2021年分子生物學(xué)zuq題庫

問答題：

1衰老與基因構(gòu)造與功能變化關(guān)于，涉及到：（1）生長停滯；（2）端粒縮短現(xiàn)象；（3）DNA損傷累積與修復(fù)能力減退；（4）基因調(diào)控能力減退。

2超螺旋生物學(xué)意義：（1）超螺旋DNA比松馳型DNA更緊密，使DNA分子體積變得更小，對其在細胞包裝過程更為有利；（2）超螺旋能影響雙螺旋解鏈程序，因而影響DNA分子與其他分子（如酶、蛋白質(zhì)）之間互相作用。

3原核與真核生物學(xué)mRNA區(qū)別：

原核：（1）往往是多順反子，即每分子mRNA帶有幾種蛋白質(zhì)遺傳信息（來自幾種構(gòu)造基因）。（2）5端無帽子構(gòu)造，3端普通無多聚A尾巴。（3）普通沒有修飾堿基，即此類mRNA分子鏈完全不被修飾。

真核：（1）5端有帽子構(gòu)造（2）3端絕大多數(shù)均帶有多聚腺苷酸尾巴，其長度為20-200個腺苷酸。（3）分子中也許有修飾堿基，重要有甲基化，（4）分子中有編碼區(qū)與非編碼區(qū)。

4tRNA共同特性：

（?。﹩捂溞》肿?，含73-93個核苷酸。（2）具有諸多稀有堿基或修飾堿基。（3）5端總是磷酸化，5末端核苷酸往往是pG。（4）3端是CPCPAOH序列。（5）分子中約半數(shù)堿基通過鏈內(nèi)堿基配對互相結(jié)合，開成雙螺旋，從而構(gòu)成其二級構(gòu)造，開頭類似三葉草。（6）三級構(gòu)造是倒L型。

5核酶分類：（1）異體催化剪切型，如RNaseP；（2）自體催化剪切型，如植物類病毒等；（3）內(nèi)含子自我剪接型，如四膜蟲大核26SrRNA前體。

6hnRNA變成有活性成熟mRNA加工過程：

（1）5端加帽；（2）3端加尾（3）內(nèi)含子切除和外顯子拼接；（4）分子內(nèi)部甲基化修飾作用，（5）核苷酸序列編輯作用。

7反義RNA及其功能：

堿基序列正好與故意義mRNA互補RNA稱為反意義或反義RNA，又稱調(diào)節(jié)RNA，此類RNA是單鏈RNA，可與mRNA配對結(jié)合形成雙鏈，最后抑制mRNA作為模板進行翻譯。這是其重要調(diào)控功能，還可作為DNA復(fù)制抑制因子，與引物RNA互補結(jié)合抑制DNA復(fù)制，以及在轉(zhuǎn)錄水平上與mRNA5末端互補，制止RNA合成轉(zhuǎn)錄。

8病毒基因組分型：（1）雙鏈DNA（2）單鏈正股DNA（3）雙鏈RNA（4）單鏈負股RNA（5）單鏈正股RNA

9病毒基因組構(gòu)造與功能特點：

（1）不同病毒基因組大小相差較大；（2）不同病毒基因組可以是不同構(gòu)造核酸。（3）病毒基因組有持續(xù)也有不持續(xù)；（4）病毒基因組編碼序列不不大于90%；（5）單倍體基因組，（6）基因有持續(xù)和間斷，（7）有關(guān)基因叢集；（8）基因重疊（9）病毒基因組具有不規(guī)則構(gòu)造基因，重要類型有：a幾種構(gòu)造基因編碼區(qū)無間隔；bmRNA沒有5端帽構(gòu)造；c構(gòu)造基因自身沒有翻譯起始序列。

10原核生物基因組構(gòu)造功能特點：

（1）基因組普通僅由一條環(huán)狀雙鏈DNA分子構(gòu)成。

（2）基因組中只有1個復(fù)制起點。

（3）具備操縱子構(gòu)造。（4）編碼順序普通不會重疊。（5）基因是持續(xù)，無內(nèi)含子，因而轉(zhuǎn)錄后不需要剪切。（6）編碼區(qū)在基因組中所占比例（約占50%）遠遠不不大于真核基因組，但又遠遠不大于病毒基因組。（7）基因組中重復(fù)序列很少（8）具備編碼同工酶基因。（9）細菌基因組中存在著可移動DNA序列，涉及插入序列和轉(zhuǎn)座子。

（10）在DNA分子中具備各種功能辨認區(qū)域。

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真核生物基因組構(gòu)造與功能特點：

（1）每一種真核生物均有一定染色體數(shù)目，除了配子為單倍體外，體細胞普通為雙倍體。（2）真核基因組遠遠不不大于原核生物基因組，構(gòu)造復(fù)雜，基因數(shù)龐大。（3）都由一種構(gòu)造基因與有關(guān)調(diào)控區(qū)構(gòu)成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。（4）具有大量重復(fù)順序。（5）基因組內(nèi)非編碼順序占90%以上。（6）真核基因是斷裂基因，（7）功能有關(guān)基因構(gòu)成各種基因家族，它們可串聯(lián)在一起，亦可相距很遠，但雖然串聯(lián)在一起成簇基因也是分別轉(zhuǎn)錄。（8）真核生物基因組中也存在某些可移動遺傳因素，這些DNA順序并無明顯生物學(xué)功能，似乎為自己目而組織，故有自私DNA之稱。

12依照同源性限度，重要分五種類型：（1）核酸序列相似，事實上是多拷貝基因；（2）核酸序列高度同源，如人類生長激素基因家族；（3）編碼產(chǎn)物具備同源功能區(qū)；（4）編碼產(chǎn)物具備小段保守基序；（5）基因超家族。

13DNA復(fù)制基本過程：（1）DNA雙鏈解開；（2）RNA引物合成；（3）DNA鏈延長；（4）切除引物、彌補缺口、連接相鄰DNA片段；（5）切除和修復(fù)錯配堿基。

14DＮＡ損傷方式：（１）轉(zhuǎn)換：由一種嘧啶變成另一種嘧啶，或種嘌呤變成另一種嘌呤；（２）顛換：嘧呤與嘌呤互換。轉(zhuǎn)換和顛換只引起ＤＮＡ局部變化，而ＤＮＡ其他某些構(gòu)造不受影響，故稱為點突變。（３）丟失或插入一種或一段核苷酸，也許使下游ＤＮＡ編碼發(fā)生變化，此稱為移碼突變（４）鏈內(nèi)或鏈間發(fā)生共價連結(jié)。

１５ＤＮＡ損傷修復(fù)：（１）光修復(fù)（２）切除修復(fù)（３）重組修復(fù)（４）ＳＯＳ修復(fù)

１６切除修復(fù)機制：通過一種特殊內(nèi)切核酸酶將ＤＮＡ分子中損傷某些切除，同步以另一條完整ＤＮＡ鏈為模板，由ＤＮＡ聚合酶Ｉ催化彌補被切除某些空隙，再由ＤＮＡ連接酶封口，使ＤＮＡ恢復(fù)正常構(gòu)造。

