NY-T 4360-2023 飼料中鏈霉素、雙氫鏈霉素和卡那霉素的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS65.120ICS65.120CCSB46NY中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T4360—2023飼料中鏈霉素、雙氫鏈霉素和卡那霉素的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Determinationofstreptomycin,dihydrostreptomycinandkanamycininfeeds—

Liquidchromatography-tandemmassspectrometry2023-08-01實(shí)施2023-04-112023-08-01實(shí)施中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布NY/T4360—2023NY/T4360—2023NY/T4360—2023NY/T4360—2023本文件按照GB/T1.l-202(X標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起蘋規(guī)則》的規(guī)定起草，請(qǐng)注意本文件的某咚內(nèi)容對(duì)能涉及專利.本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承拘識(shí)別專利的責(zé)任.本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部布牧再醫(yī)局提出，本文件由全國(guó)飼料T：業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC76)!U口.本文件起草單位:江蘇宵農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人:魏瑞成、欒楓婷、王冉、貴蘭、何濤、朱磊、講敏敏.飼料中鏈霉素、雙氫鏈霉素和卡那霉素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1范圍本文件描述了詞料屮鏈霉索、雙氣鏈霉索和I：?那痗素的液相色諾-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法.本文件適用于配合例料、濃縮W枓，格料補(bǔ)充料和添加劑預(yù)浞合飼料中鏈葙紊、雙氯鏈毎索和卡那梅素的測(cè)定，+文件的檢出限為0.05mg/kg,定量限為0.1mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款.其中.注日期的引用文件.僅該H期對(duì)府的版本適用于豐文件;不注U期的引用文件，其嚴(yán)新版本(包括所有的焓改單＞適用f本文件.GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試輇方法GB/T20195動(dòng)物飼料K樣的制備3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)打笛要界定的術(shù)語(yǔ)和定義.4原理試樣中的鏈霉崠、雙氫鏈霉菜和卡那貢索用混合提取溶液提取，經(jīng)親水親脂平衡甩固相萃取杜凈化，用液相色滸串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)，外標(biāo)法定?.5試劑或材料除非另有規(guī)定.僅使用分析純?cè)噭?與鏈霉家，雙氫鏈霉索和P那S索溶液接觸的容器應(yīng)使用聚內(nèi)烯材質(zhì)，5,1水-GB/T6682.—級(jí).5.2甲醇:色譜純。5.3乙陸:色譜純。5.4甲酸:色涪純。5.5乙酸銨:色諮純.5.6異丙醇:色諳純，5.7磷酸二氫鉀溶液(0.2mol/L)；稱取2.72K磷酸二氫鉀.加水溶解并稀釋至100mL?混勻.5.8乙二胺四乙酸二鈉溶液(0.2mol/lJ：稱取6.72g乙二胺四乙酸_鈉，加水溶解并稀釋至100mL.混勻.5.920%三a乙酸溶液：稱取200g三氯乙酸，加水溶解并稀釋至1000mL混勻.5.10混合提取溶液:姆取50mh磷酸二氧鉀溶液(5.7)、10mL乙二胺四乙酸二鈉溶液(S.S)和500mL三氯乙酸溶液(5.9),加水至900m匕混勻.用鉺水調(diào)甘pH至7.50士0.20,用水稀杼，定容至1000mL.混勻.5.1110%甲醇溶液:取10mL甲醇(5.2)，加水稀釋至100mL，混勻.5.12乙酸銨溶液(0.1md/L):稱取0.77g乙酸銨(5.5).加水溶解并稀擇至100mL,混勻，NY/T4360—2023NY/T4360—2023#NY/T4360—20235.13乙酸銨溶液(0.002md/Lh移取2mL乙酸銨溶液(5.12)，加水稀釋至100混勻.5.14洗脫溶液:取10mL甲酸(5.4＞、5mL異丙醇＜5‘幻和85mL乙酸銨溶液(5.13〉混合，用甲酸調(diào)節(jié)pH至0.肋土0.10,棍勻.5.15乙酸銨屮酸溶液:移取10mL乙酸銨溶液(5,12).5mL甲酸(5.4＞,用水稀釋并定容至500mL,混勻?5,16乙酸銨甲酸乙腦溶液:移取10mL乙酸銨溶液(5.12).5mL甲酸(5.4),用乙腈(5.3)稀擇并定容至500mL，混勻.517標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1 準(zhǔn):確稱取硫推鏈裎求(CAS號(hào):381介74-0,純度+低于99^).硫酸《氫鏈霉索(CAS號(hào):5490-277，純度不低于97%)和箏硫解卡那痗索＜CAS號(hào):25389-940.卡那霉衰A純度不低標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌犯?0(以有效成分計(jì),粘確至0-0]mg),分別于10mL聚丙烯容嫩瓶中，用水溶解，定容.混勻.儲(chǔ)存于聚內(nèi)烯瓶屮,21C-8TC保存.有效期1個(gè)月。518混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(10Mg/mL)：準(zhǔn)確稱取硫酸鏈甫累、硫酸雙氣鏈蒞索和申硫酸長(zhǎng)那竊素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)缶溶液(5.17)1mLf100mL聚丙烯容M瓶中，用洗脫溶液(5.14)稀釋全刻度，混勻.儲(chǔ)存于聚丙烯瓶中.2 r保存，有效期1周。