DB15T+3362-2024瘤胃微生物體外培養(yǎng)操作規(guī)程

ICS65.020.30CCSICS65.020.30CCSB44內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)DB15/T3362—2024瘤胃微生物體外培養(yǎng)操作規(guī)程Thecodeofpracticeofinvitrocultureprotocolofrumenmicrobes2024-02-232024-02-232024-03-23內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB15/T3362—2024前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAM/TC19）歸口。本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院。IIDB15/T3362—2024DB15/T3362—2024DB15/T3362—2024DB15/T3362—2024瘤胃微生物體外培養(yǎng)操作規(guī)程范圍（GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T14699.1飼料采樣HJ536水質(zhì)氨氮的測定水楊酸分光光度法本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4試劑和材料試劑GB/T6682CaCl2·2H2O。MnCl2·4H2O。CoCl2·6H2O。FeCl3·6H2O。NH4HCO3。NaHCO3。NaH2PO4·2H2O。KH2PO4。MgSO4·7H2O。C12H6NNaO4。Na2S·9H2O。NaOH。試劑配制4.2.1瘤胃緩沖液的配制1A準(zhǔn)確稱量氯化鈣13.20g，氯化錳10.00g，氯化鈷1.00g，氯化鐵8.00g，溶解后定容到100mL。準(zhǔn)確稱取碳酸氫銨4.00g，碳酸氫鈉35.00g，溶解后定容至1000mL。B準(zhǔn)確稱取磷酸二氫鈉5.70g，磷酸二氫鉀6.20g，硫酸鎂0.60g，溶解后定容到1000mL。將100mg刃天青溶解到100mL水中。需要現(xiàn)配現(xiàn)用，稱取硫化鈉0.336g，1M氫氧化鈉2.0mL，加入47.5mL水。16目～32目。0.0001g。RT+10～2505ANKOMRFS18250mL）：內(nèi)徑大于30cm×40cm0r/min～100r/min99.9±0.1pH0～14，精度±0.1。按照GB/T14699.16516g～200g取營養(yǎng)元素溶液A0.12mL、緩沖溶液237mL、營養(yǎng)元素溶液B237mL、刃天青溶液1.22mL加入到474mL水中，通入CO2至飽和，并保存在39℃水浴恒溫培養(yǎng)箱中，最后再加入49.5mL還原劑溶液，加水定容至1000mL，繼續(xù)通入CO2直到溶液由藍(lán)色變成無色。（頭（150mL～200mL39℃的2min4CO22每個培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)底物約0.5g（準(zhǔn)確至0.0001g），每種培養(yǎng)底物設(shè)3個重復(fù)，每次培養(yǎng)設(shè)1個空白（只有培養(yǎng)液無底物）。保持所有培養(yǎng)瓶為39.5℃，每個培養(yǎng)瓶加入40mL緩沖溶液，pH調(diào)整至6.8，調(diào)節(jié)緩沖平衡20min～30min。培養(yǎng)每個培養(yǎng)瓶中迅速加入20mL瘤胃液。瘤胃培養(yǎng)液通入CO23min，立即擰上瓶蓋，放入39.5℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)箱的震蕩頻率為15次/分，持續(xù)培養(yǎng)48h。7瘤胃微生物體外培養(yǎng)參數(shù)測定pH33附錄A（資料性）瘤胃微生物體外培養(yǎng)評價參數(shù)測定瘤胃微生物體外培養(yǎng)的操作包括6個步驟見圖A.1，在瘤胃微生物體外培養(yǎng)過程中進(jìn)行產(chǎn)氣量的記錄，培養(yǎng)完成后，可以進(jìn)行pH值測定、氨氮和揮發(fā)性脂肪酸的測定和營養(yǎng)物質(zhì)消失率的測定。利用產(chǎn)氣測量系統(tǒng)每隔60s0.5h、1h2、3、4、5、6h、8h、1012、16h、18h、24h、28h、32、36h、40h、44h48pH發(fā)酵至48h時，打開培養(yǎng)瓶采集培養(yǎng)液樣品10mL，立即用pH計測定培養(yǎng)液pH值。pH值的適宜范圍為5.7～6.8。取20mL420HJ536進(jìn)行測定，揮發(fā)性脂肪酸采用氣相色譜法測定。取剩余培養(yǎng)殘渣烘干后，測定相關(guān)營養(yǎng)物質(zhì)的含量，計算營養(yǎng)物質(zhì)的消失率。………………（A.1）式中：Y——（%）；W1——培養(yǎng)底物中某一營養(yǎng)物質(zhì)含量，單位為克（g）；W2——殘渣中某一營養(yǎng)物質(zhì)含量，單位為克（g）。A.3重復(fù)10%。4培養(yǎng)底物的制備（見6.1）培養(yǎng)底物的制備（見6.1）瘤胃緩沖液配制（見6.2）瘤胃液的制備（見6.3）瘤胃緩沖液配制（見6.2）瘤胃液的制備（見6.3）培養(yǎng)裝置的準(zhǔn)備（見6.4）培養(yǎng)裝置的準(zhǔn)備（見6.4）瘤胃微生物體外培養(yǎng)參數(shù)測定瘤胃微生物體外培養(yǎng)參數(shù)測定（見7）營養(yǎng)物質(zhì)降解率的