公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)

公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)

公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)

公共場所衛(wèi)生技術(shù)服務(wù)機(jī)構(gòu)承擔(dān)的工作?（一）空氣、微小氣候（濕度、溫度、風(fēng)速）、采光、照明、噪聲等室內(nèi)環(huán)境的衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價(jià)；?（二）顧客用品用具的衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價(jià)；?（三）游泳場（館）和公共浴室水質(zhì)衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價(jià)；?（四）公共場所飲用水（包括：自備水、直飲水、二次供水）衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價(jià)；?（五）集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)的衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價(jià)。

公共場所衛(wèi)生技術(shù)服務(wù)機(jī)構(gòu)承擔(dān)的工作?（一）空氣、微小氣候（2013年公共場所衛(wèi)生監(jiān)測

微生物指標(biāo)生活飲用水《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》(GB/T5750)賓館微生物指標(biāo)《公共場所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T18204-2000）游泳池水微生物指標(biāo)《公共場所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T18204-2000）集中空調(diào)系統(tǒng)微生物指標(biāo)《公共場所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范》（WS394-2012）2013年公共場所衛(wèi)生監(jiān)測

微生物指標(biāo)生活飲用水

公共場所生活飲用水微生物檢驗(yàn)指標(biāo)：菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、賈第鞭毛蟲、隱孢子蟲

公共場所生活飲用水微生物檢驗(yàn)

生活飲用水中微生物指標(biāo)

名稱單位限值菌落總數(shù)CFU/mL100總大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出耐熱大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出大腸埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出賈第鞭毛蟲個(gè)/10L<1隱孢子蟲個(gè)/10L<1生活飲用水中微生物指標(biāo)

水樣的采集和保存

采樣的原則:1.采集的水樣，必須具有代表性，能真實(shí)反映水質(zhì)狀況。2.在實(shí)驗(yàn)室檢測之前水樣中微生物數(shù)量應(yīng)保持不變。水樣的采集和保存

采樣的原則:

