細菌培養(yǎng)標本的采集運送與處理

關(guān)于細菌培養(yǎng)標本的采集運送與處理內(nèi)容簡介細菌培養(yǎng)基本原則常見臨床標本的采集、運送與處理第2頁,共49頁，2024年2月25日，星期天

細菌檢驗從正確取材開始正確的采集、運送與處理細菌培養(yǎng)標本是臨床細菌檢驗成功的關(guān)鍵。沒有好質(zhì)量的標本，實驗室采取任何先進的分離、鑒定和藥敏技術(shù)都是無濟于事的,并有可能誤導臨床醫(yī)生。微生物學檢驗的標準化首先應從標本采取,運送和處理的規(guī)范化開始。細菌室工作人員、臨床醫(yī)生和護士必須明白保證標本質(zhì)量的重要性。第3頁,共49頁，2024年2月25日，星期天標本采集的普遍原則避免自身菌群的污染，只要可能的話，應該確定一個代表感染過程的標本。選擇正確的解剖部位，采用適當?shù)募夹g(shù)和設備采集標本。選擇合適的部位采集用于厭氧菌培養(yǎng)的標本。收集標本量要足夠，量少可能導致假陰性結(jié)果。每份標本上注明姓名，標本來源，采集部位，時間和日期。將標本放在設計用于提高可能病原體的生存、無漏、無菌、無潛在安全性問題的容器內(nèi)。第4頁,共49頁，2024年2月25日，星期天標本轉(zhuǎn)運的原則所有標本必須立即送交實驗室，最好不要超過2小時，如標本處理不得不延遲，應在合適的條件下儲存，但不超過24小時。對環(huán)境敏感的微生物包括志賀氏菌（應立即處理）、淋球菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌（對低溫敏感）。腦脊液、生殖器、眼或內(nèi)耳標本不要冷凍。第5頁,共49頁，2024年2月25日，星期天

哪些情況需要使用運送培養(yǎng)基?在病人家里采集的標本外檢標本標本從醫(yī)院送實驗室過程第6頁,共49頁，2024年2月25日，星期天運送培養(yǎng)基原則運送所有細菌需氧菌、厭氧菌、苛氧菌細菌不生長非營養(yǎng)培養(yǎng)基

保持細菌存活:

標本采集后超過24h不應增加或減少活菌數(shù)量第7頁,共49頁，2024年2月25日，星期天標本的拒絕接收原則未貼或錯貼標簽送檢延遲不正確的轉(zhuǎn)運溫度和轉(zhuǎn)運工具不合適或泄漏的容器有明顯污染的標本干涸的拭子標本標本量不足同一天內(nèi)同一個檢測條件的重復標本（血培養(yǎng)除外）第8頁,共49頁，2024年2月25日，星期天問題標本的處理與送檢醫(yī)生或護士聯(lián)系。對非損傷方法取得的標本，再送新標本。對經(jīng)損傷程序取得的標本，和臨床聯(lián)系后可以處理，但要在申請單上注明問題。特殊情況下，即使標本質(zhì)量有損害，也必須處理。疑難病癥罕見病例傳染性疾病的會診第9頁,共49頁，2024年2月25日，星期天血液細菌培養(yǎng)臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血流感染的患者，需做血液細菌培養(yǎng)以明確病原。及時、準確地從患者血液中分離出病原菌，才能正確實施有效地抗菌治療，從而有助于提高治愈率和降低醫(yī)療費用。第10頁,共49頁，2024年2月25日，星期天采血時機在出現(xiàn)臨床癥狀后應盡快抽血作培養(yǎng)，最好在發(fā)熱初期和高峰或寒戰(zhàn)時。原則上應選擇在抗菌藥物應用之前，對已應用藥物而病情不允許停藥的患者也應在下一次用藥前采血。第11頁,共49頁，2024年2月25日，星期天采血部位通常采血部位為肘靜脈。疑似細菌性心內(nèi)膜炎時，以肘動脈或股動脈采血為宜。多次采血時,應在不同部位進行。不要從血管插管內(nèi)采血。切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采取血標本。第12頁,共49頁，2024年2月25日，星期天采血次數(shù)與間隔急性感染患者：從兩臂分別采2份血樣。感染性心內(nèi)膜炎患者:24h內(nèi)采血3次,每次間隔不少于30分鐘。發(fā)熱原因不明患者:24-48h后可再采血2次,間隔不少于60分鐘。第13頁,共49頁，2024年2月25日，星期天采血方法采血部位的局部皮膚應嚴格消毒。將采集的血液注入血培養(yǎng)瓶前，應更換針頭或過火消毒針頭。血培養(yǎng)瓶口也要消毒，并待酒精揮發(fā)后（建議用酒精燈燒灼瓶口）再注入血樣,。第14頁,共49頁，2024年2月25日，星期天采血量每次采血量成人5～10ml，嬰幼兒1～2ml，培養(yǎng)基與血液之比以10：1為宜，以稀釋血液中的抗生素。每增加1ml血量平均提高陽性率3.2%。第15頁,共49頁，2024年2月25日，星期天抗凝劑0.025-0.05%聚茴香腦磺酸鈉(sodiumpolyanetholsulfonate,SPS)。SPS具有抗凝抗吞噬抗補體及拮抗某些抗生素的作用。第16頁,共49頁，2024年2月25日，星期天培養(yǎng)條件視患者的感染、用藥情況選用不同的培養(yǎng)瓶。真菌培養(yǎng)可和普通培養(yǎng)共用一需氧瓶。不需要每個血培養(yǎng)都作厭氧培養(yǎng)。若同一次抽血既做需氧也做厭氧，應先厭氧再需氧。黃色——小兒瓶藍色——未用抗生素需氧綠色——已用抗生素需氧（√）紫色——未用抗生素厭氧橙色——已用抗生素厭氧（√）第17頁,共49頁，2024年2月25日，星期天胸腹水及腦脊液標本采集:

