專題五單元總體總結(jié)

選修一專題5課題1DNA的粗提取與鑒定DNA提取和鑒定的實(shí)驗(yàn)步驟破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液選取實(shí)驗(yàn)材料去除濾液中的雜質(zhì)粗提取析出DNA提純鑒定DNA去除濾液中的雜質(zhì)粗提取DNA的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為95％）（使用冷卻的酒精，對(duì)DNA的凝集效果較佳），靜置2－3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水析出DNA提純鑒定DNA時(shí)在試管中先加入物質(zhì)的量的濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml于兩只試管中，其中一只加入DNA絲狀物，各加入二苯胺4ml試劑?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜?min,待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否有藍(lán)色鑒定DNA（2）觀察絲狀物呈什么顏色？答：白色10

不變藍(lán)——對(duì)照組溶液逐漸變藍(lán)絲狀物(DNA)實(shí)驗(yàn)組圖示結(jié)果加入物質(zhì)比較均加入：①4mL二苯胺試劑②2mol/LNaCl溶液5mL鑒定時(shí)藍(lán)色的深淺與溶液中DNA的含量多少有關(guān)。自變量你能采用其他方法對(duì)DNA進(jìn)行鑒定嗎？洋蔥的鱗片葉表皮細(xì)胞取少許絲狀物，置玻片中央，加1滴甲基綠溶液，絲狀物變成綠色。鑒定所用的試劑是二苯胺或甲基綠。用二苯胺須加熱。用甲基綠不用水浴加熱。⑧DNA的鑒定專題5DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)課題2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片斷.PCR原理⑴.在80－100°C的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體，雙鏈分開，這個(gè)過程稱為變性。⑵.當(dāng)溫度緩慢降低后，兩條彼此分離的DNA鏈又會(huì)重新結(jié)合成雙鏈。⑶.PCR利用了DNA的熱變性原理，通過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結(jié)合，現(xiàn)在使用的PCR儀實(shí)質(zhì)上也是一臺(tái)能夠自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器。高溫解決了打開雙鏈的問題，但是，又導(dǎo)致DNA聚合酶失活的問題，耐高溫的TaqDNA聚合酶解決了高溫導(dǎo)致DNA聚合酶失活的問題，促成了PCR技術(shù)的自動(dòng)化。5.TaqDNA聚合酶的應(yīng)用6.需要為PCR反應(yīng)提供的物質(zhì)緩沖液、DNA模板，分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物，四種脫氧核苷酸，耐熱的DNA聚合酶，同時(shí)通過控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行。將離心管放入PCR儀上，設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。循環(huán)數(shù)變性復(fù)性延伸第一次94℃，10min－－30次94℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次94℃，1min55℃，30s72℃，1minPCR一般經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)可以分為三個(gè)基本步驟──變性、復(fù)性和延伸.靶序列靶序列引物Ⅰ引物Ⅱ5’3’5’5’3’5’3’3’Taq

DNA聚合酶PCR循環(huán)第三步：引物延伸選修一專題5課題3血紅蛋白的提取和分離知識(shí)總結(jié)血紅蛋白的提取和分離蛋白質(zhì)分子的差異性凝膠色譜法原理分離過程凝膠電泳法緩沖溶液組成作用蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理粗分離純化純度鑒定二、實(shí)驗(yàn)操作蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：（1）樣品處理：包括洗滌紅細(xì)胞；血紅蛋白釋放；分離血紅蛋白溶液。（2）粗分離：透析除去分子較小的雜質(zhì)。（3）純化：通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。（4）純度鑒定：通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定?！ㄒ唬悠诽幚砑按址蛛x1、紅細(xì)胞的洗滌：

（2）目的：是去除雜蛋白（1）步驟：血液＋檸檬酸鈉→低速短時(shí)離心→吸出上層血漿→紅細(xì)胞＋5倍體積生理鹽水→緩慢攪拌10min→低速短時(shí)離心→吸出上清液→反復(fù)洗滌直至上清液無黃色（一）樣品處理及粗分離（3）注意事項(xiàng)：洗滌次數(shù)過少，無法除去血漿蛋白；離心速度過高或時(shí)間過長會(huì)使白細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果。在蒸餾水和甲苯作用下攪拌，紅細(xì)胞破裂釋放2、血紅蛋白的釋放：蒸餾水的作用是加入甲苯的作用是充分?jǐn)嚢璧哪康氖鞘辜t細(xì)胞大量吸水脹裂溶解紅細(xì)胞的細(xì)胞膜加速紅細(xì)胞的破裂攪拌器轉(zhuǎn)子磁力攪拌器攪拌器正在工作3.分離血紅蛋白分離過程紅細(xì)胞混合液中速離心10min離心管濾紙過濾脂類物質(zhì)燒杯紅細(xì)胞破碎混合液→中速長時(shí)離心（2000r/min×10min）→濾紙過濾除去脂質(zhì)→分液漏斗分離出血紅蛋白，得到紅色透明液體。有機(jī)溶劑無色透明的甲苯層脂類物質(zhì)白色脂溶性物質(zhì)沉淀層血紅蛋白溶液紅色透明液體紅細(xì)胞破碎物沉淀暗紅色沉淀物20mmol/L磷酸緩沖液1mL1mL4、透析（粗提取）：裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（PH為7.0）透析。目的：除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)，或用于更換樣品中的緩沖液㈠凝膠色譜法（分配色譜法）1、凝膠：一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖）2、概念：根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法3、原理：具體過程在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)瓊脂糖凝膠電泳示意圖6、點(diǎn)燃了的火炬不是為了火炬本身，就像我們的美德應(yīng)該超過自己照亮別人。15、我的生活過得像鐘表的機(jī)器那樣有規(guī)則，當(dāng)我的生命告終時(shí)，我就會(huì)停在一處不動(dòng)了。6、如果你曾經(jīng)把失敗當(dāng)成清醒劑，就千萬別讓成功變成迷魂湯。9、要想成功就是不怕困難，寬心做人，舍得做事，將贏的是整個(gè)人生。10、時(shí)間是個(gè)常數(shù)，但也是個(gè)變數(shù)。勤奮的人無窮多，懶惰的人無窮少。13、用冷靜的目光去看待人世間的一切，才能活得坦蕩，活得超然。10、容不得懦弱只能堅(jiān)強(qiáng)。1、如果我們想要更多的玫瑰花，就必須種植更多的玫瑰樹。1、扶危周急固為美事。能不自夸，則其德厚矣!19、如果要挖井，就要挖到水出為止。18、人生如煙花，不可能永遠(yuǎn)懸掛天際;只要曾經(jīng)絢爛過，便不枉此生。1、別人講我們不好，不用生氣、難過。說我們好也不用高興，這不好中有好，好中有壞，就看你會(huì)不會(huì)用?19、男人你要記住，不管對(duì)手有多強(qiáng)大，你都不能倒下，要記住你身后還有個(gè)你心愛的女人。9、若能像看別人的缺點(diǎn)一樣，如此準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)自己的缺點(diǎn)，你的生命將會(huì)變的不平凡。5、不要因?yàn)橐稽c(diǎn)瑕疵而放棄一段堅(jiān)持，即使沒人鼓掌，也要優(yōu)雅謝幕，感謝自己的付出!8、據(jù)我測算，還可以退五十