１７大腸桿菌一種需糖基化酶切除修復(fù)過程：（１）ＤＮＡ糖基化酶辨認受損或錯誤堿基，水解糖苷鍵，釋出游離堿基，在ＤＮＡ單鏈上形成無嘌呤或嘧啶空位，稱為ＡＰ部位；（２）特異ＡＰ內(nèi)切核酸酶在ＡＰ部位切開磷酸二酯鍵，再由外切核酸酶切下ＡＰ部位核苷酸；（３）ＤＮＡ聚合酶Ｉ修補缺口；（４）ＤＮＡ連接酶封口，完畢修復(fù)過程。

１８逆轉(zhuǎn)錄酶功能：（１）具備ＲＮＡ指引ＤＮＡ聚合酶活性，能和其他ＤＮＡ聚合酶同樣沿５－３方向合成ＤＮＡ，并需要引物提供３－ＯＨ；（２）具備ＲＮＡ酶Ｈ活性，能特異性水解ＲＮＡ－ＤＮＡ雜交體上ＲＮＡ；（３）具備ＤＮＡ指引ＤＮＡ聚合酶活性，以逆轉(zhuǎn)錄合成單鏈ＤＮＡ為模板合成互補ＤＮＡ鏈。

１９遺傳密碼特點：（１）起始密碼子和終結(jié)密碼子；（２）方向性：５－３；（３）持續(xù)性（４）簡并性；（５）通用性（６）擺動性。

２０常用擺動現(xiàn)象（１）反密碼子第一位常浮現(xiàn)稀有堿基次黃嘌呤，它可以與密碼子第三位Ａ、Ｃ或Ｕ配對；（２）反密碼子中Ｕ可以與密碼子中Ａ或Ｇ配對；（３）反密碼子中Ｃ可以與密碼子中C、G或U配對。

21核糖體在蛋白質(zhì)生物合成中作用：（1）容納mRNA通道，（2）可以結(jié)合起始因子，延長因子及終結(jié)因子等參加蛋白質(zhì)生物合成因子；（3）具備結(jié)合氨酰-tRNA部位（A位或P位）；（4）具備轉(zhuǎn)達肽酶活性，催化肽鍵形成；（5）大亞基上具備延長因子依賴GTP酶活性，它也許為肽提供能量。

22嚴(yán)謹(jǐn)反映機制：在氨基酸缺少時，游離核糖體與空載tRNA增長，在ATP存在下，產(chǎn)生pppGpp（鳥苷-5-磷酸）和ppGpp(鳥苷-4-磷酸)。后者與RNA聚合酶形成ppGpp-RNA聚合酶復(fù)合物，進而使RNA聚合酶構(gòu)象變化，活性減少，rRNA和rRNA合成減少或停止。

22葡萄糖效應(yīng)及機制：細菌普通優(yōu)先以葡萄糖作為能源，當(dāng)培養(yǎng)環(huán)境中有葡萄糖時，雖然加入乳糖、阿拉伯糖等其他糖，細菌也不運用這些糖，不產(chǎn)生代謝這些糖酶，直到葡萄糖消耗完畢，代謝其他糖酶才會依照相應(yīng)糖與否存在而被誘導(dǎo)產(chǎn)生，這種現(xiàn)象稱為——這是由于葡萄糖代謝產(chǎn)物能抑制細胞腺苷酸環(huán)化酶和激活磷酸二酯酶活性，成果使細胞人cAMP水平減少。當(dāng)葡萄糖耗盡時，細胞內(nèi)cAMP水平升高，即可通過CAP調(diào)控其他操縱子表達。

23真核生物基因表達在DNA水平調(diào)控方式：（1）染色質(zhì)丟失（2）基因擴增（3）基因重排（4）DNA甲基化（5）染色質(zhì)構(gòu)造對基因表達調(diào)控作用。

24反式因子重要特點：（1）普通具備三個功能構(gòu)造域：DNA辨認結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域、結(jié)合其他蛋白結(jié)合域。這些功能區(qū)具有幾十到幾百個氨基酸殘基（2）能辨認并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中順式作用元件。（3）對基因表達有正性和負性調(diào)控作用，即渡海和阻遏基因表達。

25反式作用因子激活方式及作用方式：激活方式（1）表達式調(diào)節(jié)；（2）共價修飾；（3）配體結(jié)合（4）蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)互相作用。作用方式（1）成環(huán)（2）扭曲（3）滑動（4）Oozing。

26mRNA選取剪接方式：（1）外顯子選?。?）內(nèi)含子選?。?）互斥外顯子（4）內(nèi)部剪接位點。

27細胞通訊方式：（1）細胞間隙連接（2）膜表面分子接觸通訊（3）化學(xué)信號通訊。

28受體發(fā)揮其辨認和信號轉(zhuǎn)換作用時特點：（1）高度特異性（2）高親和力（3）可飽合性（4）可逆性。

29MAPK作為細胞內(nèi)核心信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，如何發(fā)揮作用：

MAPK由其上游分子MAPKK和MAPKKK通過逐級磷酸化反映而激活。細胞受到生長因子或其他因素刺激后，MAPKK可將AMPK一種Thr磷酸化，從而使MAPK轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚誀顟B(tài)。詳細體現(xiàn)為各自逐級磷酸化，MAPK被激活后來，可轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)。在核內(nèi)，它可使某些轉(zhuǎn)錄因子發(fā)生磷酸化，從而變化細胞內(nèi)基因表達狀態(tài)。此外，它也可以使某些其他酶發(fā)生磷酸化使之活性發(fā)生變化。

30細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)信號基本路線和方式可以表達為：

小分子信使?jié)舛然蚍植甲兓?/p>

外源信號—受體—大分子信使化學(xué)修飾

效應(yīng)分子構(gòu)象變化—細胞應(yīng)答反映

蛋白質(zhì)互相作用31G蛋白偶聯(lián)受體信號傳遞基本過程涉及：

（1）

配體與受體結(jié)合；（2）受體激活G蛋白（3）G蛋白激活或抑抑細胞中效應(yīng)分子；（4）效應(yīng)分子變化細胞內(nèi)小分子信使含量與分布；（5）細胞內(nèi)小分子信使作用于相應(yīng)靶分子，使之構(gòu)象變化，從而變化細胞代謝過程及基因表達等功能。

32G蛋白循環(huán)或活化過程：

當(dāng)物理或化學(xué)信號刺激受體時，受體活化，與G蛋白結(jié)合并使之發(fā)生構(gòu)象變化。A亞基與GDP親和力下降，結(jié)合GDP為GTP所取代。A亞基結(jié)合了GTP后即與BR亞基發(fā)生解離，成為活化狀態(tài)A亞基?；罨薃亞基此時可以作用于下游各種效應(yīng)分子。這種活化狀態(tài)將始終持續(xù)到GTP被A亞基自身具備GTP酶水解為GDP。

33小分子細胞內(nèi)信使普通具備三個特點：

（1）不位于能量代謝途徑中心；（2）在細胞中濃度或分布可以迅速地變化；（3）作為變構(gòu)效應(yīng)劑作用于相應(yīng)靶分子，已知靶分子重要為各種蛋白激酶。

