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文檔簡介
ICS
DB5132四川省（阿壩藏族羌族自治州）地方標(biāo)準(zhǔn)DB
T
牦牛肉
PCR—膜芯片技術(shù)檢驗方法Identification
Yak
Meat
with
PCR-membrane
Chip
Technology 阿壩藏族羌族自治州市場監(jiān)督管理局發(fā)布
T
??......................................................................................................................................................................
II....................................................................................................................................................................III
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...........................................................................................
.............................................................................................................................................................. I
T
??本文件按照GB/T
II
T
??III
T
PCR-膜芯片技術(shù)檢驗方法
PCR
將預(yù)先制備的DNA探針有序的固定于尼龍膜表面，然后與標(biāo)記的樣品雜交，通過對雜交信號的檢測
Sodium
T
SSPE：核酸雜交緩沖液ddH2O：雙重蒸餾水
針對牦牛肉及市場常見假冒牦牛肉動物源性成分特異基因片段設(shè)計引物，對DNA模板進(jìn)行多重聚合
膜芯片雜交儀（MFS-8)
6mm
15×
去活化清洗液（2×SSPE，0.1%
雜交清洗液（2×SSPE，
mmol/L
mmol/EDTA·Na2，其
溴-4-氯
-3-
mmol/L
mmol/L
=
實驗用水符合GB/
/
F
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T
PCR
表1
表1
PCR
T
按GB/T
PCR
中提取并純化后的DNA為模板，在
20μL
體系中加入
μL、正向引物（20
μ
μL、反向引物（20
μL、模板
μL，按以下條件進(jìn)行擴(kuò)增
延伸
個循環(huán)
cm的膜條，將裁好的尼龍膜放置于雙蒸水中浸泡
μ
1）。圖1
膜芯片去活化
：將制備好的膜芯片放入雜交盒內(nèi)，芯片標(biāo)簽正面朝上，加入
去活
45℃，90
/min
-----+--PCR擴(kuò)增失敗，重復(fù)試驗++--++-+注：“+”為陽性，“-”為陰性。
T
洗膜
：吸除雜交體系液，加入
預(yù)熱好的雜交清洗液
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