基因工程原理與技術思考題

ChapterIIntroduction什么是基因？基因有哪些主要特點？基因是一段可以編碼具有某種生物學功能物質的核苷酸序列。①不同基因具有相同的物質基礎.②基因是可以切割的。③基因是可以轉移的。④多肽與基因之間存在對應關系。⑤遺傳密碼是通用的。⑥基因可以通過復制把遺傳信息傳遞給下一代。翻譯并解釋下列名詞geneticengineering遺傳工程geneengineering基因工程：通過基因操作，將目的基因或DNA片段與合適的載體連接轉入目標生物獲得新的遺傳性狀的操作。genemanipulation基因操作：對基因進行分離、分析、改造、檢測、表達、重組和轉移等操作的總稱。recombinantDNAtechnique重組DNA技術genecloning基因克?。菏侵笇蜻M行分離和擴大繁殖等操作過程，其目的在于獲得大量的基因拷貝，在技術上主要包括載體構建、大腸桿菌遺傳轉化、重組子篩選和擴大繁殖等環(huán)節(jié)。molecularcloning分子克隆什么是基因工程？簡述基因工程的基本過程？p2p4簡述基因工程研究的主要內容？p5簡述基因工程誕生理論基礎p2和技術準備有哪些p3？基因表達的產物中，氨基酸序列相同時，基因密碼子是否一定相同？為什么？否，密碼子簡并性舉例說明基因工程技術在醫(yī)學、農業(yè)、工業(yè)等領域的應用。醫(yī)學:人胰島素和疫苗農業(yè):抗蟲BT農藥工業(yè):工程釀酒酵母ChapterⅡThetoolsoftrade什么是限制性核酸內切酶？簡述其主要類型和特點？是一種核酸水解酶，主要從細菌中分離得到。類型特點p11II型核酸內切酶的基本特點有哪些p12-14？簡述影響核酸內切酶活性的因素有哪些p14？解釋限制酶的信號活性？抑制星號活性的方法有哪些？什么是DNA連接酶p15？有哪幾類p16？有何不同p16？什么叫同尾酶、同裂酶p12？在基因工程中有何應用價值？同裂酶：識別位點、切割位點均相同，來源不同。在載體構建方面往往可以取得巧妙的應用。應用較多的同裂酶比如Sma1和Xma1，它們均識別CCCGGG，但前者切后產生鈍末端，后者切后產生粘性末端同尾酶：來源各異，識別序列各不相同，但切割后產生相同的粘性末端。由同尾酶(isocaudomer)產生的DNA片段，是能夠通過其粘性末端之間的互補作用彼此連接起來的。什么是DNA聚合酶？根據(jù)DNA聚合酶使用的模板不同，可將其分為哪兩類？各有什么活性？p17-18聚合酶：在引物和模板的存在下，把脫氧核苷酸連續(xù)地加到雙鏈DNA分子引物鏈的3‘-OH末端，催化核苷酸的聚合作用。依賴于DNA的DNA聚合酶依賴于RNA的DNA聚合酶TaqDNA聚合酶：是一種從水生嗜熱菌中分離得到的一種耐熱的dna聚合酶，具有5-3聚合酶活性和3-5外切酶活性，在分子中主要用于PCR。逆轉錄酶：RNA指導的DNA聚合酶，Klenow片段的特性和用途有哪些？舉例說明。p17名詞解釋：S1核酸酶、核酸外切酶、磷酸化酶激酶、甲基化酶:甲基化酶是作為限制與修飾系統(tǒng)中的一員，用于保護宿主