34表皮生長因子受體（EGFR）介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑

EGFR——Ras——MAPK

（1）

受體二聚體形成及其磷酸化；（2）募集接頭蛋白Grb2：（3）調(diào)控分子SOS活化（4）低分子量G蛋白Ras活化；（5）MAPK級聯(lián)激活；（6）轉(zhuǎn)錄因子磷酸化及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。

35r——干擾素受體介導(dǎo)細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑：

r-干擾素與受體結(jié)合后來。也可以導(dǎo)致受體二聚體化，二聚體化體可以激活JAL-STAT系統(tǒng)，后者將干擾素刺激信號傳入核內(nèi)。

JAK為一種存在于胞漿中蛋白酪氨酸激酶，它活化后可使干擾素受體磷酸化。STAT可以通過其SH2構(gòu)造域辨認磷酸化受體并與之結(jié)合，然后STAT分子亦發(fā)生酪氨酸磷酸化，酪氨酸磷酸化STAT形成二聚體并進入胞核。二聚體STAT分子作為有活性轉(zhuǎn)錄因子，影響有關(guān)基因表達，進而變化靶細胞增殖與分化。

36Klenow片段用途：（1）補齊雙鏈DNA3末端；（2）通過補齊3端使3末端標(biāo)記；（3）在cDNA克隆中，第二股鏈合成。（4）DNA序列分析。

37幾種常用修飾酶：

（1）DNA聚合酶I：這個酶除有聚合酶活性外，尚有3-5及5-3核酸外切酶活性。由于它具備5-3核酸外切酶活性，當(dāng)用缺口平移法標(biāo)記DNA探針時，慣用DNA聚合酶I。

（2）逆轉(zhuǎn)錄酶：逆轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成DAN，合成時需要4種脫氧核苷酸及引物，合成方向為5-3延伸，無3-5外切酶活性。廣泛用于mRNA為模板合成cDNA，構(gòu)建cDNA文庫。

（3）T4DNA連接酶：催化雙鏈DNA一端3-OH與另一雙鏈DNA5端磷酸根形成3、5-磷酸二酯鍵，使具備相似粘性末端或平端DNA末端連接起來。

（4）堿性磷酸酶：去除DNA或RNA5端磷酸根，制備載體時，用堿性磷酸酶解決后，可防止載體自身連接，提高重組效率。

（5）末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶：（TdT）：將脫氧核苷酸加到DNA3-OH上，重要用于探針標(biāo)記；或者在載體和待克隆片段上形成同聚物尾，以便于進行連接。

（6）TaqDNA聚合酶和其他耐熱DNA聚合酶。

38作為克隆載體質(zhì)粒具備如下特點：

（1）分子量相對較小，能在細菌內(nèi)穩(wěn)定存在，有較高拷貝數(shù)。（2）具備一種以上遺傳標(biāo)志，便于對宿主細胞進行選取，（3）具備各種限制酶單一切點，稱為多克隆位點（MCS）。

39粘性質(zhì)粒特點：（1）具有質(zhì)粒抗藥性標(biāo)記（2）帶有入噬菌體粘性末端（cos區(qū)）；（3）具備一種或各種限制酶酶切位點；（4）其自身分子量小，容納40kb左右DNA片段；（5）由于非重組粘性質(zhì)粒很小，不能在體外包裝，因而體外包裝重要是重組體，有助于后來篩選。

40M31噬菌體長處：（1）噬菌體顆粒中所具有是單鏈DNA，該單鏈DNA可作為模板用于DNA序列分析；（2）運用單鏈M13克隆可制備成單鏈DNA探針用于雜交分析，檢測DNA或RNA，或者作為基因定點誘變載體。

41大腸桿菌與哺乳動物表達載體不同：

大腸桿菌：具有復(fù)制位點、抗性基因、克隆位點，可導(dǎo)入大腸桿菌，與克隆載體同樣，表達載體中具有表達系統(tǒng)元件，即啟動子-核糖體結(jié)合位點-克隆位點-轉(zhuǎn)錄終結(jié)信號。

哺乳動物：真核表達載體中具有一套真核表達元件：；啟動子/增強子-克隆位點-終結(jié)信號和加poly(A)信號。

42重組DNA目和基本過程：

目：（1）克隆某個特定基因；（2）建立基因組文庫、cDNA文庫，（3）將特定基因片段進行亞克隆以進行DNA序列測定；（4）構(gòu)建表達載體以便在特定宿主細胞中表達某個基因。

過程：（1）制備目基因和有關(guān)載體（2）將目基因和關(guān)于載體進行連接（3）將重組DNA導(dǎo)入受體細胞（4）DNA重組體篩選和鑒定（5）DNA重組體擴增、表達和其他研究。

43cＤＮＡ合成過程：先從細胞中提取高質(zhì)量mＲＮＡ。因mＲＮA有poly(A)尾巴，可用12~18寡聚d(T)片段作為引物，加入4種dNTP,AMV(或MMLV)逆轉(zhuǎn)錄酶催化第一股鏈合成。然后用RNaseH去掉mRNA，剩余單鏈DNA3端往往有自發(fā)回折（因素不明）形成發(fā)夾構(gòu)造，正好可以作為合成第二條DNA鏈引物；由T4DNA聚合酶催化第二股鏈合成，即得到雙鏈cDNA混合體，采用S1核酸酶解決，可得到平端雙鏈cDNA。

44目基因篩選與鑒定：

一方面篩選出轉(zhuǎn)化菌；然后篩選出帶有重組體克??；最后是對DNA重組體進行鑒定。辦法：遺傳學(xué)辦法（插入滅活法、a-互補）；免疫學(xué)辦法；核酸雜交法；PCR技術(shù)；酶切鑒定。

45真核細胞轉(zhuǎn)染基本辦法：（1）磷酸鈣共沉淀法（2）電穿孔法（3）DEAE-葡萄糖法（4）脂質(zhì)體介導(dǎo)基因?qū)耄?）顯微注射法

46在大腸桿菌中表達外源基因，重要考慮如下基本要素：

（1）目基因如果來自真核細胞必要是cDNA，由于大腸桿菌沒有剪切內(nèi)含子功能。（2）從真核基因轉(zhuǎn)錄mRNA缺少結(jié)合細菌核糖體SD序列，因而，cDNA起始密碼子（ATG）上游某些（5端非編碼區(qū)）是無用，必要除去。（3）所用表達載體必要是大腸桿菌表達載體。具有大腸桿菌RNA聚合酶所能辨認啟動子和SD序列。

47寡核苷酸介導(dǎo)誘變技術(shù)環(huán)節(jié)：

（1）將目DNA片段插入M13噬菌體載體；（2）以重組噬菌體制備單鏈DNA；（3）設(shè)計并合成誘變寡核苷酸引物；（4）誘變寡核苷酸引物與靶單鏈DNA雜交；（5）運用Klenow片段在雜交寡核苷酸上延伸；（6）用T4DNA連接酶將新合成雜合雙鏈DNA連接成雙鏈閉環(huán)DNA分子；（7）轉(zhuǎn)化宿主細菌；（8）篩選具有誘變DNA片段重組噬菌體；（9）以具有誘變DNA重組噬菌體制備單鏈DNA；（10）測序證明M13噬菌體DNA帶有目的誘變而無其他誘變。最后從重組M13噬菌體RF型DNA中回收誘變DNA片段，克隆到其他恰當(dāng)載體中，對誘變DNA片段進行進一步研究。

