山茱萸炮制過程監(jiān)測及質量控制研究

山茱萸炮制過程監(jiān)測及質量控制研究中藥山茱萸為山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalsSieb.etZucc.的干燥成熟果肉。山茱萸是珍貴的中國草藥,也是現(xiàn)代化醫(yī)療、保健食品等領域的研究熱點。臨床上經(jīng)常以酒山茱萸入藥,它具有滋陰補腎的功效。研究顯示山茱萸炮制后藥效成分(氨基酸、環(huán)烯醚萜等)含量降低,有機酸、5-羥甲基糠醛等成分含量增高。本課題采用傳統(tǒng)鑒定方法及先進的現(xiàn)代分析技術兩種檢測方式,研究山茱萸炮制過程中化學成分含量的變化,以闡明山茱萸炮制的機理,并為提高山茱萸飲片炮制規(guī)范提供依據(jù)。1.山茱萸炮制品質量標準的傳統(tǒng)檢驗方法山茱萸炮制品傳統(tǒng)的鑒定方法,包括鑒定其性狀,對水分、灰分、浸出物含量進行測定,采用薄層色譜方法定性鑒別酒萸肉中的熊果酸和馬錢苷,液相色譜法檢測其中馬錢苷、莫諾苷的含量。選擇三批酒蒸山茱萸樣品對其進行質量評定,結果顯示其性狀合格,三批飲片均含有熊果酸和馬錢苷,水分、灰分和浸出物含量合格,馬錢苷、莫諾苷含量合格,說明三批酒萸肉樣品符合藥典標準。為了進一步驗證炮制后山茱萸的品質,實驗中還測定了各批次酒山茱萸中沒食子酸、多糖、總黃酮、總有機酸、總皂苷的含量,結果表明三批次酒萸肉品質較好,質量均一穩(wěn)定。2.山茱萸炮制過程中的紅外光譜分析利用紅外光譜技術,分析炮制過程中山茱萸紅外光譜的宏觀和指紋特征。以酒蒸法炮制山茱萸藥材,對炮制過程中不同時間的酒萸肉進行紅外光譜信息采集并進行分析。根據(jù)紅外光譜信息,.在3309cm-1,1713cm-1,1028cm-1處有特征吸收,可以推斷山茱萸中存在醇類、有機酸類、酯類等化合物。通過實驗分析,發(fā)現(xiàn)氨基化合物在0～24h內的含量變化呈現(xiàn)出下降的趨勢,而在24～48h之間含量下降趨勢變緩,結合實驗前期對山茱萸炮制過程中理化參數(shù)研究結果,判斷18～24h為最適宜炮制時間。紅外光譜分析快速、方便,特征性強,可以識別山茱萸炮制品中的主體成分,為炮制工藝的優(yōu)化提供科學的依據(jù)。3.GC-MS檢測山茱萸炮制過程中揮發(fā)性成分含量變化探討氣相色譜-質譜(GC-MS)聯(lián)用對山茱萸炮制過程中化學成分含量變化的研究。先用酒蒸法炮制山茱萸,再用甲酯化的方法制備樣品溶液,對炮制過程中0～48h的酒萸肉進行氣質聯(lián)用信息的采集并進行化學成分的含量檢測。采用氣相色譜-質譜技術進行分析,從不同炮制時間的山茱萸樣品中共分離出60多個組分,計算了各色譜峰的相對含量,并從中鑒定了35種成分。主要成分為對羥基苯甲酸甲酯、檸檬酸三甲酯、1-羥基均丙三羧酸三甲酯、壬二酸二甲酯、肉豆蔻酸甲酯、3-(4-羥苯基)-2-丙烯酸甲酯、4-甲基-1,6-庚二烯-4-醇、9-十六碳烯酸甲基酯、棕櫚酸甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯等。氣質聯(lián)用法應用快速、方便,特征性強,可以識別炮制前后山茱萸中的主要成分,闡明山茱萸的炮制機理,為炮制工藝的優(yōu)化提供科學的依據(jù)。4.山茱萸炮制過程中HPLC和UFLC-TOF-MS動態(tài)分析建立HPLC和UFLC-TOF-MS方法,研究比較山茱萸炮制過程中化學成分的動態(tài)過程。HPLC采用KromasilC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-水(7：93)等度洗脫測定5-羥甲基糠醛,乙腈-水(15：85)等度洗脫測定馬錢苷；JFLC-TOF-MS:乙腈-0.01%醋酸水溶液梯度洗脫分析山茱萸提取物；ShimadzuUFLC液相系統(tǒng),ABSCIEXTripleTOFTM5600質譜儀；負離子檢測模式。通過高效液相色譜和液相質譜聯(lián)用技術,發(fā)現(xiàn)不同炮制時間下山茱萸中5-羥甲基糠醛、馬錢苷、槲皮素等物質含量均有顯著變化。高效液相色譜法在檢測山茱萸中常見成分時作用較大,而在質譜負離子檢出模式下,山茱萸中其