采樣容器1.采樣容器應(yīng)采用潔凈、無色、無毒的硬質(zhì)玻璃（又稱硼硅玻璃）。樣品瓶必須專瓶專用，切不可用實(shí)驗(yàn)室盛裝過濃溶液的瓶作采樣瓶。通常我們使用500ml的高壓滅菌的細(xì)口瓶采樣。2.容器及瓶塞、瓶蓋應(yīng)能經(jīng)受滅菌的溫度。采樣容器1.采樣容器應(yīng)采用潔凈、無色、無毒的硬質(zhì)玻璃（又稱3.容器洗滌：將容器用自來水和洗滌劑洗滌，并用自來水徹底沖洗后，用10%鹽酸溶液浸泡過夜，然后依次用自來水，蒸餾水洗凈。4.容器滅菌：分干熱和高壓蒸氣滅菌兩種。干熱滅菌要求160℃下維持2h；高壓蒸氣滅菌要求121℃下維持15min，高壓蒸汽滅菌后的容器如不立即使用，應(yīng)于60℃將瓶內(nèi)冷凝水烘干。滅菌后的容器應(yīng)在2周內(nèi)使用。公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)水樣采集單獨(dú)采樣。同一水源、同一時(shí)間采集幾類檢測指標(biāo)的水樣時(shí)，應(yīng)先采集供微生物學(xué)指標(biāo)檢測的水樣。采樣時(shí)應(yīng)直接采集，不得用水樣涮洗已滅菌的采樣瓶，并避免手指和其他物品對瓶口的沾污。末梢水采集：采樣前用酒精燈灼燒對水管口進(jìn)行消毒，放水約5分鐘后采集水樣約玻璃瓶的80%。容積整個(gè)過程要快，穩(wěn)。不要讓水流過大，以免濺出，管口不要與瓶口接觸，收集完應(yīng)馬上將瓶塞旋緊。水樣采集單獨(dú)采樣。水樣保存方法黑暗處，4℃，4h內(nèi)檢測。如有游離余氯應(yīng)在采樣瓶消毒前每125ml加0.1mg硫代硫酸鈉溶液(10%)。水樣保存方法菌落總數(shù)檢測方法1.平皿計(jì)數(shù)法本法適用于生活飲用水及其水源水中菌落總數(shù)的測定。菌落總數(shù)檢測方法1.平皿計(jì)數(shù)法菌落總數(shù)指在一定條件培養(yǎng)后(如培基成分、培養(yǎng)溫度和時(shí)間、pH、需氧性質(zhì)等)，1mL水樣中所含菌落的總數(shù)。菌落總數(shù)檢驗(yàn)步驟生活飲用水?以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL充分混勻的水樣，注入滅菌平皿中，傾注約15mL已融化并冷卻到45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，立即旋搖平皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。每次檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)做一平行接種，同時(shí)另用一個(gè)平皿只傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作為空白對照。?待冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于36±℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。即為1mL水樣中的菌落總數(shù)。檢驗(yàn)步驟生活飲用水水源水以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1:10稀釋液。?吸取1:10的稀釋液1mL注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1：100稀釋液。按同法依次稀釋成1：1000，1：10000稀釋液籌備用。如此遞增稀釋一次，必須更換一支1mL滅菌吸管。用滅菌吸管取未稀釋的水樣和2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度的水樣1mL，分別注入滅菌平皿內(nèi)。以下操作同生活飲用水的檢驗(yàn)步驟。水源水以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入盛有9m菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法菌落計(jì)數(shù)方法：先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5倍～10倍的放大鏡檢查，以防遺漏。?兩個(gè)平板若其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落生長時(shí)，應(yīng)以無片狀菌落生長的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半皿計(jì)數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法菌落計(jì)數(shù)方法：先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然不同稀釋度的選擇及報(bào)告方法首先選擇平均菌落數(shù)在30～300之間者進(jìn)行計(jì)算，若只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí),則將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。若有兩個(gè)稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視二者之比值來決定，若其比值小于2應(yīng)報(bào)告兩者的平均效。若大于或等于2則報(bào)告其中稀釋度較小的菌落總數(shù)。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。不同稀釋度的選擇及報(bào)告方法首先選擇平均菌落數(shù)在30～300之若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)以按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。?若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，則應(yīng)以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。?若所有稀釋度的平板上均無菌落生長，則以未檢出報(bào)告之。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)以按稀釋度最低的平均如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可計(jì)”報(bào)告，而應(yīng)在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其中2個(gè)平板1cm2中的菌落數(shù)，除2求出每平方厘米內(nèi)平均菌落數(shù)，乘以皿底面積63.6，再乘其稀釋倍數(shù)作報(bào)告。菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告：菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來表示（見表1“報(bào)告方式”欄）。