以無菌操作穿刺抽取，直接注入培養(yǎng)瓶內(nèi)。量少注入小兒瓶，量多的注入成人瓶。運送:

若床邊沒有接種，用帶蓋的無菌容器送檢。第18頁,共49頁，2024年2月25日，星期天血液和無菌體液的處理血液或無菌體液抽取后應立即放入血培養(yǎng)瓶,立即送檢或室溫保存,不能放冰箱!實驗室接到標本應立即放入血培養(yǎng)儀。中夜班收到標本放置室溫,不用放置35℃溫箱。對急診室送來或室溫久置的標本，應先檢查瓶底有無變化，如變黃，應先涂片并盲傳，以防漏檢。第19頁,共49頁，2024年2月25日，星期天尿液標本標本采集時間:應在用藥前或停藥5天后留取標本以晨起第一次尿為宜使尿液在膀胱內(nèi)停留6-8h以上(給細菌足夠的繁殖時間)。第20頁,共49頁，2024年2月25日，星期天尿液標本采集方法中段尿：女性采樣前應先用肥皂水或0.1%高錳酸鉀溶液沖洗外陰部及尿道口。男性須翻轉(zhuǎn)包皮沖洗，用0.1%新潔爾滅消毒尿道口，滅菌紗布擦干。棄前段尿，無菌杯收集中段尿。導尿管導尿無菌操作進行導尿可減少尿道污染。對留置導尿者，可用碘酒消毒尿道口處的導尿管壁，用聯(lián)空針筒的細針斜穿管壁抽吸尿液；或拔去閉式引流的集尿袋，棄去導尿管前段尿液，留無污染的膀胱內(nèi)尿液數(shù)毫升送檢。不可從集尿袋的下端管口留取標本。長期留置導尿管者，應在更換新導尿管后留取尿標本。第21頁,共49頁，2024年2月25日，星期天尿液標本采集方法膀胱穿刺法:是收集尿液的最好方法,尤其對厭氧菌檢查,但由于是侵入損傷性操作,臨床常少用,收集的標本可直接注入血培養(yǎng)瓶中。腎盂尿采集法:應請泌尿科醫(yī)生采取,左右側(cè)的標本要標明,收集的標本可直接注入血培養(yǎng)瓶中。第22頁,共49頁，2024年2月25日，星期天尿液標本運送和保存無菌杯立即送檢室溫下尿標本擔擱稍久可導致尿內(nèi)細菌數(shù)量明顯增加而影響病原菌與污染菌的區(qū)分和細菌定量。不能立即送檢者，可暫存4℃冰箱。第23頁,共49頁，2024年2月25日，星期天尿液標本處理2小時內(nèi)處理完畢培養(yǎng)基：血瓊脂和麥康凱瓊脂。接種方法：10ul接種環(huán)垂直插入充分混勻的樣品中取一環(huán)尿液，劃線方法為從上到下劃一條直線，再畫一條垂直線，反復劃線呈棋盤狀。35℃培養(yǎng)18-24h，觀察結(jié)果。第24頁,共49頁，2024年2月25日，星期天第25頁,共49頁，2024年2月25日，星期天呼吸道標本標本留取質(zhì)量的好壞直接影響到對下呼吸道病原學的診斷。標本留取不當會導致抗菌治療失敗,以及造成耐藥菌的出現(xiàn)。第26頁,共49頁，2024年2月25日，星期天標本采集時間痰液：以晨痰為好。多數(shù)患者晨痰較多，即使對痰量少的患者，也以清晨采集最為容易。對支氣管擴張癥或與支氣管相通的肺空洞患者，清晨起床后進行體位引流，可采集大量痰液。最好在應用抗菌藥物之前或停藥1天后采集標本。鼻咽拭子：應于抗菌藥物治療前采集為好。咽部又是呼吸和食物的通路，因此亦以晨起后采集為宜。第27頁,共49頁，2024年2月25日，星期天痰標本采集方法自然咳痰：清水反復漱口后用力咳痰，從呼吸道深部咳出新鮮痰液于無菌容器送檢。