藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析培訓課件

藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析一、線性試驗主成分含量測定以測定濃度為100%，50%~120%之間選取5個點即可。

溶出（釋放）度測定以釋放量的10%～120%間選取5個點即可。

雜質含量用雜質對照品準確測定以雜質限度為100%，50%~120%之間選取5個點即可。2藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析測定結果：

1）闡述如何看待截距和斜率、如何應用。

2）誤差在哪里，應用時的注意事項。

3）為什么沒有不成線性的？通常C、H、O、N結構，紫外監(jiān)測器決定。

個別化學鍵所致。梯度洗脫時，有時會出現(xiàn)不成線性。

4）都成線性、為何還要做？最小二乘法的原理知曉。3藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析唑來磷酸結構式4藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析引申使用：

1）有關物質測定歸一化法和自身對照法的相互妙用。

2）緩釋制劑溶出度測定，對照品濃度設定為中間濃度。舉例說明。

3）回收率試驗為何做80%~120%即可？亦及樣品濃度與對照品濃度接近到何等程度的理解。

4）國內只注重相關系數(shù)，不注重截距。5藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析二、精密度試驗重復性試驗：連續(xù)進樣6次。

中間精密度試驗和重現(xiàn)性試驗通過“耐用性試驗中的溶液穩(wěn)定性試驗”來體現(xiàn)。

濃度極低時才會不理想，加大進樣量。

色譜峰形極為重要，對稱性、柱效等參數(shù)。加大柱溫、增加流動相中有機相比例，使被測物質峰盡快出峰。6藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析三、準確度試驗用回收率來衡量作法：在80%~120%間選擇3點或5點，原因是由外標一點法決定的。

已知雜質、且有雜質對照品的，可采用加入法，即加樣回收率來評價。

一般情況下，只要空白輔料無干擾，回收率均是良好的！7藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析四、專屬性有關物質為主，其他檢測項目（含量）基本上均參照有關物質。

有關物質的驗證，采用中間體和降解產物（確認結構后人工合成）來驗證與主成分的分離。

8藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析系統(tǒng)適用性試驗的配制方法：

在100％濃度的主成分溶液中加入1%濃度的雜質對照品，以模擬樣品中有可能存在的狀態(tài)。

介紹配制方法——先配制雜質貯備液，再用供試品溶液（或濃的對照品溶液）來稀釋，簡便、易行！9藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析專屬性試驗驗證圖譜10藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析存在問題——配制相同濃度，測定樣品時，主成分峰驟然加大，將雜質峰覆蓋。

強破壞試驗的目的：

驗證藥品在遭遇了極端的氣候環(huán)境條件下產生的雜質，在所建立的色譜條件下是否能夠分離、測定。11藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析●檢測波長的確定

涉及到各被檢測物質在該波長下的響應因子是否相同，即所謂重量校正因子的問題。（f=A雜質/A被測成分）

選取主成分與各雜質具有相同紫外吸收的波長（f=1.0）。

選取各雜質紫外吸收大于主成分紫外吸收的波長（f>1.0），這樣可更加嚴格控制雜質的限度。

如選取各雜質紫外吸收小于主成分紫外吸收的波長，應必須加入重量校正因子（f<1.0），否則將得到錯誤的判斷。12藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析介紹該項檢測的由來和歷史背景

要看主峰里是否有雜質，如何判斷？但需注意DAD檢測器的局限性，介紹“土辦法”！

結果：目前從來沒有推翻現(xiàn)行色譜條件的。意義在哪里。如何應用，拿到只是“走形式”？13藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析最小峰面積的設定

●

其設定，不是絕對值，而是相對值。

●英國藥典中有明確的說明：凡有關物質的檢測采用HPLC法測定時，均規(guī)定舍棄對照溶液主峰面積幾分之幾的峰面積。普通樣品測定時，通常為1/10~1/20（即相當于樣品測定濃度的0.1%~0.05%）。如規(guī)定雜質限度為1.0%，對照溶液峰面積為10000，那么，最小峰面積可考慮設定為1000~500左右。新藥穩(wěn)定性考核時，可設定到0.01%的最小峰面積。

