應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡的生物學(xué)標(biāo)記物

應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡的生物學(xué)標(biāo)記物第一部分：神經(jīng)精神狼瘡腦脊液蛋白質(zhì)指紋圖譜及分析目的篩選神經(jīng)精神狼瘡(NPSLE)腦脊液生物標(biāo)志物,并建立相應(yīng)NPSLE疾病的樹形分類模型。材料和方法用MALDI-TOF-MS聯(lián)合WCX磁珠生成腦脊液蛋白質(zhì)譜,比較NPSLE治療前組(39例)與無神經(jīng)精神癥狀的系統(tǒng)性紅斑狼瘡組(non-NPSLE,10例)之間和脊柱側(cè)凸組(17例)的差異蛋白峰；建立NPSLE的樹形分類模型,并用其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累疾病(伴神經(jīng)精神癥狀的自身免疫性疾病5例,腰椎間盤突出13例)進(jìn)行盲法檢驗(yàn)。比較26例NPSLE患者治療前后腦脊液蛋白質(zhì)譜的差異蛋白峰。結(jié)果NPSLE治療前組與非精神神經(jīng)狼瘡組(脊柱側(cè)凸和non-NPSLE)腦脊液蛋白質(zhì)譜共有25個(gè)差異峰,用其中質(zhì)荷比為3237,4312,4514,4550,6688,6378,6822,8349,8595,11744和16230差異峰建立NPSLE樹形分類模型,其對(duì)源數(shù)據(jù)的敏感性92.1%,特異性100%,盲法檢驗(yàn)顯示該模型分類NPSLE的特異性為85.7%。26例NPSLE患者治療前后腦脊液質(zhì)譜有18個(gè)差異峰,其中質(zhì)荷比為4450、6822和8595蛋白峰顯著降低,而在一例難治性NPSLE中,這三個(gè)差異峰并無變化。結(jié)論MALDI-TOF-MS聯(lián)合WCX磁珠可用于腦脊液蛋白質(zhì)組研究,發(fā)現(xiàn)了多個(gè)潛在腦脊液生物標(biāo)志物可能用于NPSLE檢測、診斷和病情評(píng)估,建立了敏感性及特異性均好的NPSLE樹形分類模型。第二部分：神經(jīng)精神狼瘡腦脊液蛋白質(zhì)指紋圖譜差異蛋白峰鑒定研究背景及目的泛素蛋白(ubiquitin)是一種大多數(shù)真核細(xì)胞中76氨基酸蛋白,主要功能是標(biāo)記需要分解掉的蛋白質(zhì),使其被水解。多項(xiàng)研究鑒定腦脊液SELDI-TOF-MS質(zhì)譜的質(zhì)荷比為8.6kda蛋白峰對(duì)應(yīng)泛素蛋白(ubiquitin)。試驗(yàn)擬鑒定腦脊液質(zhì)譜質(zhì)荷比8.6kda的差異蛋白峰為ubiquitin蛋白。材料和方法使用兔抗人ubiquitin抗體進(jìn)行腦脊液免疫沉淀后,分別運(yùn)用MALDI-TOF-MS聯(lián)合WCX磁珠法和免疫印跡法檢測免疫沉淀反應(yīng)后上清及沉淀蛋白。結(jié)果ubiquitin抗體免疫沉淀后上清蛋白質(zhì)譜中質(zhì)荷比8.6kda的蛋白峰強(qiáng)度顯著下降；NPSLE患者CSF原液在免疫印跡中出現(xiàn)分子量介于6kd和14kd的目的條帶,在加入ubiquitin抗體免疫沉淀后上清沒有發(fā)現(xiàn)介于6kd和14kd的目的條帶；抗ubiquitin的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測NPSLE腦脊液中ubiquitin濃度較無神經(jīng)精神癥狀的SLE組明顯升高。結(jié)論腦脊液蛋白質(zhì)譜的質(zhì)荷比8.6kda蛋白峰對(duì)應(yīng)ubiquitin蛋白,神經(jīng)精神ubiquitin蛋白,神經(jīng)精神狼瘡(NPSLE)患者腦脊液泛素蛋白(ubiquitin)水平升高,提示泛素蛋白(ubiquitin)可能成為NPSLE的生物標(biāo)志物。第三部分活動(dòng)性紅斑狼瘡甲基強(qiáng)的松龍沖擊前后的蛋白質(zhì)指紋圖譜及分析目的篩選活動(dòng)性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)甲基強(qiáng)的松龍沖擊治療前后血清生物標(biāo)志物,并建立相應(yīng)SLE甲基強(qiáng)的松龍沖擊前后的樹形分類模型。材料和方法用MALDI-TOF-MS聯(lián)合WCX磁珠生成血清蛋白質(zhì)譜,比較(38例)沖擊治療前后相關(guān)的血清的差異蛋白峰。結(jié)果沖擊治療前有效組和無效組蛋白質(zhì)譜共有8個(gè)差異峰,用其中質(zhì)荷比為4492、9198、5713、8469、10751、3456、9059差異峰建立SLE沖擊治療前的樹形分類模型,其對(duì)數(shù)據(jù)源的敏感性為92.6%、特異性為100.0%；沖擊治療十四天后有效組和無效組蛋白質(zhì)譜共有25個(gè)差異峰,用其中5261、5350、5939、6001、6122、7217、7997、8891、10901等差異峰建立SLE沖擊治療十四天后關(guān)于治療有效組和無效組的樹形分類模型,其對(duì)數(shù)據(jù)源的敏感性為96.3%、特異性為100.0%；SLE治療前組(38例)和后組(38例)蛋白質(zhì)譜共有18個(gè)差異峰,用其中質(zhì)荷比為6958、27186、22844、6743、11404和3054差異峰建立SLE甲強(qiáng)沖擊前后樹形分類模型,其對(duì)源數(shù)據(jù)的敏感性84.2%,特異性89.5%；結(jié)論MALDI-TO