48雙脫氧鏈終結(jié)法基本原理：和模板互補結(jié)合引物在DNA聚合酶作用下發(fā)生互補鏈延伸反映，反映體系中2，3-雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與底物脫氧核苷三磷酸競爭結(jié)合于延伸互補鏈末端，導(dǎo)致延伸終結(jié)。由于產(chǎn)生一系列分別終結(jié)于A、G、C、T位置不同大小DNA片段，應(yīng)用高辨別率聚丙烯酰胺凝膠電泳可辨別僅相差一種核苷酸20-500堿基DNA片段，結(jié)合放射自顯影技術(shù)，便能直接讀出模板DNA待測序列。雙脫氧終結(jié)法測定DNA序列片段普通克隆于M13或質(zhì)粒pUC載體，運用多克隆位點兩側(cè)通用引物進行測序反映。較長鏈待測DNA片段可采用隨機法、嵌套缺失法和引物延伸法進行序列測定。

Maxam-Gilbert法基本原理：采用化學(xué)試劑解決末端放射標(biāo)記DNＡ單鏈片段，導(dǎo)致堿基特異性切割，由此產(chǎn)生一組具不同長度ＤＮＡ鏈反映混合物，經(jīng)凝膠電泳按分子大小分離和放射自顯影，直接讀出待測ＤＮＡ核苷酸順序。

激光測序技術(shù)：應(yīng)用熒光基團標(biāo)記引物或４種ddＮＴＰ，采用雙脫氧鏈終結(jié)法原理進行測序反映，雙脫氧核苷酸終結(jié)產(chǎn)物經(jīng)熒光激發(fā)產(chǎn)生信號，通過計算機自動讀出被測序列。４９溫度對ＤＮＡ復(fù)性（雜交）影響：

溫度過高不利于核酸復(fù)性，而溫度過低，少數(shù)堿基配對形成局部雙鏈不易解離，適當(dāng)復(fù)性溫度是較Ｔm值低２５℃。在０度時雜交進行非常緩慢，隨著溫度升高，雜交率也明顯增長，當(dāng)溫度比Ｔm值低２０－２５度時，ＤＮＡ－ＤＮＡ雜交達到最高雜交率。但在更高溫度狀況下，雙鏈分子逐漸趨向解鏈，當(dāng)溫度達到Ｔm－５度時雜交率即非常低。（１）錯配率第增長１％，Ｔm值應(yīng)相應(yīng)下降１０－１５度；（２）ＲＮＡ／ＤＮＡ雜交體穩(wěn)定性較ＤＮＡ／ＤＮＡ穩(wěn)定性高，Ｔm值應(yīng)相應(yīng)增長１０－１５度；（３）ＲＮＡ／ＲＮＡ雜交體Ｔm值應(yīng)相應(yīng)增長２０－２５度，因而，采用ＲＮＡ探針時，加入適量甲酰胺以減少Ｔm值是必須；（４）寡核苷酸探針堿基數(shù)很少，可以采用下式計算寡核苷酸探針Ｔm值：Ｔm=4*(G+C)+2*(A+T)；寡核苷酸探針雜交反映普通在低于Ｔm值５度下進行。

５０慣用Ｓouthern轉(zhuǎn)膜辦法：（１）毛細管虹吸印跡法：（２）電轉(zhuǎn)印法（３）真空轉(zhuǎn)移法

５１Ｓouthern\Northern印跡法區(qū)別：

（１）

靶核酸：Ｎ所檢測靶核酸是ＲＮＡ，Ｓ是ＤＮＡ（２）ＲＮＡ電泳：ＲＮＡ樣品依其分子量大小在變性膠中進行分離，凝膠中需加入變性劑，防止ＲＮＡ分子形成二級構(gòu)造，維持其單鏈線性狀態(tài)。（３）轉(zhuǎn)膜：電泳結(jié)束后，不需要再進行變性和中和，直接采用毛細管虹吸法將膠中ＲＮＡ轉(zhuǎn)移到膜上，也可采用電轉(zhuǎn)移或真空轉(zhuǎn)移法。

５２核酸原位雜交環(huán)節(jié)：（１）組織或細胞固定（２）組織細胞雜交前預(yù)解決（３）探針選取和標(biāo)記（４）雜交（５）雜交成果檢測。

５３ＲＮＡ酶保護分析法（ＲＰＡ）基本程序環(huán)節(jié)：（１）制備待測ＲＮＡ（２）ＲＮＡ探針標(biāo)記（３）雜交（４）除去單鏈ＲＮＡ（５）電泳分析

５４探針及標(biāo)記物種類：

探針（１）cＤＮＡ探針（２）基因組ＤＮＡ探針（３）寡核苷酸探針（４）ＲＮＡ探針。

標(biāo)記物：（１）核素標(biāo)記物（２）非核素標(biāo)記物：半抗原、配體、熒光素、化學(xué)發(fā)光探針。

５５核酸體外標(biāo)記法分為化學(xué)法和酶法：（１）化學(xué)法：運用標(biāo)記物分子上活性基團與探針分子上基團（如磷酸基團）發(fā)生化學(xué)反映將標(biāo)記物直接結(jié)合到探針分子上。（２）酶法（酶促標(biāo)記法）：將標(biāo)記物預(yù)先標(biāo)記在核酸苷酸（ＮＴＰ或dＮＴＰ）分子上，然后運用酶促反映將標(biāo)記核苷酸分子摻入到探針分子中去，或?qū)⒑塑账岱肿由蠘?biāo)記基團互換到探針分子上。

５６酶促標(biāo)記法：（１）缺口平移法；（２）隨機引物法（３）ＰＣＲ標(biāo)記法（４）末端標(biāo)記法

５７缺口平移法原理：運用恰當(dāng)濃度ＤＮaseＩ在ＤＮＡ雙鏈上隨機切割單鏈，導(dǎo)致單鏈切口。切口處產(chǎn)生一種５末端和一種３末端，３末端即可作為引物，在大腸桿菌ＤＮＡ聚合酶Ｉ５－３ＤＮＡ聚合酶活性催化下，以互補ＤＮＡ單鏈為模板，依次將dNTP連接到切口３端羥基上，合成新ＤＮＡ單鏈；同步ＤＮＡ聚合酶Ｉ５－３核酸外切酶活性在切口處將舊鏈人５末端逐漸切除，新合成鏈不斷延伸，從而使原ＤＮＡ分子上某些核苷酸殘基被標(biāo)記核苷酸所取代。

５８ＰＣＲ基本過程：（１）變性：通過加熱至９５度左右，使ＤＮＡ雙螺旋氫鍵斷裂，形成單鏈ＤＮＡ，作為反映模板。（２）退火：將溫度降至引物Ｔm值左右或如下，引物與ＤＮＡ模板互補區(qū)域結(jié)合，形成雜交鏈。（３）延伸：當(dāng)反映體系溫度升至７０度左右時，ＴaqDNA聚合酶催化以引物為起始點５－３ＤＮＡ鏈延伸反映，形成新生ＤＮＡ鏈。