●原料藥銷售與購買的合同中，為確保雙方達成一致意見，此點應予以重視。14藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析強力破壞試驗

●水破壞取原料適量，加水溶解后，在90℃放置24小時。

●氧化破壞取原料適量，用5%過氧化氫溶液溶解后，在90℃放置24小時。

●強堿破壞取原料適量，用1mol/L氫氧化鈉溶液溶解后，在90℃放置24小時。

●強酸破壞取原料適量，加1mol/L鹽酸溶液溶解后，在90℃放置24小時。

●高溫破壞取原料適量，依據(jù)各自品種的熔點不同，在高溫下破壞至外觀性狀改變

●強光破壞取原料適量，置紫外燈下照射48小時。15藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析四、檢測限●

信噪比的三倍——純屬“紙上談兵”，實際測定中根本用不上。

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是相對值，不是絕對值。是相對于供試品溶液濃度的多少分之一而言，一般至少要在5000倍以上。16藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析有關物質、含量與自身對照三者濃度的關系17藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析積分參數(shù)的設定●積分參數(shù)的設定是非常重要的。由斜率(Slope)、峰寬(Width)、最小峰面積(MinArea)組成?！癫捎米陨韺φ辗〞r，對照溶液與供試品溶液必須在同一斜率、峰寬下進行積分計算?！窆┰嚻啡芤鹤钚》迕娣e的設定將直接導致測定結果。設定得太小，會導致很多小峰甚至是基線漂移的小峰均被積分出作為雜質峰，從而導致雜質峰面積增加，易判斷為不合格；如設定得過大，又將反映不出雜質情況。18藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析方法學認證中溶液穩(wěn)定性的全面判定不能單從主成分入手！還要注意所有組分的百分比變化，絕對值變化！20藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析雜質-1（為已知雜質）青蒿琥酯雜質-2雜質-3新雜質時間(h)峰面積百分比峰面積百分比峰面積百分比峰面積百分比均未檢出0148110.14%1036960099.26%575110.55%50320.05%0.5360280.35%1014652598.89%557860.54%223310.22%1595200.57%1038238898.58%580980.55%317170.30%1.5689800.66%1034454198.45%595210.57%338980.32%2789480.75%1036038698.33%591720.56%380650.36%3917080.86%1043288898.16%591850.56%4500020.42%RSD0.96％21藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析流速、柱溫與溶劑的選擇●在測定時通常調節(jié)流速使主成分保留時間稍長些，且使主成分峰不拖尾即可?！裰鶞貙Ψ蛛x效果的影響雖有一定的影響，但不甚顯著，如有柱溫箱，通常設定不超過35℃?！袢軇┑倪x擇應測定樣品溶液在該溶劑中的穩(wěn)定性來衡量，盡量勿選擇揮發(fā)性強的溶劑；同時應保證對照溶液的主成分峰面積精密度良好。22藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析質量標準中制訂有關物質的原則●采用雜質對照品法、用于降解產物的準確測定，如氫氯噻嗪、對乙酰氨基酚等?！癫捎脧娖茐脑囼炂茐某鲭s質。如中國藥典中的氧氟沙星所有品種，均在HPLC法的色譜條件下擬定了：取供試品溶液，置紫外燈下（254nm）照射4小時以上，使產生的緊鄰主峰前的雜質峰與主峰的分離度應符合規(guī)定?！癫徊捎萌魏畏绞?。23藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析典型強破壞試驗圖譜24藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析藥品含量測定方法的設計——原料藥原料藥:對于組份單一的原料藥,首選容量法測定含量強調：（1）供試品的取用量應滿足滴定精度的要求（消耗滴定液約20ml）；（2）滴定終點的判斷要明確，如選用指示劑法，應考慮其變色敏銳，提供滴定曲線，并用電位法校準其終點顏色。