾值,記錄檢測(cè)為陽(yáng)性的時(shí)間。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的微生物濃度和檢出時(shí)間繪制檢測(cè)系統(tǒng)內(nèi)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線,比對(duì)校準(zhǔn)曲線計(jì)算實(shí)測(cè)樣品的微生物含量。4計(jì)量特性檢測(cè)系統(tǒng)的校準(zhǔn)項(xiàng)目及技術(shù)指標(biāo)見(jiàn)表1。表1檢測(cè)系統(tǒng)校準(zhǔn)項(xiàng)目及指標(biāo)校準(zhǔn)項(xiàng)目計(jì)量特性指標(biāo)溫度示值誤差±1℃溫度波動(dòng)度±1℃溫度均勻度≤2.0℃檢出限≤10CFU/mL線性相關(guān)系數(shù)R2≥0.98重復(fù)性≤10%注:以上技術(shù)指標(biāo)不用于合格性判別,僅供參考。JJF2056—20232ΔTdΔTd=Td-To(1)ΔTf=±m(xù)ax[(Tjmax-Tjmin)/2](2)5校準(zhǔn)條件5.1環(huán)境條件實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)當(dāng)滿足生產(chǎn)廠家的安裝要求:a)環(huán)境溫度(15~30)℃;b)相對(duì)濕度≤90%。5.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和校準(zhǔn)設(shè)備5.2.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)大腸埃希氏菌菌落計(jì)數(shù)國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或枯草芽孢桿菌菌落計(jì)數(shù)國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。5.2.2化學(xué)試劑無(wú)菌生理鹽水(0.85%NaCl)或無(wú)菌磷酸鹽緩沖液pH(7.2~7.4),見(jiàn)附錄A中A.1~A.2。EC肉湯(E.colibroth)大腸埃希氏菌液體培養(yǎng)基或NB營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(Nutritionbroth),見(jiàn)附錄A中A.3~A.4。5.2.3校準(zhǔn)設(shè)備無(wú)菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度);或移液器(量程1mL)及適配的無(wú)菌吸頭。溫度校準(zhǔn)裝置,溫度測(cè)量范圍滿足(20~50)℃,最大允許誤差為±0.1℃。校準(zhǔn)設(shè)備需經(jīng)過(guò)計(jì)量檢定或校準(zhǔn)。6校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法在溫度計(jì)量特性校準(zhǔn)過(guò)程中,應(yīng)根據(jù)檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)組成,將溫度校準(zhǔn)裝置探頭置于檢測(cè)系統(tǒng)內(nèi)架放置樣品管的位置,選取具有代表性的位置孔(如檢測(cè)系統(tǒng)是單層內(nèi)架的,則選取中心孔和四周至少5個(gè)孔位;如檢測(cè)系統(tǒng)的同一箱體內(nèi)存在多層內(nèi)架,則選取中心孔及四周至少9個(gè)孔位)分別進(jìn)行校準(zhǔn)。6.1溫度示值誤差、溫度波動(dòng)度和溫度均勻度將周?chē)h(huán)境溫度控制在檢測(cè)系統(tǒng)的說(shuō)明書(shū)允許范圍內(nèi),開(kāi)機(jī)預(yù)熱,設(shè)定并達(dá)到目標(biāo)溫度,檢測(cè)系統(tǒng)在穩(wěn)定狀態(tài)下,所有測(cè)試孔的溫度每2min記錄一次,在30min內(nèi)共測(cè)量16次,計(jì)算溫度顯示值與中心位置孔(檢測(cè)系統(tǒng)內(nèi)架放置樣品管的幾何中心位置孔或接近幾何中心最近的位置孔)16次測(cè)量結(jié)果的平均值之差為溫度示值誤差的測(cè)量結(jié)果,按照公式(1)進(jìn)行計(jì)算;校準(zhǔn)裝置各測(cè)量孔在30min內(nèi)(每2min測(cè)試一次)實(shí)測(cè)最高溫度與最低溫度之差的一半,冠以“±”號(hào),取全部測(cè)量點(diǎn)中變化量的最大值作為溫度波動(dòng)度的測(cè)量結(jié)果,按照公式(2)計(jì)算;在30min內(nèi)全部測(cè)量點(diǎn)的每次測(cè)試中實(shí)測(cè)最高溫度與最低溫度之差的算術(shù)平均值作為溫度均勻度的測(cè)量結(jié)果,按照公式(3)計(jì)算。