如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可計(jì)”報(bào)告，而應(yīng)在稀釋公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)總大腸菌群定義：一群在36℃條件下培養(yǎng)24～48小時(shí)能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌?？偞竽c菌群是衛(wèi)生學(xué)上的概念，不是細(xì)菌分類學(xué)概念，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。主要包括埃希氏菌屬，克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬等的細(xì)菌?？偞竽c菌群定義：一群在36℃條件下培養(yǎng)24～48小時(shí)能發(fā)酵乳衛(wèi)生學(xué)概念總大腸菌群分布較廣，在溫血?jiǎng)游锛S便和自然界廣泛存在。人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是總大腸菌群在自然界存在的主要原因。但它也來自植物的土壤，它所包括的微生物在地面水中也可繁殖。糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外界環(huán)境中則以總大腸菌群其他型別較多。衛(wèi)生學(xué)概念總大腸菌群分布較廣，在溫血?jiǎng)游锛S便和自然界廣泛存在多管發(fā)酵法本法適用于生活飲用水及其水源水中總大腸菌群的測定?？偞竽c菌群檢測比較簡單，所以被廣泛用做水源的衛(wèi)生指標(biāo)和食品加工衛(wèi)生狀況的通用指標(biāo)。也是評價(jià)生活飲用水衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。多管發(fā)酵法公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)EMB分離培養(yǎng)將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于36℃±l培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h～24h，觀察菌落形態(tài)，挑取符合下列特征的菌落作革蘭氏染色、鏡檢和證實(shí)試驗(yàn)。?深紫黑色、具有金屬光澤的菌落；?紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落；?淡紫紅色、中心較深的菌落。EMB分離培養(yǎng)將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)鏡檢鏡檢復(fù)發(fā)酵復(fù)發(fā)酵結(jié)果報(bào)告根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN（mostprobablenumber，最可能數(shù)）檢索表，報(bào)告每100mL水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)(MPN)值。?稀釋樣品查表后所得結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)。?如所有乳糖發(fā)酵管均陰性時(shí)，可報(bào)告總大腸菌群未檢出（注意稀釋度）。結(jié)果報(bào)告根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN（most耐熱大腸菌群計(jì)數(shù)定義：在44.5℃培養(yǎng)24h~48h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。是大腸菌群的一個(gè)亞群，主要是埃希氏菌屬和耐熱克雷伯菌屬。它很少在地面水中繁殖，且僅來源于人和溫血?jiǎng)游锏募S便，因此其衛(wèi)生學(xué)意義更大，檢出之表明飲水已被糞便污染，有可能有腸道致病菌和寄生蟲等病原體的危險(xiǎn)。耐熱大腸菌群計(jì)數(shù)定義：在44.5℃培養(yǎng)24h~48h能發(fā)酵乳公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)大腸埃希氏菌定義：大腸埃希氏菌廣泛存在于是人和溫血?jiǎng)游锏哪c道中，能夠在44.5℃發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、IMViC生化試驗(yàn)為++--或-+--大腸埃希氏菌主要是用于指示水源近期受到糞便污染。該指標(biāo)與糞便污染的相關(guān)性好大腸埃希氏菌定義：大腸埃希氏菌廣泛存在于是人和溫血?jiǎng)游锏哪c道檢驗(yàn)方法多管發(fā)酵法總大腸菌群多管發(fā)酵法初發(fā)酵檢測陽性管，用接種環(huán)挑一環(huán)到EC-MUG管中，44.5℃培養(yǎng)24h±2h，用366nm紫外燈照攝，產(chǎn)生蘭色熒光者為陽性檢驗(yàn)方法多管發(fā)酵法酶底物法大腸埃希氏菌產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解四甲基傘形酮-β-D-葡萄糖苷（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide，MUG）使培養(yǎng)液在波長366nm紫外光下產(chǎn)生熒光的原理，來判斷水樣中是否含有大腸埃希氏菌。定性試驗(yàn)、定量試驗(yàn)（10管法、51孔定量盤法）培養(yǎng)基：EC-MUG黃色有藍(lán)色熒光者為陽性水樣不變黃有藍(lán)色熒光者不屬于陽性酶底物法大腸埃希氏菌產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuro公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)公共場所衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價(jià)公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)測定(GB/T18204.1-2000)茶具、毛巾、床上臥具等公共用品的細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群公共場所衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價(jià)公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.1-2000）撞擊法：將集菌的營養(yǎng)瓊脂平板置36±1℃培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。自然沉降法：將已采樣平板置36±1℃培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)每塊平板上菌落數(shù)，求出全部采樣點(diǎn)的平均菌落數(shù)。公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.1-公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報(bào)告撞擊法

