SN-T3767.24-2014出口食品中轉(zhuǎn)基因成分環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測方法

中華人民共和國出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T3767.24—2014出口食品中轉(zhuǎn)基因成分環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測方法第24部分：水稻LLRICE62品系Loop-mediatedisothermalamplificationdetectionmethodforgeneticallymodifiedcomponentsinfoodforexport—Part24:RiceLLRICE622014-01-13發(fā)布總I第3部分：玉米Bt-11品系；第4部分：玉米Bt176品系；第6部分：玉米MIR162品系；第7部分：玉米MIR604品系；第8部分：玉米MON810品系；第10部分：玉米MON88017品系；第13部分：玉米3272品系；第14部分：玉米59122品系；第16部分：大豆A5547-127品系；第20部分：水稻Bt-63品系；第21部分：水稻KF6品系；第22部分：水稻KF8品系；第23部分：水稻KMD品系；第24部分：水稻LLRICE62品系；第25部分：水稻M12品系；第26部分：水稻T1C-19品系；第27部分：水稻T2A-1品系；第28部分：小麥B736-1品系；第30部分：油菜RT-73品系。本部分為SN/T3767的第24部分。本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。石磊。1出口食品中轉(zhuǎn)基因成分環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測方法第24部分：水稻LLRICE62品系1范圍SN/T3767的本部分規(guī)定了稻谷和大米中轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62品系特異性的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增本方法的定性檢測低限為0.5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))。2規(guī)范性引用文件SN/T3767.2—2014出口食品中轉(zhuǎn)基因成分環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測方法第2部分：篩3防污染措施4抽樣與制樣6LAMP檢測方法26.1.2顯色液顯色原理6.2儀器和設(shè)備6.3試劑和材料6.3.410ThermolPol緩沖液：含200mmol/LTris-HCl(pH值為8.8)、100mmol/L硫酸銨、引物1(F3),外引物2(B3),內(nèi)引物1(FIP)、內(nèi)引物2(BIP)和環(huán)引物1(FLP)、環(huán)引物2(內(nèi)引物1(FIP,5’-3’):AGCTGGCGTAATAGCGAAGAGAAACCAGGTGGACTAAAAGT內(nèi)引物2(BIP,5’-3’):GCGAAAGGGGGATGTGCTGTGACTGGGAAAACCCTG環(huán)引物1(FLP.5’-3’):CAAGGCGATTAAGTTGGGTAAC環(huán)引物2(BLP,5’-3’):GCCCGCACCGATTATTTATG外引物1(F3,5’-3’):TGTAACACGCACACTCAC外引物2(B3,5’-3’):CTGGCCGTCGTTTTACAA6.4.1陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和空白對(duì)照的設(shè)置3采用不含有待測基因序列的植物基因組DNA為模板。采用含有待測基因序列的植物DNA作為模板。LAMP反應(yīng)體系見表1。每個(gè)樣品各做2個(gè)平行管。加樣時(shí)應(yīng)使樣品DNA溶液完全加入反應(yīng)液表1水稻LLRICE62品系LAMP反應(yīng)體系組分工作液濃度加樣量/μL反應(yīng)體系終濃度ThermolPol緩沖液環(huán)引物1(FLP)環(huán)引物2(BLP)外引物1(F3)外引物2(B3)內(nèi)引物1(FIP)內(nèi)引物2(BIP)40pmol/L4甜菜堿40.8mmol/L硫酸鎂16mmol/LBstDNA聚合酶8U/μl10.32U/μL28ng/μL水46.5質(zhì)量控制7結(jié)果判斷和確證7.2待檢樣品2個(gè)平行樣反應(yīng)管中液體至少1管呈綠色，同時(shí)各種實(shí)驗(yàn)對(duì)照結(jié)果正常，可判斷該樣品8結(jié)果表述5(資料性附錄)轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62品系基因序列1TGTAACACGCACACTCACCTACTTCCAAAGATTTAGCGATGTCTTACTGC51TAACGGGTGCATCGTCTATCAATAAAAACCAGGTGGACTAAAAGTATAAAA.2引物堿基序列及構(gòu)成BIP:5’-GCGAAAGGGGGATGTGCTGTGACTGGGAAAACCCTG-3’FLP;5’-C