JJF2056—20233ΔTu=(Timax-Timin)/n(3)式中:ΔTd—溫度示值誤差,℃;Td—檢測(cè)系統(tǒng)的溫度顯示值,℃; To—校準(zhǔn)裝置測(cè)得的中心位置溫度平均值,℃;ΔTf—溫度波動(dòng)度,℃;Tjmax—校準(zhǔn)裝置某個(gè)測(cè)量孔j在16次測(cè)量中的最高溫度,℃;Tjmin—校準(zhǔn)裝置某個(gè)測(cè)量孔j在16次測(cè)量中的最低溫度,℃;ΔTu—溫度均勻度,℃;n—測(cè)量次數(shù);Timax—各校準(zhǔn)位置孔在第i次測(cè)得的最高溫度,℃;Timin—各校準(zhǔn)位置孔在第i次測(cè)得的最低溫度,℃。6.2線性相關(guān)系數(shù)將大腸埃希氏菌菌落計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或枯草芽孢桿菌菌落計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按照證書(shū)要求溶于無(wú)菌生理鹽水或無(wú)菌磷酸鹽緩沖液中,并用該溶液依次10倍稀釋為6個(gè)梯度。其中細(xì)菌的含量從105CFU/mL逐步稀釋到0CFU/mL。每個(gè)梯度稀釋樣品/測(cè)試樣品,取1mL加入適量的培養(yǎng)基(根據(jù)細(xì)菌類(lèi)型選擇EC肉湯或NB肉湯)。每個(gè)梯度做2管重復(fù)。一起上機(jī)檢測(cè),按照細(xì)菌濃度不同,約2h~20h后出結(jié)果。按公式(4)計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r。(xi-)(yi-)r(4)(xi-)2×(yi-)2式中:xi—第i個(gè)稀釋梯度的檢出時(shí)間;—每個(gè)稀釋梯度的檢出時(shí)間平均值;yi—第i個(gè)稀釋梯度大腸埃希氏菌濃度的對(duì)數(shù)值;—每個(gè)稀釋梯度大腸埃希氏菌濃度的對(duì)數(shù)值的平均值;n—稀釋梯度的個(gè)數(shù)。6.3檢出限菌落計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的梯度稀釋樣品,按照濃度從高到低,最低稀釋梯度≤10CFU/mL。記錄最低可被檢測(cè)到的稀釋梯度。檢出限結(jié)果以≤10CFU/mL或≤102CFU/mL、≤103CFU/mL等方式記錄。6.4重復(fù)性使用菌落計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制濃度約(103~105)CFU/mL的測(cè)試樣品。測(cè)試樣做6管重復(fù)。依次記錄每管測(cè)試樣的檢出時(shí)間,按式(5)計(jì)算檢出時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),作為重復(fù)性的評(píng)價(jià)。JJF2056—20234 RSD=i-1)2××100%(5)式中,ri—每一管重復(fù)測(cè)試樣品的檢出時(shí)間;—測(cè)試樣品的n次測(cè)量平均檢出時(shí)間。7校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)JJF1071中5.12的要求,并給出各校準(zhǔn)項(xiàng)目名稱(chēng)和測(cè)量結(jié)果以及測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度。8復(fù)校時(shí)間間隔阻抗法全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)復(fù)校準(zhǔn)間隔建議一般不超過(guò)1年。由于復(fù)校時(shí)間間隔的長(zhǎng)短是由檢測(cè)系統(tǒng)的使用情況、使用者、檢測(cè)系統(tǒng)本身質(zhì)量等諸因素所決定的,因此,送校單位可根據(jù)實(shí)際使用情況自主決定復(fù)校時(shí)間間隔。JJF2056—20235附錄A培養(yǎng)基和試劑A.1磷酸鹽緩沖液A.1.1成分磷酸二氫鉀(KH2PO4)34.0g;蒸餾水500mL;pH7.2。A.1.2制法貯存液:稱(chēng)取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中,用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH,用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25mL,用蒸餾水稀釋至1000mL,分裝于適宜容器中,于121℃高壓滅菌15min。