計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)=平皿菌落數(shù)/（采樣器流量*采樣時(shí)間）結(jié)果單位：cfu/m3

自然沉降法

計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)=平均每皿菌落數(shù)結(jié)果單位：cfu/皿公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報(bào)告撞擊法茶具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.2-2000）采樣：用滅菌生理鹽水濕潤棉拭子，在茶具與口唇接觸的內(nèi)外緣涂抹50cm2，既1-1.5cm高處一圈。用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭子放入10mL生理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢。此液作為1:10茶具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.2-2000茶具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法將采來的1:10樣品涂抹液（棉拭子涂抹）充分混勻，再取1:10樣液1mL于9mL的NS中充分混勻?yàn)?:100樣液。兩稀釋度各吸樣液于兩個(gè)平皿中，每皿1mL。最后注入營養(yǎng)瓊脂，置36±1℃培養(yǎng)48h計(jì)數(shù)菌落數(shù)。同時(shí)做空白對照。茶具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法將采來的1:10樣品涂抹液（棉拭子涂抹）茶具細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報(bào)告計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)=平均菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)/50單位：cfu/cm2茶具細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報(bào)告計(jì)算公式：茶具大腸菌群檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.3-2000）茶具大腸菌群檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.3-2000茶具大腸菌群檢驗(yàn)發(fā)酵法：取測定茶具菌落總數(shù)剩余樣品，倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵溶液中，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h后進(jìn)行觀察。陰性報(bào)告。陽性進(jìn)一步接種EMB、乳糖發(fā)酵管。紙片法：用滅菌生理鹽水濕潤5cm×5cm大腸菌群快速檢測紙片兩張，分別粘貼在茶具內(nèi)、外緣口唇接觸處，約30S后取下，置于無菌塑料袋內(nèi)。置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h后進(jìn)行觀察。結(jié)果報(bào)告茶具大腸菌群檢驗(yàn)發(fā)酵法：取測定茶具菌落總數(shù)剩余樣品，倒入雙料茶具大腸菌群發(fā)酵法檢驗(yàn)步驟推測性試驗(yàn)：將測定細(xì)菌總數(shù)剩余的檢樣倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵液中，置36±1℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。證實(shí)試驗(yàn)：自推測性試驗(yàn)陽性管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，接種EMB平板上，置36±1℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。挑取可疑菌落染色鏡檢，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管做復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，36±1℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。茶具大腸菌群發(fā)酵法檢驗(yàn)步驟推測性試驗(yàn)：將測定細(xì)菌總數(shù)剩余的檢茶具大腸菌群紙片法檢驗(yàn)步驟將已采樣的大腸菌群測定紙片置36±1℃培養(yǎng)16～18h觀察結(jié)果。結(jié)果判定：若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或片狀紅暈為陽性。茶具大腸菌群紙片法檢驗(yàn)步驟將已采樣的大腸菌群測定紙片置36±毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.4-2000）涂抹法：25c㎡(5cm×5cm)面積范圍;床單、被單在上下兩部各25c㎡面積范圍內(nèi)有順序地來回涂抹，將棉拭子放人10mL生理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢戳印法毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.4毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)涂抹法

檢驗(yàn)步驟將采來的1:10樣品涂抹液（棉拭子涂抹）充分混勻，再取1:10樣液1mL于9mL的NS中充分混勻?yàn)?:100樣液。兩稀釋度各吸樣液于兩個(gè)平皿中，每皿1mL。最后注入營養(yǎng)瓊脂，置36℃培養(yǎng)48h計(jì)數(shù)菌落數(shù)。同時(shí)做空白對照。毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)涂抹法

檢驗(yàn)步驟將采來的1:10樣品涂毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報(bào)告計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)=平均菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)/2單位：cfu/25cm2毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報(bào)告計(jì)算公式：毛巾、床上臥具大腸菌群檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.5-2000）發(fā)酵法紙片法毛巾、床上臥具大腸菌群檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.5采樣涂抹法：用測定細(xì)菌總數(shù)時(shí)采集的樣品，無需重采。紙片法：用滅菌生理鹽水濕潤5cm×5cm大腸菌群快速測定紙片兩張，分別粘貼在毛巾、床上臥具規(guī)定部位和面積范圍內(nèi)，約30s后取下，置于無菌塑料袋內(nèi)。培養(yǎng)。采樣涂抹法：用測定細(xì)菌總數(shù)時(shí)采集的樣品，無需重采。毛巾、床上臥具大腸菌群發(fā)酵法

