項目5病毒性組織疫苗制備

疫苗制造基本程序生物工程學院---病毒性動物組織疫苗制造項目五病毒性組織疫苗制造種毒既可用抗原性優(yōu)良、致死力強的自然毒株臟器組織毒或強毒株增殖培養(yǎng)物，也可用弱毒株組織毒種。無論何種種毒都須經純粹、抗原性和免疫原性檢查合格后使用。接種途徑依病毒性質和目的而異，例如豬瘟結晶紫苗，采取豬肌肉注射血液毒種；牛瘟兔化弱毒疫苗，以兔耳靜脈注射脾淋毒種；狂犬病疫苗，用兔腦毒種接種綿羊腦內途徑感染。幾種動物常用的接種途徑如下：

1.腦內注射：顱前后中線5mm平行線與瞳孔橫線交叉處。

2.靜脈注射：家兔由耳靜脈注入；雞自翅下肢靜脈注入。

3.肌肉注射：選擇腿部、胸部、臀部等肌肉豐滿處注射。

4.皮下注射：家兔和豚鼠可選擇在腹部或后腿內注射。

5.腹腔注射：家兔與豚鼠可選腹股溝處刺入腹腔。（二）種毒與接種病毒性動物組織疫苗制造觀察與收獲動物選擇配苗種毒與接種動物在接種感染后應每天觀察和檢查規(guī)定的各項指標，指標或項目因不同病毒而異。常規(guī)觀察、檢查的項目如食欲、精神和活動狀態(tài)、體溫、糞便、尿和血液變化等。根據觀察的征象和檢查的結果選出符合要求的發(fā)病動物按規(guī)定方式剖殺，采取收集含毒量高的器官組織。如豬瘟結晶紫疫苗采取發(fā)病豬的血液制備；兔出血癥組織滅活疫苗采集病兔肝臟生產；狂犬病疫苗利用發(fā)病羊的羊腦組織制造。（三）觀察與收獲病毒性動物組織疫苗制造觀察與收獲動物選擇配苗種毒與接種1．組織滅活疫苗采取收獲的組織經無菌檢驗及毒價測定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液和滅活劑（甲醛、酚、結晶紫等）制成勻漿，然后按不同病毒的滅活溫度、時間進行滅活。如狂犬病疫苗配制按腦組織1:4加入含有甘油及1%酚蒸餾水，于36

0.5

C滅活7天制成；豬瘟結晶紫疫苗配制，按血毒4份，結晶紫甘油溶液1份混合，于37C~38C滅活6~8天。2.弱毒組織疫苗在無菌操作下剔除臟器上的脂肪與結締組織等，稱重后剪碎，加入適最保護劑制成勻漿，然后濾過扣除殘渣量，再按濾液中的實際組織量計算稀釋倍數(shù)，加入余量保護劑和青鏈霉素500~1000U(g/ml)，充分搖勻后置0~4C冷暗處處理一定時間后作無菌檢驗與毒價測定。合格者進行分裝，冷凍真空干燥制成凍干疫苗。（四）制苗病毒性動物組織疫苗制造觀察與收獲動物選擇配苗種毒與接種流程圖2——病毒性組織疫苗制造工藝流程動物感染動物毒株種毒滅活病毒液鑒定培育檢驗檢驗配制原料佐劑配苗、乳化滅活疫苗含病毒組織含病毒懸液配苗活疫苗保護劑分裝、凍干分裝滅活原料種子擴增收獲配制純化病毒懸液接種毒種：毒種的優(yōu)劣不僅影響疫苗的產量，而且也影響疫苗的質量，毒種不純會產生相互干擾，減毒活疫苗毒種若毒力回升易造成事故，因此毒種的選擇應挑選那些致病性低，免疫效價高而持久，抗原譜廣的，易增殖，便于生產，可在傳代細胞上傳代的毒種。培養(yǎng)病毒的細胞：細胞若有潛在的致癌性病毒或慢病毒，以及有支原體污染均不能用作疫苗生產。對此因素應嚴格檢查。此外若細胞本身發(fā)生轉化后，不宜于制備活疫苗，只能制備一些滅活疫苗或亞單位疫苗。培養(yǎng)液：培養(yǎng)細胞的營養(yǎng)液中多少含有一定量的血清蛋白，在疫苗使用中常會出現(xiàn)某種程度的過敏反應，為此，應盡量使細胞適應于無血清蛋白的培養(yǎng)基中，以消除過敏源。甲醛滅活劑的使用：甲醛能使病毒滅活，但仍保持其抗原性，因此普遍用來制備滅活病毒疫苗，但要控制含量。影響疫苗質量的因素獲得質量優(yōu)良、安全的產品，關鍵環(huán)節(jié)如下

1.選擇優(yōu)良的菌種和毒種，并保持其穩(wěn)定性；

2.選用適當?shù)呐囵B(yǎng)繁殖細菌與病毒等微生物的方法，包括優(yōu)良的培養(yǎng)基、合乎要