痰量極少者可用45℃10%氯化鈉溶液霧化吸入導痰。氣管穿刺法:適用于昏迷和咳嗽乏力患者。纖維支氣管鏡抽取法:適用于纖維支氣管鏡檢查或治療的患者。用纖維支氣管鏡可直接在病灶部位采集高濃度的感染病原菌，但不能完全避免咽喉部正常菌群感染。小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，用棉拭子伸入咽部，小兒因壓舌刺激咳嗽時，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上，從而獲得標本。雙側(cè)肺部感染伴人工氣道如氣管切開或氣管插管患者，可用吸痰管經(jīng)人工氣道估插至葉支氣管水平吸引痰液。第28頁,共49頁，2024年2月25日，星期天痰標本運送和保存從病人留痰后應在1h內(nèi)送至實驗室不能及時送檢者，可暫存4℃冰箱。室溫下?lián)鷶R數(shù)小時定植于口咽部的非致病菌呈過度生長而肺炎鏈球菌、葡萄球菌和流感嗜血桿菌檢出率明顯降低未用運送培養(yǎng)基的標本送到實驗室后應在30分鐘內(nèi)接種到相應培養(yǎng)基第29頁,共49頁，2024年2月25日，星期天痰標本的處理培養(yǎng)前的處理：痰液的洗凈：痰液含有許多正常菌群而影響病原菌檢出?？捎?0-20ml無菌生理鹽水洗兩三次，最后將剩余的膿痰繼續(xù)處理。痰液的均質(zhì)化：向痰液內(nèi)加等量約pH7.6的10g/L胰酶溶液，放置35℃90min，即能使痰液均質(zhì)化，而對細菌培養(yǎng)無明顯影響。第30頁,共49頁，2024年2月25日，星期天痰標本的處理判斷標本是否合格洗過的痰液革蘭染色后用低倍鏡檢鱗狀上皮細胞數(shù)量鱗狀上皮細胞數(shù)>10/lp，則要求重新留取標本，不宜做培養(yǎng)；證實標本來自下呼吸道后，用油鏡觀察細菌的著色、形態(tài)及排列，做出初步病原學診斷。發(fā)現(xiàn)任何白細胞內(nèi)的細菌，均須報告。第31頁,共49頁，2024年2月25日，星期天痰標本的處理培養(yǎng)基：血瓊脂、麥康凱瓊脂、嗜血桿菌巧克力瓊脂和沙保弱瓊脂。劃線方法：分四區(qū)劃線，每次劃下一區(qū)前都要燒灼接種環(huán)，待冷卻后再劃。下一區(qū)與上一區(qū)要相交4-6次。35℃5%-10%二氧化碳中培養(yǎng)24-48h。第32頁,共49頁，2024年2月25日，星期天第33頁,共49頁，2024年2月25日，星期天咽拭子及口腔拭子采集前患者應用冷開水反復漱口，拭子的選擇：要求無菌、不含抑制劑；預先沾濕拭子（非常重要）；由檢查者將舌向外拉，使腭垂盡可能向外牽引，將棉拭子通過舌根到咽后壁或腭垂的后側(cè)，涂抹數(shù)次以取得標本。對化膿性扁桃體炎或口腔念珠菌病，直取病灶部位，拭子要避免接觸口腔及舌粘膜。減少污染。立即送檢。室溫保存。接種同痰第34頁,共49頁，2024年2月25日，星期天第35頁,共49頁，2024年2月25日，星期天保護性毛刷標本的處理取完后加入1ml無菌生理鹽水立即送檢。震蕩、離心、涂片染色。