檢驗(yàn)步驟推測性試驗(yàn)：將測定細(xì)菌總數(shù)剩余的檢樣倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵液中，置36±1℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。證實(shí)試驗(yàn)：自推測性試驗(yàn)陽性管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，接種EMB平板上，置36±1℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。挑取可疑菌落染色鏡檢，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管做復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，36±1℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。毛巾、床上臥具大腸菌群發(fā)酵法

檢驗(yàn)步驟推測性試驗(yàn)：將測定細(xì)菌毛巾、床上臥具大腸菌群紙片法

檢驗(yàn)步驟將已采樣的大腸菌群測定紙片置36±1℃培養(yǎng)16～18h觀察結(jié)果。結(jié)果判定：若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或片狀紅暈為陽性。毛巾、床上臥具大腸菌群紙片法

檢驗(yàn)步驟將已采樣的大腸菌群測定理發(fā)用具微生物檢驗(yàn)方法-金黃色葡萄球菌測定指在BaurdParker培養(yǎng)基或血平板培養(yǎng)基上生長良好，分解甘露醇產(chǎn)酸；血漿凝固酶陽性的革蘭氏陽性葡萄球菌。?菌落直徑為2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。理發(fā)用具微生物檢驗(yàn)方法-金黃色葡萄球菌測定指在BaurdP金黃色葡萄球菌檢測取大腸菌群檢測后剩余的5mL待檢樣品，放入45mL7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，36℃±1℃增菌24h。分離于P-k培養(yǎng)基（或用血平皿），36℃±1℃24h。挑取典型菌落作涂片鏡檢、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)和血漿凝固酶試驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢測取大腸菌群檢測后剩余的5mL待檢樣品，放公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)

公共場所拖鞋微生物檢驗(yàn)方法-

霉菌和酵母菌測定指在一定條件培養(yǎng)后，50cm2面積檢樣中所含有的霉菌和酵母菌落數(shù)。霉菌和酵母菌主要作為判定被檢樣品被霉菌和酵母菌污染程度的標(biāo)志，以便對被檢樣進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價(jià)時(shí)提供依據(jù)。

公共場所拖鞋微生物檢驗(yàn)方法-

霉菌和酵母菌測定指在一定條件將無菌棉拭子蘸取無菌生理鹽水，在每只拖鞋鞋面與腳趾接觸處5cm×5cm面積上，有順序地均勻涂抹3次（一雙拖鞋為一份樣品）后，用滅菌剪刀將棉拭子手執(zhí)部分剪斷，將棉拭子放入10mL裝有玻璃珠的無菌鹽水管中。?將盛有棉拭子的鹽水管在手心用力振蕩100次，再用帶橡皮乳頭的1mL滅菌吸管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢子充分散開。此液為1:10稀釋液。?依次做10倍遞增稀釋，根據(jù)樣品的污染情況，選擇3個(gè)合適的稀釋度。?將溶化并冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基注入滅菌的平皿中，待瓊脂凝固后，倒置于25～28℃溫箱中，3天后開始觀察，共培養(yǎng)觀察一周。將無菌棉拭子蘸取無菌生理鹽水，在每只拖鞋鞋面與腳趾接觸處5游泳池水微生物指標(biāo)細(xì)菌總數(shù)大腸菌群游泳池水微生物指標(biāo)細(xì)菌總數(shù)游泳池水細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.9-2000）取樣液到2只平皿中，每皿1mL；另取樣液1mL到9mL滅菌生理鹽水中作1：10稀釋，取稀釋液到2只平皿中，每皿1mL。最后注入營養(yǎng)瓊脂置36℃培養(yǎng)48h計(jì)數(shù)菌落數(shù)。同時(shí)做空白對照。游泳池水細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.9-20游泳池水細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報(bào)告計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)=平均菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)單位：cfu/mL游泳池水細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報(bào)告計(jì)算公式：游泳池水大腸菌群檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.10-2000）發(fā)酵法濾膜法游泳池水大腸菌群檢驗(yàn)方法