５９ＰＣＲ引物設(shè)計基本規(guī)定：（１）引物長度普通為１５－３０個核苷酸。（２）引物中堿基構(gòu)成盡量隨機分布，避免浮現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積現(xiàn)象。（３）引物自身不應(yīng)存在互補序列，特別應(yīng)避免折疊成發(fā)夾構(gòu)造。（４）兩個引物之間不應(yīng)存在互補序列，特別應(yīng)避免３端互補重疊。（５）引物與非特異擴增區(qū)序列同源性不要超過７０％，引物３末端持續(xù)８個堿基在待擴增區(qū)以外不能有完全互補序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴增（６）引物３端堿基是引起延伸起點，因而一定要與模板ＤＮＡ配對（７）引物與模板結(jié)合時，引物５端最多可以游離十幾種堿基而不影響ＰＣＲ反映進行。

６０ＰＣＲ技術(shù)要類型：（１）筑巢ＰＣＲ（２）共享引物ＰＣＲ（３）多重ＰＣＲ（４）不對稱ＰＣＲ（５）錨定ＰＣＲ（６）反向ＰＣＲ（７）彩色ＰＣＲ（８）原位ＰＣＲ（９）定量ＰＣＲ（１０）差別顯示ＰＣＲ（１１）重組ＰＣＲ。

６１ＰＣＲ反映體系涉及：核酸模板、引物、ＴaqＤＮＡ聚合酶、緩沖液、Ｍg2+、dＮＴＰs、反映溫度與循環(huán)次數(shù)。

６２轉(zhuǎn)基因動物及基本原理：轉(zhuǎn)基因動物是指用人工辦法將外源基因?qū)牖蛘系交蚪M內(nèi)，并能穩(wěn)定傳代一類動物?；驹恚簩⒛炕颍ɑ蚧蚪M片段）用顯微注射等辦法注入實驗動物受精卵或著床前胚胎細胞中，使目基因整合到基因組中，然后將此受精卵或著床前胚胎細胞再植入受體動物園輸卵管（或子宮）中，使其發(fā)育成攜帶有外源基因轉(zhuǎn)基因動物。導(dǎo)入基因辦法有顯微注射法、胚胎干細胞法、逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法、精子載體法。

轉(zhuǎn)基因動物中外源ＤＮＡ檢測：（１）染色體及基因水平檢測：斑點雜交、Ｓouthern雜交和ＰＣＲ分析、原位雜交等；（２）轉(zhuǎn)錄水平檢測：運用Northern雜交、RNase保護分析及ＲＴ－ＰＣＲ辦法檢測轉(zhuǎn)基因mRNA存在及表達水平。（３）蛋白質(zhì)水平檢測，采用Western印跡分析法。６３轉(zhuǎn)基因動物應(yīng)用：（１）對基因組織或階段特異表達研究（２）通過研究轉(zhuǎn)入外源基因后新表型，可以發(fā)現(xiàn)基因新功能；（３）導(dǎo)入外源基因后，由于基因隨機插入，也許會導(dǎo)致內(nèi)源基因突變，對這些突變表型進行分析，可以發(fā)現(xiàn)新基因（４）可用于只在胚胎期才表達基因構(gòu)造和功能研究（５）建立研究外源基因表達、調(diào)控動物模型（６）對遺傳性疾病研究（７）建立人類疾病動物模型，（８）動物新品種哺育（９）基因產(chǎn)品制備（１０）在免疫學(xué)中，可用于對免疫機制、免疫有關(guān)疾病研究及建立免疫性疾病動物模型等。

６４轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)路線：（１）選取及獲得外源目基因，（２）受體細胞培養(yǎng)，（３）選用恰當(dāng)轉(zhuǎn)基因辦法將目基因?qū)胧荏w細胞（４）將轉(zhuǎn)化細胞進行恰當(dāng)培養(yǎng)（５）篩選陽性轉(zhuǎn)化細胞（６）培植陽性轉(zhuǎn)化植株（７）轉(zhuǎn)基因植株鑒定。

６５轉(zhuǎn)基因植物在醫(yī)學(xué)上應(yīng)用：（１）可成為新疫苗來源，植物病毒也成為人類疫苗也許來源（２）由于植物病毒對動物不致病，因而可運用植物病毒表達抗原蛋白片段，以誘導(dǎo)哺乳動物免疫系統(tǒng)發(fā)生反映。（３）還可產(chǎn)生單抗，作為化療藥物靶向載體。

６６基因打靶必備條件：（１）胚胎干細胞：ＥＳ細胞特點：能在體外培養(yǎng)，并保存發(fā)育全能性。體外培養(yǎng)要維持細胞分裂增殖與正常核型，同步抑制細胞分化。（２）打靶載體：a、neo陽性篩選標(biāo)志：b、ＨＳＶ－tk陰性篩選標(biāo)志：

６７構(gòu)建打靶載體基本過程：（１）獲得目基因（待敲除基因）同源片段，將此ＤＮＡ片段克隆到普通質(zhì)粒載體中；（２）從重組質(zhì)粒中切除目基因大某些同源ＤＮＡ序列，只留某些序列在線性質(zhì)粒載體兩端；（３）將neo基因克隆到帶有目基因同源順序線性質(zhì)粒中，使之位于殘留目基因同源順序中間；（４）在目基因同源順序外側(cè)線性化重組質(zhì)粒載體，將ＨＳＶ－tk基因克隆到此線性載體中。

６８ＤＮＡ芯片技術(shù)應(yīng)用：（１）ＤＮＡ序列測定（２）基因表達分析（３）基因組研究（４）基因診斷（５）藥物研究與開發(fā)（藥物篩選、新藥發(fā)現(xiàn)、合理用藥、中草藥鑒定和真假藥辨別）

６９引起ＤＮＡ一級構(gòu)造變異誘變劑作用機制：（１）堿基類似物誘發(fā)突變（２）變化ＤＮＡ化學(xué)構(gòu)造（３）結(jié)合到ＤＮＡ分子上誘發(fā)移碼突變（４）紫外線及其其他射線引起ＤＮＡ分子變化。

７０突變類型：點突變（轉(zhuǎn)換和顛換）、缺失（一種堿基或一段核苷酸鏈從ＤＮＡ大分子上消失）、插入（一種本來沒有堿基或一段本來沒有核苷酸鏈插入ＤＮＡ大分子中間）、倒位（ＤＮＡ鏈內(nèi)重組，使其中一段方向反置）

７１突變所引起遺傳效應(yīng)涉及：（１）遺傳密碼變化：錯義突變、無義突變、同義突變、移碼突變；（２）對mRNA剪接影響（3）蛋白質(zhì)肽鏈中片段缺失。

72病毒癌基因與細胞癌基因不同之處：

（１）

病毒癌基因與細胞癌基因相比，普通丟失了兩端某些序列。（2）病毒癌基因沒有內(nèi)含子，而細胞癌基因中普通具有內(nèi)含子或插入序列。（3）病毒癌基因與同源細胞原癌基因在外顯子序列中也有微小差別。（4）病毒癌基因常會浮現(xiàn)堿基取代或堿基缺失等突變，而細胞癌基因則較少發(fā)現(xiàn)這一類突變。

73癌基因家族：src\ras\myc\sis\erb\myb.

