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中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準SN/T3767.24—2014出口食品中轉(zhuǎn)基因成分環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(LAMP)檢測方法第24部分:水稻LLRICE62品系Loop-mediatedisothermalamplificationdetectionmethodforgeneticallymodifiedcomponentsinfoodforexport—Part24:RiceLLRICE622014-01-13發(fā)布總I第3部分:玉米Bt-11品系;第4部分:玉米Bt176品系;第6部分:玉米MIR162品系;第7部分:玉米MIR604品系;第8部分:玉米MON810品系;第10部分:玉米MON88017品系;第13部分:玉米3272品系;第14部分:玉米59122品系;第16部分:大豆A5547-127品系;第20部分:水稻Bt-63品系;第21部分:水稻KF6品系;第22部分:水稻KF8品系;第23部分:水稻KMD品系;第24部分:水稻LLRICE62品系;第25部分:水稻M12品系;第26部分:水稻T1C-19品系;第27部分:水稻T2A-1品系;第28部分:小麥B736-1品系;第30部分:油菜RT-73品系。本部分為SN/T3767的第24部分。本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。石磊。1出口食品中轉(zhuǎn)基因成分環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(LAMP)檢測方法第24部分:水稻LLRICE62品系1范圍SN/T3767的本部分規(guī)定了稻谷和大米中轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62品系特異性的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增本方法的定性檢測低限為0.5%(質(zhì)量分數(shù))。2規(guī)范性引用文件SN/T3767.2—2014出口食品中轉(zhuǎn)基因成分環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(LAMP)檢測方法第2部分:篩3防污染措施4抽樣與制樣6LAMP檢測方法26.1.2顯色液顯色原理6.2儀器和設(shè)備6.3試劑和材料6.3.410ThermolPol緩沖液:含200mmol/LTris-HCl(pH值為8.8)、100mmol/L硫酸銨、引物1(F3),外引物2(B3),內(nèi)引物1(FIP)、內(nèi)引物2(BIP)和環(huán)引物1(FLP)、環(huán)引物2(內(nèi)引物1(FIP,5’-3’):AGCTGGCGTAATAGCGAAGAGAAACCAGGTGGACTAAAAGT內(nèi)引物2(BIP,5’-3’):GCGAAAGGGGGATGTGCTGTGACTGGGAAAACCCTG環(huán)引物1(FLP.5’-3’):CAAGGCGATTAAGTTGGGTAAC環(huán)引物2(BLP,5’-3’):GCCCGCACCGATTATTTATG外引物1(F3,5’-3’):TGTAACACGCACACTCAC外引物2(B3,5’-3’):CTGGCCGTCGTTTTACAA6.4.1陰性對照、陽性對照和空白對照的設(shè)置3采用不含有待測基因序列的植物基因組DNA為模板。采用含有待測基因序列的植物DNA作為模板。LAMP反應(yīng)體系見表1。每個樣品各做2個平行管。加樣時應(yīng)使樣品DNA溶液完全加入反應(yīng)液表1水稻LLRICE62品系LAMP反應(yīng)體系組分工作液濃度加樣量/μL反應(yīng)體系終濃度ThermolPol緩沖液環(huán)引物1(FLP)環(huán)引物2(BLP)外引物1(F3)外引物2(B3)內(nèi)引物1(FIP)內(nèi)引物2(BIP)40pmol/L4甜菜堿40.8mmol/L硫酸鎂16mmol/LBstDNA聚合酶8U/μl10.32U/μL28ng/μL水46.5質(zhì)量控制7結(jié)果判斷和確證7.2待檢樣品2個平行樣反應(yīng)管中液體至少1管呈綠色,同時各種實驗對照結(jié)果正常,可判斷該樣品8結(jié)果表述5(資料性附錄)轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62品系基因序列1TGTAACACGCACACTCACCTACTTCCAAAGATTTAGCGATGTCTTACTGC51TAACGGGTGCATCGTCTATCAATAAAAACCAGGTGGACTAAAAGTATAAAA.2引物堿基序列及構(gòu)成BIP:5’-GCGAAAGGGGGATGTGCTGTGACTGGGAAAACCCTG-3’FLP;5’-C
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