DNA

不被相應的限制酶所切割。什么是末端脫氧核苷酸轉移酶？舉例說明其應用之一。P19加p什么是堿性磷酸酶？其在基因工程領域中有哪些用途？p19減p質粒單酶切點的基因連接如何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率？目的基因片段與載體由相同的單一限制性核酸內切酶消化酶切后，兩者的兩端均具有相同的黏性末端，成為單酶切位點的黏性末端。為了防止載體的自我環(huán)化，通常用堿性磷酸酶去除載體的粘性末端的5‘p以抑制DNA的自我環(huán)化。名詞解釋：分子雜交、核酸雜交探針切口平移標記探針的主要步驟有哪些？簡述Southern印跡雜交的基本原理及其主要步驟？簡述Northern印跡雜交的基本原理及其應用？簡述Western印跡的基本原理及其主要步驟？簡述Sanger堿基順序分析法的基本原理？簡述酵母雙雜交技術的基本原理和在基因工程中的應用？簡述酵母單雜交技術的基本原理和操作過程？什么是噬菌體展示技術？簡述其基本操作過程？什么是DNA遷移率變動試驗？簡述其基本原理？什么是DNaseI足跡實驗？簡述其基本原理？ChapterⅤPolymeraseChainReactionTechnologyandApplication什么是PCR技術？簡述其基本原理？簡述PCR反應體系的主要成分與反應流程？簡述PCR引物設計的目的和一般原則？簡述提高PCR反應特異性的因素和措施？什么是巢式PCR、降落PCR、反轉錄PCR？它們分別有哪些應用？簡述熒光定量PCR的基本原理？為什么在定量PCR中要引入Ct值的概念？ChapterⅥRNAiandmiRNAregulation什么是RNA干擾技術？簡述利用RNA干擾技術沉默基因的基本原理和一般操作流程？什么是siRNA？如何選擇siRNA靶位點？簡述獲得siRNA的途徑有哪些？ChapterⅦObtainingoftargetgene目的基因克隆時常用哪些方法分離和獲得基因？什么是基因文庫？簡述構建基因文庫常用的載體有哪些？什么是基因組文庫？簡述構建基因組文庫的一般步驟？什么是cDNA文庫？簡述構建cDNA文庫的主要步驟？目的基因與載體的連接方法有哪些？各有哪些優(yōu)點？基因重組時在兩個酶切位點中其中有一個不相匹配時，你如何解決連接問題？如果目的基因的基因結構中有內含子存在，而且要采用原核表達系統(tǒng)，你應如何分離克隆基因？ChapterⅧRecombinationandgenetransfercDNA克隆較之基因組克隆的優(yōu)越性體現(xiàn)在哪里?試述T-A克隆法的原理和用途？基因工程宿主菌必需具備哪些特性？名詞解釋：受體細胞、感受態(tài)細胞、轉化、轉染、轉導簡述將重組DNA導入原核細胞的方法有哪些？簡述將重組DNA導入真核細胞導的方法有哪些？外源基因導入植物的方法？Ti質粒的結構特點？Ti質粒介導植物基因轉移的過程？ChapterⅨScreeningandidentificationofrecombinantclones如何從所克隆到的基因重組載體中鑒定目的基因的存在和正確性重組子的篩選與鑒定主要有哪些方法？重組子的遺傳學檢測法主要包括哪兩類？簡述根據(jù)載體表型特征進行重組子篩選的常用方法及其基本原理？如何利用抗性標記基因篩選陽性克隆？名詞解釋：插入失活效應LacZ基因通常用于構建質粒載體的目的和原理？如何利用LacZ標記基因篩選陽性克?。繄蟾婊驒z測法篩選重組子對報告基因有哪些基本要求?舉例說明重用的報告基因有哪幾種？ChapterⅩExpressionofcloninggene大腸桿菌作為基因工程受體菌有哪些優(yōu)缺點？實現(xiàn)真核基因在大腸桿菌表達系統(tǒng)的正確表達需要哪些基本條件？名詞解釋：啟動子、終止子、SD序列、包涵體蛋白質包含體復性的方法有哪些？可使外源基因在大腸桿菌中高水平表達的啟動子應具備哪些條件？常用大腸桿菌表達載體有哪些？簡述λPL啟動子表達載體和T7噬菌體RNA聚合酶/啟動子表達載體的主要特征？原核表達系統(tǒng)常采用的啟動子有哪些？Lac、Tac、trp啟動子各自有何特點？在大腸桿菌中表達外源基因的表達載體需具備哪些條件？利用大腸桿菌進行外源蛋白質主要有哪幾種表達部位？采用相應表達形式有何優(yōu)缺點？名詞解釋：融合基因、融合蛋白提高外源基因表達效率一般從那幾個方面進行考慮？從提高轉錄啟動效率及翻譯起始效率角度考慮，可通過哪些措施構建高效率表達載體，提高外源基因表達效率？避免外源基因表達蛋白被宿主細胞內源蛋白水解酶降解的主要措施有哪些？簡述大腸桿菌表達外源基因產物的檢測方法有哪幾種？與原核細菌相比，釀酒酵母做為外源基因表達受體菌有哪些優(yōu)點？酵母表達系統(tǒng)有哪些優(yōu)缺點？酵母基因表達系統(tǒng)主要有哪些基本結構？常采用的選擇標記基因有哪些？簡述酵母表達載體的種類和主要特