（GB/T18204.10-2游泳池水大腸菌群發(fā)酵法

檢驗(yàn)步驟推測性試驗(yàn)：在2個(gè)裝有50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管內(nèi)各加入100mL水樣，在10支裝有5mL三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管內(nèi)各加入10mL水樣，36℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。證實(shí)試驗(yàn)：自推測性試驗(yàn)陽性管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，接種EMB平板上，置36℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。挑取可疑菌落染色鏡檢，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管做復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，36℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。游泳池水大腸菌群發(fā)酵法

檢驗(yàn)步驟推測性試驗(yàn)：在2個(gè)裝有50m游泳池水大腸菌群濾膜法

檢驗(yàn)步驟水樣過濾，濾膜截留細(xì)菌面向上，貼緊乳糖瓊脂分離培養(yǎng)基，置36℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。典型菌落染色鏡檢挑取可疑菌落染色鏡檢，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管做復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，36℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。游泳池水大腸菌群濾膜法

檢驗(yàn)步驟水樣過濾，濾膜截留細(xì)菌面向上集中空調(diào)系統(tǒng)微生物指標(biāo)送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)、β-溶血性鏈球菌風(fēng)管內(nèi)表面細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)冷卻水、冷凝水中嗜肺軍團(tuán)菌集中空調(diào)系統(tǒng)微生物指標(biāo)送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)、β-溶血性鏈送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（WS394-2012附錄D）送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)：集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)中通過六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器采集的樣品，計(jì)數(shù)在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)35~37℃、48h培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)。以每立方米空氣中菌落形成單位（CFU/m3）報(bào)告。送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（WS394-2012附錄D）送風(fēng)中真菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（WS394-2012附錄E）送風(fēng)中真菌總數(shù)：集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)中通過六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器采集的樣品，計(jì)數(shù)在沙氏瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)28℃、5d培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)。以每立方米空氣中菌落形成單位（CFU/m3）報(bào)告。送風(fēng)中真菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

（WS394-2012附錄E）送風(fēng)中β-溶血性鏈球菌檢驗(yàn)方法

（WS394-2012附錄F）送風(fēng)中β-溶血性鏈球菌：集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)中通過六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器采集的樣品，計(jì)數(shù)在血瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)35~37℃、24h~48h培養(yǎng)所形成的典型菌落數(shù)。以每立方米空氣中菌落形成單位（CFU/m3）報(bào)告。送風(fēng)中β-溶血性鏈球菌檢驗(yàn)方法

（WS394-2012風(fēng)管內(nèi)表面微生物檢驗(yàn)方法

（WS394-2012附錄I）風(fēng)管內(nèi)表面微生物檢測主要包括細(xì)菌總數(shù)和真菌總數(shù)。采樣面積：每一點(diǎn)采樣面積應(yīng)為50cm2。采樣方法：空調(diào)風(fēng)管內(nèi)表面積塵較多時(shí)用刮拭法采樣，積塵較少不適宜刮拭法采樣時(shí)用擦拭法采樣。整個(gè)采樣過程應(yīng)無菌操作。為避免人工采樣對采樣環(huán)境的影響，宜采用機(jī)器人采樣。風(fēng)管內(nèi)表面微生物檢驗(yàn)方法

（WS394-2012附錄I風(fēng)管內(nèi)表面微生物檢驗(yàn)方法

（WS394-2012附錄I）刮拭法：將采集的積塵樣品無菌操作稱取1g，加入到0.01%Tween-80水溶液中，做10倍梯級(jí)稀釋，取適宜稀釋度1mL傾注法接種平皿。