接種培養(yǎng)基同痰接種劃線方法同尿培養(yǎng)第36頁,共49頁，2024年2月25日，星期天糞便培養(yǎng)社區(qū)感染標本：社區(qū)感染性腹瀉，多由志賀菌、沙門菌、弧菌、耶爾森菌等腸道致病菌感染所引起。將標本接種在相應的選擇性分離培養(yǎng)基上即可，弧菌、耶爾森菌應先增菌后培養(yǎng)以提高檢出率。住院患者腹瀉標本：多為大量使用廣譜抗生素后導致菌群失調(diào)引起。住院超過3天或入院診斷不是腸胃炎的不做常規(guī)糞便培養(yǎng)。應考慮梭狀芽胞桿菌培養(yǎng)或毒素測定。常見病原菌有艱難梭菌、彎曲菌、葡萄球菌、腸球菌、念珠菌等。選擇培養(yǎng)基應根據(jù)涂片結(jié)果而定。第37頁,共49頁，2024年2月25日，星期天糞便標本采集應在發(fā)病早期并且盡量在用抗生素治療前采集。排便后，挑取有膿血、黏液部分的糞便（液狀糞便則取絮狀物），稀便不少于1ml，固體便不少于1克，無便患者可用直腸拭子。對不易獲取糞便者或嬰幼兒，可用肛拭采集。將拭子前端用無菌甘油水濕潤。然后插入肛門約4～5cm（幼兒約2～3cm）處，輕輕旋轉(zhuǎn)擦取直腸表面黏液后退出，置運送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。除嬰兒和有活動性腹瀉癥狀的患者外不推薦用拭子做常規(guī)病源檢查。第38頁,共49頁，2024年2月25日，星期天糞便標本運送卡波氏管：普通培養(yǎng)堿性蛋白胨水：霍亂弧菌培養(yǎng)難辨梭菌培養(yǎng)：及時送檢，用厭氧輸送培養(yǎng)基。第39頁,共49頁，2024年2月25日，星期天糞便標本處理普通培養(yǎng)∶MAC、SS、10%綿羊血的彎曲桿菌培養(yǎng)基（暫無)四區(qū)劃線（同痰標本）MAC、SS35℃培養(yǎng)10%綿羊血的彎曲桿菌培養(yǎng)基42℃5%-10%二氧化碳培養(yǎng)霍亂弧菌培養(yǎng)：記錄收到標本時間和病人電話堿性蛋白胨水35℃培養(yǎng)6-8小時后轉(zhuǎn)種4號平板（四區(qū)劃線）繼續(xù)35℃培養(yǎng)第40頁,共49頁，2024年2月25日，星期天生殖道、尿道標本采集男性患者:尿道標本:2h不排尿清洗龜頭后,用碘伏等消毒后,擠出分泌物或以專用細拭子插入尿道口1-2cm旋轉(zhuǎn)采取分泌物立即送檢。前列腺液標本:

應由醫(yī)師按摩前列腺,以無菌操做自尿道口采取前列腺液放在無菌杯內(nèi)送檢。第41頁,共49頁，2024年2月25日，星期天生殖道、尿道標本采集女性患者:成年患者:應在擴陰器的支持下,以無菌棉拭子擦去分泌物，再用新的無菌拭子緊貼宮頸內(nèi)道采樣送檢。未成年患者:不應使用擴陰器,應以無菌拭子在陰道口處采取分泌物送檢。尿道：2h不排尿，拭去尿道口滲出物，再插入尿道口1-2cm旋轉(zhuǎn)采取分泌物立即送檢。第42頁,共49頁，2024年2月25日，星期天生殖道、尿道標本處理立即送檢普通培養(yǎng)和淋球菌培養(yǎng)：室溫支原體、衣原體：4℃保存第43頁,共49頁，2024年2月25日，星期天生殖道標本處理普通培養(yǎng)：血瓊脂三區(qū)劃線35℃培養(yǎng)淋球菌培養(yǎng)淋球菌巧克力平板預溫后立即接種三區(qū)劃線35℃