（3）為排除因加入其它試劑或混入雜質對測定結果的影響，或便于剩余滴定法的計算，可采用“將滴定的結果用空白試驗校正”的辦法；（4）最后要給出滴定度（采用四位有效數(shù)字）。25藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析容量法測定含量要注意參加反應的應是藥物分子活性部分，而不應是次要的酸根或堿基部分。如鹽酸氨溴索，有研究者采用氫氧化鈉滴定液測定其含量，事實上這種方法測定的是其中鹽酸的含量，由于其成鹽工藝中的酸、堿配比不當時，可嚴重影響成品酸堿度，故測定結果并不能代表其活性成分有機堿的含量。應采用非水滴定法，以無水冰醋酸為溶劑屏蔽掉鹽酸的干擾，用高氯酸滴定其有機堿的含量。高氯酸非水滴定法因適應性廣（適用于有機弱堿及其鹽類）在化學原料藥的含量測定中較為常用。26藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析如用容量法不適宜時，可考慮選用HPLC法，尤其在有關物質干擾，或多組份物質時，具有特殊優(yōu)勢。一般不選用UV法，尤其不首選“吸收系數(shù)法”定量，不選用末端吸收峰作測定波長；須用UV法時，可采用不受儀器及其它變化影響的“對照品比較法”定量，測定溶液的吸收度宜在0.3～0.7間。元素測定法如定氮法，在其它方法均不適宜時可采用，但因不能反映化合物含量的變化情況，此法不可用于穩(wěn)定性考察中。27藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析藥品含量測定方法的設計——制劑應考慮輔料等的干擾，首選方法一般為HPLC法，在有關物質、輔料不干擾的情況下，也可選用UV法或原料藥項下的容量法。復方制劑首選HPLC法。28藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析藥品含量測定方法的設計——驗證訂入質量標準的含量測定法不同于一般質量考察的方法，須經(jīng)過嚴格的方法學驗證。容量分析法的驗證：①精密度：用原料藥精制品（含量>99.5%）考察方法精密度，平行試驗5個樣本的RSD≤0.2%；②準確度：以測定原料精制品的回收率計算，應在99.7%～100.3%之間（n＝5,RSD≤0.1%）；③滴定終點確定的依據(jù)：包括滴定曲線的繪制，如用指示劑法確定終點，應用電位法校準終點顏色，提供指示劑顏色與電位變化情況的對比結果；29藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析④耐用性：考察測定條件（供試液穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時間等）有微小變動時，測定結果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應在方法中注明。HPLC法的驗證：①精密度：RSD≤2%（n＝5）；②準確度：用于制劑時，要考察輔料的影響，將一定量藥物加到按處方比例配制的輔料中（為標示量的80%～120%）制成高、中、低三個劑量，混合均勻后，每個劑量取三份樣品，按擬定方法測定回收率，應在98%～102%之間（n＝9,RSD≤2%）。30藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析③線性范圍：用已知含量的精制品配制一系列濃度的溶液（n＝5～7），用濃度C對峰面積A或峰高h或被測物的響應值之比進行回歸處理，線性方程的相關系數(shù)r≥0.9990，截距越小越好，并提供線性關系圖；④專屬性：輔料、有關物質或降解產物峰對主藥峰應無干擾；⑤耐用性：考察測定條件（供試液穩(wěn)定性、流動相組成和pH值、不同品牌或批號的同類色譜柱、柱溫、流速、樣品提取次數(shù)、時間等）有微小變動時，測定結果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應在方法中注明；⑥靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。31藥物分析方法學驗證中各項指標的深度剖析UV法的驗證：①精密度：RSD≤1%（n＝5）；②準確度：方法同HPLC法，回收率應在98%～102