74RB抑癌基因機制：RB蛋白在靜止細胞中與E2F結(jié)合成復(fù)合物，抑制E2F轉(zhuǎn)錄活性；P105-RB通過抑制各種原癌基因如c-myc\c-fos表達而抑制細胞增殖。

75P53抑制細胞生長機制：（1）P53蛋白可抑制cyclinA表達，故P53基因變異或缺失，可使cyclinA過量表達而增進細胞在DNA復(fù)制不完全時即進入M期而致癌，（2）P53能阻礙DNA聚合酶與DNA復(fù)制起始復(fù)合物結(jié)合而抑制DNA復(fù)制啟動，進而制止DNA復(fù)制。（3）P53酸性氨基酸末端構(gòu)造區(qū)具備轉(zhuǎn)錄激活作用，它能激活某些抑制細胞分裂基因而間接抑制細胞增殖。（4）正常P53還能抑制c-myc\ras基因或腺病毒E1A對細胞轉(zhuǎn)化作用。

76癌基因活化致癌重要機制：

（1）原癌基因點突變（2）原癌基因獲得外源啟動子而激活（3）原癌基因因甲基化限度減少而激活（4）原癌基因拷貝數(shù)增長（5）基因易位或重排使原癌基因激活

77腫瘤發(fā)生多基因協(xié)同作用：該假說以為細胞癌變是多環(huán)節(jié)、多重打擊復(fù)雜過程，在腫瘤發(fā)生發(fā)展各階段，至少需要兩個或各種不同癌有關(guān)基因異常激活或失活，才有也許引起細胞癌變。

直腸結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程可分6個階段：上皮細胞過度增生、初期腺瘤、中期腺瘤、晚期腺瘤、腺癌和轉(zhuǎn)移癌。從正常上皮細胞到上皮細胞過度增生也許涉及FAP基因異常（突變或失活），從初期腺瘤到中期腺瘤涉及K-ras異常（突變），從中期腺瘤到晚期腺瘤涉及DCC基因異常（如丟失），從晚期腺瘤到直腸結(jié)腸癌涉及P53基因異常（丟失），癌轉(zhuǎn)移還涉及到其他基因激活與失活，如nm23基因表達異常、血管生長因子基因表達在腫瘤細胞表達Ras刺激下增高等。

78基因診斷中慣用分子生物學(xué)技術(shù)（1）核酸分子雜交（2）聚合酶鏈反就（PCR）（3）單鏈構(gòu)象多態(tài)性檢測（4）限制酶酶譜分析（5）DNA序列測定（6）DNA芯片技術(shù)

79DNA指紋特點：（1）一種DNA指紋探針可同步檢測十幾種、甚至幾十個位點變異，（2）具備高度特異性（3）具備穩(wěn)定遺傳性（4）DNA指紋圖譜具備體細胞穩(wěn)定性。

80基因診斷辦法涉及：（1）基因突變檢測；（2）多態(tài)性分析（3）基因表達檢測（4）外源DNA檢測。

81基因診斷方略：一、遺傳性疾?。海?）直接診斷方略，即直接檢測導(dǎo)致遺傳病發(fā)生各種基因突變；（2）間接診斷方略，即尋找具備基因缺陷染色體并判斷被檢者與否具備這條染色體。

二、感染性疾?。横槍Σ≡w基因序列，設(shè)計特異性探針進行分子雜交或合成特異寡核苷酸引物進行PCR擴增，即能對該疾病作出明確病原體診斷；三腫瘤：（1）檢測腫瘤有關(guān)基因突變及表達異常（2）檢測腫瘤有關(guān)病毒基因（3）檢測腫瘤標(biāo)記物基因。四、法醫(yī)：應(yīng)用DNA多態(tài)性分析、DNA指紋技術(shù)。82基因置換條件：（1）對導(dǎo)入基因及其產(chǎn)物有詳盡理解；（2）外來基因能有效地導(dǎo)入靶細胞（3）導(dǎo)入基因能在靶細胞中長期穩(wěn)定駐留（4）導(dǎo)入基因能有適度水平表達（5）基因?qū)朕k法及所用載體對宿主細胞安全無害。

83選取轉(zhuǎn)移基因靶細胞時，普通考慮如下幾種因素（1）不論是直接體內(nèi)還是間接體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移，選取目基因表達組織細胞，最佳是組織特異性細胞，（2）細胞較易獲得，縣城生命周期較長。（3）離體細胞較易受外源遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)化。（4）離體細胞經(jīng)轉(zhuǎn)染和一定期間培養(yǎng)后再植回體內(nèi)仍較易成活。

當(dāng)前慣用靶細胞：造血細胞、皮膚成纖維細胞、肝細胞、血管內(nèi)皮細胞、淋巴細胞、肌肉細胞、腫瘤細胞。

84反義RNA在基因治療中意義和需解決問題及前景：

通過反義RNA結(jié)合細胞中特異mRNA而調(diào)控其翻譯，可望按劑量來調(diào)節(jié)特定基因表達或功能。問題是：（1）專一性轉(zhuǎn)移問題（2）反義RNA進入靶細胞前降解問題。（3）受體介導(dǎo)反義RNA轉(zhuǎn)移技術(shù)。

前景：（1）安全性高（2）反義RNA設(shè)計和制備以便（3）具備劑量調(diào)節(jié)效應(yīng)（4）能直接作用于某些RNA病毒。

分子生物學(xué)要點總結(jié)名詞解釋：

1分子生物學(xué)：是一門從分子水平研究生命現(xiàn)象、生命本質(zhì)、生命活動及其規(guī)律科學(xué)。

2醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)：是分子生物學(xué)一種重要分支，又是一門新興交叉學(xué)科。它是從分子水平上研究人體在正常和疾病狀態(tài)下生命活動及其規(guī)律，從分子水平開展人類疾病防止、診斷和治療研究一門科學(xué)。

3酶工程：過去重要是通過生物化學(xué)辦法從各種材料中提取、制備酶制劑。當(dāng)前重要應(yīng)用基因工程技術(shù)制取酶制劑。

4蛋白質(zhì)工程：過去重要是采用化學(xué)辦法對純化蛋白質(zhì)進行構(gòu)造改造，制備出有特定功能蛋白質(zhì)。當(dāng)前重要應(yīng)用基因工程技術(shù)，從改造目基因構(gòu)造入手，在受體細胞中表達不同構(gòu)造蛋白質(zhì)。

5微生物工程：又稱發(fā)酵工程是運用微生物特定性狀，使微生物產(chǎn)生有用物質(zhì)或直接用于工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)。

