細胞化學染色檢驗

關于細胞化學染色檢驗

細胞學和化學結合的一門科學。以細胞形態(tài)學為基礎，結合運用化學反應原理對細胞內的各種化學物質（包括酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質、核算等）作定性、定位、半定量分析的方法。

第2頁,共43頁，2024年2月25日，星期天臨床應用輔助判斷急性白血病的臨床類型。根據(jù)細胞化學染色結果不同，可推斷細胞所屬系列。輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷。由于血細胞在病理情況下，其化學成分及含量發(fā)生變化，可以輔助疾病的診斷，如中性粒細胞堿性磷酸酶染色、鐵染色等。第3頁,共43頁，2024年2月25日，星期天細胞染色的基本步驟

固定為了保持細胞結構和化學成分的不變，需要對細胞進行固定。分為物理法和化學法物理法：干燥和火焰固定化學法：蒸氣固定和液體固定，如甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。第4頁,共43頁，2024年2月25日，星期天有色沉淀反應通過不同化學反應，是被檢測物質最終形成穩(wěn)定的有色沉淀。1）偶氮偶聯(lián)法：含苯酚的底物，在相應酶的作用下釋放出萘酚，萘酚與重氮鹽結合，偶氮偶聯(lián)形成相應顏色的沉淀物。2）普魯士藍反應：細胞內、外的鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成如亞鐵氰化鉀藍色沉淀。第5頁,共43頁，2024年2月25日，星期天3）雪夫反應：過碘酸氧化細胞內糖類中的乙二醇基形成乙二醛基，醛基與雪夫試劑作用，使無色品紅形成紅色沉淀物。第6頁,共43頁，2024年2月25日，星期天復染目的在于使各種細胞能顯示出來便于辨認。選擇復染液的顏色應與有色沉淀的顏色有明顯對比度既能使細胞結構顯示又能清楚的看出細胞化學染色的結果。第7頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

鐵染色ferricstain第8頁,共43頁，2024年2月25日，星期天原理健康人骨髓中的鐵主要存在于骨髓小粒和幼紅細胞中。骨髓中的鐵在酸性環(huán)境下與亞鐵氰化鉀作用，形成普魯士藍色的亞鐵氫化鐵沉淀，定位于含鐵部位。第9頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

化學反應

鐵+亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵酸性環(huán)境

藍色沉淀第10頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

細胞外鐵

主要存在于骨髓小粒的巨噬細胞內，反映體內貯存鐵。

分-、+、++、+++、++++五個等級。第11頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

細胞內鐵

存在于中幼紅細胞、晚幼紅細胞、及紅細胞中的鐵（包括鐵粒幼紅細胞、鐵粒紅細胞）。

油鏡下計數(shù)100個中幼紅和晚幼紅細胞，記錄胞漿中含有藍色顆粒細胞的百分數(shù)。第12頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

鐵粒幼細胞根據(jù)藍色鐵顆粒多少粗細分為：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型。

環(huán)形鐵粒幼細胞：胞質內藍色顆粒5顆以上，圍繞核周三分之一以上。

鐵粒紅細胞：紅細胞內出現(xiàn)鐵顆粒。第13頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

參考范圍細胞外鐵：+~++細胞內鐵：鐵粒幼細胞陽性率在12%~44%。Ⅰ型為主，少數(shù)Ⅱ型。無環(huán)形鐵粒幼及鐵粒紅細胞。第14頁,共43頁，2024年2月25日，星期天臨床意義缺鐵性貧血：細胞外鐵陰性，細胞內鐵陽性率下降或為零。經鐵劑治療后，其細胞內、外鐵增多，因此鐵染色可作為診斷缺鐵性貧血及指導鐵劑治療的重要方法。第15頁,共43頁，2024年2月25日，星期天鐵粒幼細胞貧血：鐵粒幼紅細胞增多，有時可見到鐵粒紅細胞，細胞外鐵也常增多。因此鐵染色可作為診斷本病的重要方法。第16頁,共43頁，2024年2月25日，星期天骨髓增生異常綜合征：伴環(huán)形鐵粒幼紅細胞增多，其環(huán)形鐵粒幼細胞大于有核細胞15%,細胞外鐵也常增多。第17頁,共43頁，2024年2月25日，星期天非缺鐵性貧血：溶血性貧血、巨幼細胞性貧血、再生障礙性貧血、多次輸血后和白血病等，細胞外鐵和內鐵正?；蛟黾?。感染、肝硬化、慢性腎炎、尿毒癥、血色病等細胞外鐵明顯增加而鐵粒幼細胞減少。第18頁,共43頁，2024年2月25日，星期天應用評價臨床上應用最廣泛的一種細胞化學反應。鐵染色的結果一般是可信的，雖不如血清鐵蛋白敏感，但不受多種病理因素影響，因此鐵染色是反映機體儲存鐵的金標準。假陽性：骨髓涂片受試劑、玻片清潔度及操作過程等因素影響，造成細胞外鐵和內鐵假性增高或陰性患者假陽性。假陰性：標本凝塊誤認為骨髓小粒第19頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

