TNAIA 0259-2023 牛輪狀病毒病診斷與防控技術規(guī)程

ICSICS65.020.30ICSCCSA031

T/NAIA團 體 標 準T/NAIA0259-2023牛輪狀病毒病診斷與防控技術規(guī)程Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandcontrolofBovinerotavirusdisease2023-12-18發(fā)布 2023-12-31實施寧夏化學分析測試協(xié)會 發(fā)布T/NAIA0259-2023T/NAIA0259-2023前言GB/T1.1-20201定起草。本文件由寧夏化學分析測試協(xié)會提出并歸口。本文件起草單位：寧夏農(nóng)林科學院動物科學研究所、寧夏大學、寧夏職業(yè)技術學院、同心縣科技服務中心。王世博、郭吉平、尤建村、張永康、李生虎、于有利、張久盤、馬玉禮、郝萬軍。本文件為首次發(fā)布。牛輪狀病毒病診斷與防控技術規(guī)程范圍本文件規(guī)定了牛場牛輪狀病毒病診斷與防治技術的術語和定義、診斷、防控和治療。本文件適用于牛場牛輪狀病毒病的防控。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T16568奶牛場衛(wèi)生規(guī)范NY5030無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準則NY5047無公害食品奶牛飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準則NY/T5049無公害食品奶牛飼養(yǎng)管理準則術語和定義下列術語和定義適用于本文件。牛輪狀病毒病 Bovinerotavirus是指由牛輪狀病毒引發(fā)犢牛精神沉郁、厭食、嘔吐、腹瀉、脫水為主要特征的急性胃腸道傳染病。診斷流行病學7臨床癥狀12h～24h多呈隱性感染，并在一定時間持續(xù)向外界排毒。病理變化爛 爛牛輪狀病毒感染病理變化主要表現(xiàn)在消化腸道，腸腔內(nèi)充滿凝乳塊和乳汁，小腸腸壁變薄、半透明，腸內(nèi)容物呈液狀、灰黃或灰黑色。實驗室診斷樣品采集及處理3mLPBS采樣管中；也可無菌采集地上剛排出3mLPBS管中，充分振蕩，12000r/min45min1g5mLPBS，混勻，800045min0.22μm濾器過濾，-80冰箱保存。分子檢測RNA提取將4.4.1中樣品上清或分離病毒用商品化試劑盒進行基因組RNA提取。反轉錄將5.5.2中的基因組RNA利用反轉錄試劑進行反轉錄（見附錄表A.1,A.2）。RPA鑒定RPA方法進行病原核酸檢測，BRV引物序列（A.3）RPA擴增RPA（℃25min。RPA產(chǎn)物電泳1×TAE2%5μLDNA分子量標準5V/cm恒壓電泳，30min后采用凝膠成像系統(tǒng)判定核酸片段大小。RPA結果判定陽性對照出現(xiàn)一條199bp大小的條帶，且陰性對照不出現(xiàn)條帶（參見附錄B.1）。確診出現(xiàn)4.1、4.2、4.3，可判定為牛輪狀病毒病疑似病例。符合4.4可判定為牛輪狀病毒病。防控GB/T16568和NY/T5049的規(guī)定。毒。在保證舍內(nèi)溫度的前提下，自然通風，保證牛舍干燥、舒適、溫暖。避免應激，消除可能降低機體抵抗力的各種應激因素。自然哺乳母牛定期消毒乳頭，防止致病微生物傳染犢牛。分娩時，落地犢牛口鼻切勿接觸臟污。初生犢牛及時哺喂初乳。犢牛出生后1h內(nèi)及時吸吮初乳。哺乳犢牛給予開食料，補充微量元素，飼料配比適當。NY5047的規(guī)定。病死或死因不明牛按照《病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范》及《病死畜禽和病害畜禽產(chǎn)品無害化處理管理辦法》的規(guī)定處理。治療NY/T5030的規(guī)定。5%100mL～200mL。對持續(xù)腹瀉不止的犢牛，可應用白頭翁散或明礬或次硝酸鉍，內(nèi)服。8%以下時，給予口服補液;8%以上或腹瀉嚴重時，應在給予口服補液的同時，皮下或靜脈注射含有碳酸鈉的林格氏液。爛 爛附錄A(規(guī)范性)反應體系A.1反轉錄反應體系試劑使用量RNase-freeddH2O10μL5×All-in-oneQrtsUPERMix4μLEnzymeMix1μL模板RNA5μLA.2反轉錄反應程序溫度時間50℃15min85℃5sec表A.3 輪狀病毒基礎RPA引物序列信息引物名稱引物序列（5'→3'）片段大?。╞p）參考序列BRV-F1ACATATTGTACAGCTCCGAAGAGTGTTGACT199MN067448.1BRV-R1TGCTTGGTAAGTATTTATTATCTGCCCGTTT表A.4 RPA反應體系試劑體積μLBRV-F1（10μM）1.2μLBRV-R1（10μM）1.2μLRehydrationbuffer14.75μL模板1