6DNA甲基化：DNA一級構(gòu)造中，有某些堿基可以通過加上一種甲基而被修飾，稱為DNA甲基化。

7CG島：在整個基因組中存在某些成簇、穩(wěn)定非甲基化CG，此類CG稱為CG島。

8信使RNA：從DNA分子轉(zhuǎn)錄RNA分子中，有一類可作為蛋白質(zhì)生物合成模板，稱為信使RNA。

9順反子：由構(gòu)造基因轉(zhuǎn)錄生成RNA序列亦稱為順反子。

10帽子構(gòu)造：5端第1個核苷酸是甲基化鳥嘌呤核苷酸，它以5端三磷酸酯鍵與第2個核苷酸5端相連，而不是普通3、5磷酸二酯鍵。

11核酶：在沒有任何蛋白質(zhì)（酶）存在條件下，某些RNA分子也能催化其自身或其他RNA分子進行化學(xué)反映，即某些RNA具備酶樣催化活性，此類具備催化活力RNA被命名為核酶。

12蛋白質(zhì)變性：蛋白質(zhì)分子愛到物理化學(xué)因素（如加熱、紫外線、高壓、有機溶劑、酸、堿等）影響時，可使維持空間構(gòu)造次級鍵斷裂，性質(zhì)變化，生物活性喪失，稱為蛋白質(zhì)變性。

13：蛋白質(zhì)復(fù)性：導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性因素除去后，某些蛋白質(zhì)又可重新回答天然構(gòu)象，體現(xiàn)出天然蛋白質(zhì)生物活性，稱為蛋白質(zhì)復(fù)性。

14基因：是核酸分子中貯存遺傳信息遺傳單位，是指貯存有功能蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA序列信息及表達這些信息所必須所有核苷酸序列。

15基因組：細胞或生物體中，一套完整單倍體遺傳物質(zhì)總和稱為基因組。

16操縱子：是指數(shù)個功能上有關(guān)聯(lián)構(gòu)造基因串聯(lián)在一起，構(gòu)成信息區(qū)，連同其上游調(diào)控區(qū)（涉及啟動子和操縱基因）以及下游轉(zhuǎn)錄終結(jié)信號所構(gòu)成基因表達單位，所轉(zhuǎn)錄RNA為多順反子。

轉(zhuǎn)錄單位：儲存ＲＮＡ和蛋白質(zhì)肽鏈序列信息構(gòu)造基因與指引轉(zhuǎn)錄起始部位序列（啟動子）和轉(zhuǎn)錄終結(jié)序列（終結(jié)子）共同構(gòu)成轉(zhuǎn)錄單位。

17啟動子：是RNA聚合酶結(jié)合區(qū)域，操縱基因事實上不是一種基因，而是一段能被特異阻遏蛋白辨認和結(jié)合DNA序列。18質(zhì)粒：是細菌細胞內(nèi)攜帶染色體外DNA分子，是共價閉合環(huán)狀DNA分子，能獨立進行復(fù)制。

19質(zhì)粒不相容性：具備相似復(fù)制起始位點和分派區(qū)兩種質(zhì)粒不能共存于一種宿主菌，這種現(xiàn)象稱為質(zhì)粒不相容性。

20轉(zhuǎn)位因子：即可移動基因成分，是指可以在一種DNA分子內(nèi)部或兩個DNA分子之間移動DNA片段。

20自私DNA：核生物基因組中也存在某些可移動遺傳因素，這些DNA順序并無明顯生物學(xué)功能，似乎為自己目而組織，故有自私DNA之稱。

21自殺基因：將某些細菌、病毒和真菌中特異性基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入腫瘤細胞，此基因編碼特異性酶類能將原先對細胞無毒或毒性極低前體物質(zhì)在腫瘤細胞內(nèi)代謝成毒性物質(zhì)，達到殺死腫瘤目，此類前體轉(zhuǎn)移酶基因稱為——

22斷裂基因：真核生物構(gòu)造基因是不持續(xù)，編碼氨基酸序列被非編碼序列所打斷，因而被稱為——在編碼序列之間序列稱為內(nèi)含子，被分隔開編碼序列稱為外顯子。

23順式調(diào)控元件（順式作用元件）：是指那些與構(gòu)造基因表達調(diào)控有關(guān)、可以被基因調(diào)控蛋白特異性辨認和結(jié)合DNA序列。

24反式作用因子：某些蛋白質(zhì)因子可通過結(jié)合順式作用元件而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性，這些蛋白質(zhì)因子稱為反式作用因子。

真核細胞內(nèi)具有大量序列特異性DNA結(jié)合蛋白，其中某些蛋白重要功能是使基因開放或關(guān)閉，稱為反式作用因子，簡稱反式因子。

25啟動子：是RNA聚合酶特異性辨認和結(jié)合DNA序列。

26上游啟動子元件：是TATA盒上游某些特定DNA序列，反式作用因子可與這些元件結(jié)合，通過調(diào)節(jié)TATA因子與TATA盒結(jié)合、RNA聚合酶與啟動子結(jié)合及轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物形成（轉(zhuǎn)達錄起始因子與RNA聚合酶結(jié)合）來調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄效率。

27反映元件：某些信息分子受體被細胞外信息分子激活后，能與特異DNA序列結(jié)合，調(diào)控基因表達。這種特異DNA序列事實上也是順式元件，由于能介導(dǎo)基因?qū)毎饽撤N信號產(chǎn)生反映，被稱為反映元件。

28增強子：是一段DNA序列，其中具有各種能被反式作用因子辨認與結(jié)合順式作用元件。

29負增強子（沉默子）；增強子內(nèi)含負調(diào)控序列，稱為——

30基因家族：指核苷酸序列或編碼產(chǎn)物構(gòu)造具備一定限度同源性一組基因。

31基因超家族：是指一組由多基因家族及單基因構(gòu)成更大基因家族。

32逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子：真核生物中某些中度重復(fù)序列轉(zhuǎn)移成分則與普通細菌中轉(zhuǎn)移成分不同，要先轉(zhuǎn)錄成RNA，再逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA，然后重新整合到基因組中，這種逆轉(zhuǎn)錄旁路轉(zhuǎn)移成分稱為——

33端粒：以線性染色體形式存在真核基因組DNA末端均有一種特殊構(gòu)造，稱——，功能重要有保護線性DNA完整復(fù)制，保護染色體末端及決定細胞壽命等。

34反向重復(fù)順序：是指兩個順序相似拷貝在DNA鏈上呈反向排列。其中一種形式是兩個拷貝反向串聯(lián)在一起，中間沒有間隔順序，這種構(gòu)造亦稱回文構(gòu)造。

35RFLP技術(shù)：通過限制酶酶切片段長度多態(tài)性來揭示DNA堿基構(gòu)成不同技術(shù)稱為限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)，簡稱——。

36遺傳圖：又稱連鎖圖，是以具備遺傳多態(tài)性遺傳標(biāo)記作為“位標(biāo)”遺傳學(xué)距離為“圖標(biāo)”基因組圖。

37物理圖：是以一段已知核苷酸序列DNA片段為“位標(biāo)”，以DNA實際長度（Mb或kb）作為圖距基因組圖。

３８光修復(fù)：生物體內(nèi)有一種光復(fù)活酶，被光激活后能運用光反提供能量使紫外線照射引起嘧淀二聚體分開，恢復(fù)本來兩個核苷酸，稱為光修復(fù)。

