實驗三 果蔬中維生素C的定量測定

實驗三果蔬中維生素C的定量測定（紫外法）（4學時）一、實驗目的1.學習用銅離子氧化法測定維生素C（Vc）（紫外法）；2.了解Vc定量測定的其他方法，如：磷鉬酸比色法、碘量法、2,6-二氯酚靛酚滴定法（近年來用全自動電位滴定儀進行電位滴定）、紫外法、2,4-二硝基苯肼測定總抗壞血酸量、高效液相色譜法、毛細管電泳法、熒光法、Flinb近紅外分光光度法等。二、實驗原理抗壞血酸在波長243～267nm處有較高的吸收值，但在樣品成分比較復雜時，因有強烈的背景吸收而不適宜用紫外法測定其Vc含量。用堿加熱法等處理法都存在試劑較貴、操作復雜、時問長等一系列問題而不能廣泛應(yīng)用。利用銅離子消除背景誤差，能直接測定一些水果蔬菜樣品中的Vc含量而不需要進行前處理，操作簡單干擾少。附加說明：在測定Vc的國標方法中，熒光法為測定食物中Vc含量的第一標準方法，2,4-二硝基苯肼法作為第二法。三、實驗器材與試劑實驗材料桔子實驗器材紫外/可見分光光度計；渦旋混合儀；高速冷凍離心機；榨汁器；電熱恒溫水浴鍋；試管與試管架；膠頭器長滴管及移液管；250mL燒杯等。實驗試劑1.120μg/mLVc貯液：120mgVc，加適量蒸餾水溶解，然后用1000毫升容量瓶定容。存4℃2.5μg/mL的銅離子溶液：①先配成1000μg/mL的硫酸銅溶液；②取上述硫酸銅溶液5mL，加入1mol/L的醋酸溶液7mL及1mol/L醋酸鈉200mL，用蒸餾水定容。③5×104mol/L的EDTA溶液：36.5mgEDTA溶于適量蒸餾水，250mL餾水定容。④銅離子-EDTA混合液（6.2×105mol/L）：使用前將上述銅離子溶液和EDTA以4:1（v/v）混合而成（現(xiàn)用現(xiàn)配）。四、實驗步驟1.標準曲線制作取12支試管（大試管）分成2組，按下表進行操作。維生素C溶液濃度為120μg/mL。蒸餾水(mL)1.00.90.80.70.60.5標準Vc(mL)00.10.20.30.40.5Cu2+-EDTA（pH6）5.05.05.05.05.05.0A267濃度(μg/mL)2.樣品測試取一定量的桔子瓣記錄克數(shù)。擠壓成汁，9000rpm，4℃離心15min，取上清液量其體積并稀釋201mL樣品稀釋液，加入5mL銅離子-EDTA混合液（pH6）于波長267nm處測定其吸收值，結(jié)果為J（I）。取1mL樣品稀釋液加入4mL銅離子溶液（5μg/mL），50℃水浴中加熱15min，以破壞所有Vc，然后加入1mL5×104mol/LEDTA溶液于波長267nm處測定其吸收值，結(jié)果為J（II3.計算樣品中Vc含量=其中：6——銅離子-EDTA溶液稀釋倍數(shù)△J——J(I)-J(II)V——材料總體積S——標準曲線斜率M——樣品質(zhì)量五、注意事項由于Vc已被氧化，同時不同植物體內(nèi)不同程度地含有已被氧化成深色產(chǎn)物的鞣酸等成分，為盡量避免背景物質(zhì)、有色物質(zhì)的產(chǎn)生，準確測定Vc含量，實驗過程中應(yīng)盡量迅速操作。六、實驗報告1.內(nèi)容與