中性粒細胞堿性磷酸酶染色

neutrophilicalkalinephosphataseNAP第20頁,共43頁，2024年2月25日，星期天原理中性粒細胞堿性磷酸酶的染色方法有Gonmori鈣-鈷偶聯(lián)法和kaplow偶氮偶聯(lián)法。第21頁,共43頁，2024年2月25日，星期天Kaplow偶氮偶聯(lián)法磷酸萘酚鈉萘酚包漿中NAPPH9.6重氮鹽不溶性紫黑色沉淀第22頁,共43頁，2024年2月25日，星期天正常細胞染色反應NAP主要存在于中性成熟粒細胞（包括中性桿狀核細胞和分葉核細胞），故成熟中性粒細胞胞漿呈陽性，其他細胞基本陰性。第23頁,共43頁，2024年2月25日，星期天結果判讀

胞漿中有紫黑色顆粒結果為陽性，分為+，++，+++，++++，分別為1分、2分、3分、4分，100個細胞中陽性細胞的積分之和即為積分值。第24頁,共43頁，2024年2月25日，星期天參考范圍陽性率<40%,NAP積分值為30~130分。第25頁,共43頁，2024年2月25日，星期天臨床意義1、NAP積分增加：見于細菌性感染（類白血病反應）、再生障礙性貧血、某些骨髓增殖性疾?。?、骨髓纖維化、真性紅細胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥）、慢性粒細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、惡性淋巴瘤、骨髓轉移癌、雄激素治療等。第26頁,共43頁，2024年2月25日，星期天2.NAP積分下降：慢性粒細胞白血病慢性期、急性粒細胞白血病、陣發(fā)性隨眠性血紅蛋白尿、骨髓異常增生綜合征、惡性組織細胞病。第27頁,共43頁，2024年2月25日，星期天應用評價NAP主要用于慢性粒細胞白血病與類白血病反應、PNH與再障及急性白血病類型的鑒別。本實驗影響因素較多，如試劑、生理性波動及試驗人員及判斷標準等，使結果相差較大，各單位應建立本實驗室參考標準。第28頁,共43頁，2024年2月25日，星期天過氧化物酶染色peroxidasePOX第29頁,共43頁，2024年2月25日，星期天原理

血細胞中所含主要為髓過氧化物酶MPO，MPO是人類中性粒細胞含量最多的一種蛋白質。POX染色方法有多中：復方聯(lián)苯胺法、二甲基聯(lián)苯胺法、四甲基聯(lián)苯胺法等。第30頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

二甲基聯(lián)苯胺法：

過氧化氫新生態(tài)氧過氧化物酶二氨基聯(lián)苯胺不溶性沉淀第31頁,共43頁，2024年2月25日，星期天正常細胞染色反應1.粒細胞系統(tǒng)分化差的原始粒細胞為陰性分化好的原始粒細胞至成熟粒細胞各階段均呈陽性。陽性程度隨細胞成熟增強。嗜酸性粒細胞陽性最強，嗜堿性粒細胞陰性。第32頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

2.單核細胞系統(tǒng)：陰性或弱陽性

3.其他細胞：淋巴、紅系、巨核系均為陰性，漿細胞，組織細胞可陰性，可陽性。第33頁,共43頁，2024年2月25日，星期天臨床意義輔助診斷急性白血病的首選，主要用于鑒別急性髓細胞白血病和急性淋巴細胞白血病。第34頁,共43頁，2024年2月25日，星期天急性淋巴細胞白血?。涸剂馨图毎坝字杉毎赎幮裕瑢嶋H上急性淋巴細胞患者骨髓中可殘留部分原始粒細胞，而出現(xiàn)陽性，故參考范圍為陰性或陽性<3%第35頁,共43頁，2024年2月25日，星期天急性粒細胞白血?。涸剂＜毎幮曰蜿栃?，常陽性，為+~++，陽性顆粒數(shù)較多，顆粒較粗大，急性早幼粒細胞白血?。涸缬琢＜毎蕪婈栃?，+++~++++急性單核細胞白血病：原始單核和幼稚單核細胞呈陰性或弱陽性，其陽性顆粒少而細小。第36頁,共43頁，2024年2月25日，星期天急性紅白血?。涸剂＜毎赎栃曰蜿幮?，原始單核細胞呈陰性或弱陽性，有核紅細胞呈陰性中性成熟粒細胞POX活性下降：見于骨髓異常增生綜合征、放射病、退化的中性粒細胞及某些白血病。第37頁,共43頁，2024年2月25日，星期天應用評價POX染色是急性白血病形態(tài)學分型中最重要、首選的常規(guī)細胞化學染色。

POX染色涂片上細胞結構不如瑞氏染色清楚，且陽性細胞中已有陽性顆粒覆蓋，一定程度上干擾白細胞顆粒判斷。第38頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

POX染色測定MPO的敏感性明顯低于流式細胞術對MPO測定，所以POX染色陰性的患者并不等于白血病細胞中不存在此酶，需用流式細胞術進行確認。第39頁,共43頁，2024年2月25日，星期天蘇丹黑染色

蘇丹黑B（sudanblackB，SBB）是一種脂溶性的重氮染料，能溶解細胞內的含脂結構（如中性脂肪、磷脂、糖脂和類固醇），而使脂類物質顯示出來，呈深黑色或棕色，脂類物質在粒細胞中豐富，單核細胞少量。第40頁,共43頁，2024年