３９逆轉(zhuǎn)錄：是指以ＲＮＡ為模板，運用宿主細胞中４種dＮＴＰ為原料，在引物３端以５－３方向合成與ＲＮＡ互補ＤＮＡ鏈過程，此過程與中心法則方向相反，故稱為——

４０SD序列：AUG密碼子上游8~13個堿基處存在一種稱為SD序列構(gòu)造，該序列與小亞基中16SrRNA3端序列互補，當(dāng)mRNA與小亞基結(jié)合時，SD序列與16SrRNA3端互補序列配對結(jié)合，起始密碼準(zhǔn)擬定位于翻譯起始部位。

41基因表達：是指生物基因組中構(gòu)造基因所攜帶遺傳信息通過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成特定蛋白質(zhì)，進而發(fā)揮其特定生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)全過程。

41aa基因工程：將基因進行克隆，并運用克隆基因表達、制備特定蛋白或多肽產(chǎn)物，或定向改造細胞乃至生物個體特性所用辦法及有關(guān)工作統(tǒng)稱為——

41b分子克?。褐苽銬NA片段，并通過載體將其導(dǎo)入受體細胞，在受體細胞中復(fù)制、擴增，以獲得單一DNA分子大量拷貝。

42DNA重組：不同來源DNA分子可以通過末端共價連接（磷酸二酯鍵）而形成重新組合DNA分子。這一過程稱為——

43管家基因：有些在生命全過程都是必須，且在一種生物個體幾乎所有細胞中持續(xù)表達基因，普通被稱為——

44誘導(dǎo)表達：有些基因表達極易愛環(huán)境變化影響，在特定環(huán)境信號刺激下，有些基因表達表面為開放或增強，則這種表達方式稱為——

45嚴(yán)謹(jǐn)反映：細菌在缺少氨基酸環(huán)境中，RNA聚合酶活性減少，RNA（rRNA,tRNA）合成減少或停止，這種現(xiàn)象稱為——

46衰減子：細菌中mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)翻譯合成是偶聯(lián)在一起。這一特點使細菌某些操縱子特殊序列可以在轉(zhuǎn)錄過程中控制轉(zhuǎn)錄水平。這些特殊序列稱為——又稱弱化子，位于某些操縱子中第一種構(gòu)造基因之前，是一段能削弱轉(zhuǎn)錄作用于順序。

47組合式基因調(diào)控：每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可發(fā)揮增進或抑制作用，但反式作用因子對基因表達調(diào)控不是由單一因子完畢，而是幾種因子組合，發(fā)揮特定作用，稱為——

48細胞通訊：細胞間辨認、聯(lián)系和互相作用過程稱為——49信號轉(zhuǎn)導(dǎo)：針對外源信號所發(fā)生細胞應(yīng)答反映全過程稱為——

50調(diào)控結(jié)合元件：細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子有許多都是蛋白質(zhì)，其分子中存在著某些特殊構(gòu)造域，它們是信號分子互相辨認部位，信號分子通過這些特殊構(gòu)造域辨認和互相作用而有序銜接，形成不同信號傳遞鏈或稱為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，這些構(gòu)造域稱為——

51第二信使：G蛋白活化之后唧可激活其下游效應(yīng)分子，如腺苷酸環(huán)化酶和磷脂酶C等。這些效應(yīng)分子隨后可催化某些分子產(chǎn)生或濃度和分布變化。這些小分子可以繼續(xù)向下游傳遞信息，因而被稱為細胞內(nèi)小分子信使，亦稱為第二信使。已知細胞內(nèi)小分子信使涉及cAMP、cGMP、甘油二酯（DAG）、IP3和Ca2+等等。

52DNA重組：不同來源DNA分子可以通過末端共價連接（磷酸二酯鍵）而形成重新組合DNA分子，這一過程稱為——

53限制酶：是一類內(nèi)切核酸酶，因而又稱為限制性內(nèi)切核酸酶。此類酶能辨認雙鏈DNA內(nèi)部特異位點并且裂解磷酸二酯鍵。

54同功異源酶：來源不同酶，但能辨認和切割同一位點，這些酶稱為——

55同尾酶：有些限制酶辨認序列不同，但是產(chǎn)生相似粘性末端，這些酶為——

56Klenow片段：用枯草桿菌蛋白酶可將DNA聚合酶I裂解為大小兩個片段，大片段分子量為76kD，這個片段也稱為——

57入噬菌體：是感染細菌病毒，其基因組是線性雙鏈DNA分子，當(dāng)其感染宿主細胞并將基因整合到細胞后，基因組DNA變成環(huán)狀，用于分子克隆中載體。

58基因文庫：采用限制酶將基因組DNA切成片段，每一DNA片段都與一種載體分子拼接成重組DNA，將所有重組DNA分子都引入宿主細胞并進行擴增，得到分子克隆混合體，這樣一種混合體稱為——

59cDNA文庫：將cDNA混合體與載體進行連接，使每一種cDNA分子都與一種載體分子拼接成重組DNA。將所有重組DNA分子都導(dǎo)入宿主細胞并進行擴增，得到分子克隆混合體，這樣一種混合體稱為—

60cDNＡ：是指體外用逆轉(zhuǎn)錄酶催化，以mＲＮＡ為模板合成互補ＤＮＡ。

６１轉(zhuǎn)化：是指將質(zhì)粒或其他外源DNA導(dǎo)入處在感受態(tài)宿主細胞。并使其獲得新表型過程。

62轉(zhuǎn)導(dǎo)：由噬菌體和細胞病毒介導(dǎo)遺傳信息轉(zhuǎn)移過程也稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)。

63轉(zhuǎn)染：真核細胞積極攝取或被導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新表型過程。

64顯微注射法：在制備轉(zhuǎn)基因動物時，將外源基因通過毛細玻璃管，在顯微鏡下直接注射到受精卵細胞核內(nèi)，稱為——

65基因定點誘變：是指將基因某一種或某些位點進行人工替代或刪除過程。

66雙脫氧鏈終結(jié)法；是以單鏈或雙鏈DNA為模板，采用DNA引物引導(dǎo)新生DNA合成，因而又稱為引物合成法，或酶促引物合成法。

６７核酸分子雜交：是指具備互補序列兩條核酸單鏈在一定條件下按堿基配對原則形成雙鏈過程。

６８探針：雜交體系中已知核酸序列稱作探針。

６９ＤＮＡ變性：在物理或化學(xué)因素作用下，例如加熱、酸堿或紫外線照射，可以導(dǎo)致兩條ＤＮＡ鏈之間氫鍵斷裂，而核酸分子中所有共價鍵（如磷酸二酯鍵、糖苷鍵等）則不受影響，稱為——

常用辦法：熱變性、堿變性、化學(xué)試劑變性。

７０ＤＮＡ復(fù)性：當(dāng)促使變性因素解除后，兩條ＤＮＡ鏈又可通過堿基互補配對結(jié)合形成ＤＮＡ雙螺旋構(gòu)造，稱——

７１印跡：凝膠中ＤＮＡ片段雖然在堿變性過程中已經(jīng)變性成單鏈并已斷裂，轉(zhuǎn)移后，各個ＤＮＡ片段在膜上相對位置與在凝膠中相對位置依然同樣，因而稱為——

７２Northern印跡雜交：將