A.2無(wú)菌生理鹽水A.2.1成分氯化鈉8.5g;蒸餾水1000mL。A.2.2制法稱(chēng)取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中,于121℃高壓滅菌15min。A.3EC肉湯(E.colibroth)A.3.1成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0g;3號(hào)膽鹽或混合膽鹽1.5g;乳糖5.0g;磷酸氫二鉀(K2HPO4)4.0g;磷酸二氫鉀(KH2PO4)1.5g;氯化鈉5.0g;蒸餾水1000mL;pH6.9±0.1。A.3.2制法將上述成分溶解于蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH。于121℃高壓滅菌15min。A.4NB肉湯(Nutritionbroth)A.4.1成分胰蛋白胨15.0g;植物蛋白胨5.0g;氯化鈉5.0g;蒸餾水(最終定容至)1000mL。JJF2056—20236A.4.2制法將上述成分溶解于蒸餾水中,于121℃高壓滅菌15min。滅菌后pH為7.2±0.2。A.5無(wú)菌1mol/LNaOHA.5.1成分氫氧化鈉(NaOH)40.0g;蒸餾水1000mL。A.5.2制法稱(chēng)取40g氫氧化鈉溶于1000mL蒸餾水中,于121℃高壓滅菌15min。JJF2056—20237附錄B校準(zhǔn)證書(shū)內(nèi)頁(yè)格式(推薦性表格)序號(hào)校準(zhǔn)項(xiàng)目校準(zhǔn)結(jié)果1溫度示值誤差2溫度均勻度3溫度波動(dòng)度4線性相關(guān)系數(shù)5檢出限6重復(fù)性校準(zhǔn)溫度示值誤差測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度為:校準(zhǔn)員:核驗(yàn)員:JJF2056—20238附錄C校準(zhǔn)原始記錄格式(推薦性表格)系統(tǒng)名稱(chēng)型號(hào)規(guī)格制造廠商出廠編號(hào)委托單位名稱(chēng)聯(lián)系人地址電話溫度濕度大氣壓記錄編號(hào)校準(zhǔn)員核驗(yàn)員一、溫度示值誤差、溫度波動(dòng)度、溫度均勻度(選擇5~9個(gè)測(cè)量點(diǎn))時(shí)間/min024681012141618202224262830不同位置孔測(cè)量值To/℃(其中1為中心位置孔)123456789系統(tǒng)溫度顯示值Td/℃溫度示值誤差ΔTd/℃溫度波動(dòng)度ΔTf/℃溫度均勻度ΔTu/℃JJF2056—20239二、微生物線性測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢出時(shí)間菌液濃度CFU/mL相關(guān)系數(shù)r檢出限CFU/mL菌落計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)三、微生物定量測(cè)量結(jié)果序號(hào)待測(cè)樣檢出時(shí)間重復(fù)性/%123456平均值JJF2056—202310附錄D溫度示值誤差校準(zhǔn)結(jié)果不確定度評(píng)定示例D.1測(cè)量方法采用全自動(dòng)溫度校準(zhǔn)裝置測(cè)定阻抗法微生物定量分析儀的恒溫孵育系統(tǒng),并與檢測(cè)系統(tǒng)的溫度監(jiān)測(cè)顯示值進(jìn)行比較。D.2測(cè)量模型示值誤差可由公式(D.1)給出:ΔT=To-ΔT=To-Ti(D.1)ΔT—溫度示值誤差,℃;To—監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的溫度監(jiān)測(cè)顯示值,℃; Ti—溫度校準(zhǔn)裝置測(cè)得的溫度,℃。D.3不確定度來(lái)源不確定度來(lái)源包括:測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1,檢測(cè)系統(tǒng)的溫度分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u2和溫度校準(zhǔn)裝置引入的不確定度u3。D.4不確定度分量評(píng)定D.4.1測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1選定一臺(tái)系統(tǒng),使用溫度校準(zhǔn)裝置對(duì)恒溫孵育系統(tǒng)連續(xù)測(cè)量10次,得到一組測(cè)量值:35.28℃,35.11℃,35.37℃,35.83℃,35.57℃,35.37℃,35.67℃,35.