19混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：準(zhǔn)確移取適迓體積的混合標(biāo)準(zhǔn)中問(wèn)溶液(5.18＞于10mL聚丙烯荇帝瓶中，用洗脫溶液(5.14)稀釋配制成濃度分別為100ng/mL,200ng/mL,500ng/mL,l000ng/mL,2500ng/mL,5000ng/mL混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液.臨用現(xiàn)配.20凼相萃取小柱:親水-親脂(HLB)平衡煙凼相萃取柱.500mg/6mL.5.21尼龍敞孔濾膜：0.22 。6儀器設(shè)備1液相色譜申聯(lián)質(zhì)譜儀fft!有電噴霧離f-源。6.2分析天平:精度0.1mg和O.Oltng。6-3渦旋混合器-6.4超盧波済洗器.6-5肉心機(jī):轉(zhuǎn)速不低子10000r/min.6,6尚相萃取裝酋.6.7眾吹儀.8酸度計(jì):枏度0.01。7樣品按GB/T20195的規(guī)定制備樣品，至少200ff,粉碎使其全部通過(guò)0.425mm孔徑的分析篩，充分混勻.裝人密閉容器中.濟(jì)用，選取與待測(cè)樣品類型相M,均勻一?致，且在待?物保留時(shí)間處儀器響應(yīng)值小于方法定S限30%的飼料樣品，作為基質(zhì)空白樣品.8試驗(yàn)步?8.1提取平行做2份試驗(yàn).稱取2g(枋確至0.丨mg)試樣于50mL聚丙烯離心竹中，準(zhǔn)確加人30mL混合提取溶液(5.10),渦旋混合1min,超聲提取15min,其間ft分搖動(dòng)2次，于10COOr/min離心10min，準(zhǔn)確移取15mL上淸液.用20%三筑乙酸溶液(5,9)岡節(jié)pH至6.50±0.10,備用.8.2凈化依次用5mL甲醇(5.2)和5mL水活化固相萃取小柱(5.20),將備用液(8.1)全部過(guò)柱，用5mL水、5mb10%甲醇溶液(5.II)分別淋洗，茛空負(fù)抽F,準(zhǔn)確移取5ml.洗脫溶液(5.14)進(jìn)行洗脫.收集洗脫液.W次真空負(fù)壓抽干.渦旋混合］min.過(guò)微孔濾膜(5.21).待淵。8.3基質(zhì)匹S標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備取基質(zhì)空白試樣，按8.1和8.2處理拊到空A基質(zhì)溶液.準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液(5.19)科100ML分別背于l.SmL聚丙烯進(jìn)樣瓶.用氮?dú)獯凳?準(zhǔn)確加人1tnL空A基質(zhì)溶液.渦旋混合30s,配制成濃度為10ng/mL，20ng/mL,50ng/mLJOOng/mL,250ng/mL,500ng/niL的基質(zhì)匹K標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，待腳.8-4困定8.4.1液相色譜參考條件色譜桿:酰胺柱，柱長(zhǎng)100mm.內(nèi)徑2.1mm,粒度1.7Mmt或者性能相當(dāng)者。柱溫:35V.流速:0_3mL/min.進(jìn)樣嫩pU流動(dòng)相:A相為乙酸銨中酸溶液(5.15)fB相為乙酸銨甲酸乙騎溶液(5.16).梯度洗脫:洗脫程序見(jiàn)農(nóng)1.表1梯度洗脫程序時(shí)間fininA,%0.020802.520803.565355.59010fi.790107.520BO12.0208084.2質(zhì)諳參考條件電離方式:電噴莠電離，正離子模式CESD.檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM).噴英電壓:5.5kV。霧化溫度:550r.多反何監(jiān)測(cè)(MRM)離子對(duì)、去簇電壓及碰撞能鍵見(jiàn)表2.表2多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子對(duì)、去簇電壓及破撞能量的參考值被w物名稱監(jiān)瀾離f對(duì)i縝電壓,v鏈霱*582,4>22L427049582.0263.2-27044M狃鏈甫家584,4>246.224457584.4>263.V24440卡那霉家A4S5.2>324.35024485.2>1G3,2B5033-為定世離了.84.3基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液測(cè)定在儀器的坡洼條件下.分別取基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(8.3)和試樣溶液(8.2)上機(jī)測(cè)定.榣質(zhì)匹配標(biāo)疳溶液的定莆離子色譜圖見(jiàn)附錄A.8.<4定性在相同試驗(yàn)條件下，試樣溶液與基質(zhì)K配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中待測(cè)物的保留吋間相對(duì)偏差應(yīng)在士2.5%之內(nèi).根據(jù)表2選擇的定性離子對(duì)，比較試樣進(jìn)圖中待測(cè)物定性離子的相對(duì)離子豐度與濃度抜近的堪質(zhì)匹ny/t4360—2023K標(biāo)準(zhǔn)系列溶液屮對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)離子豐度，若偏差不超過(guò)衣3規(guī)定的范閨，則可判定為樣品屮存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物.表3定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差單位為百分號(hào)相對(duì)W子度>50>20—50>10—20<10最火允許鴒差±20±25±30土508.^.5定量以濃度為橫坐標(biāo)、色透峰命積(響應(yīng)值)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液與革質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢劂的線性范闌內(nèi).如超出線性范凼，垛將試樣和基質(zhì)空白樣品凈化(8.2)得到的溶液用洗脫溶液作同比例稀粋后.從“8.3”開(kāi)始按步驟繭新測(cè)定。中點(diǎn)校準(zhǔn)定貴時(shí)，試樣溶液中待測(cè)物的峰而積與其質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰曲積相差不超過(guò)30%.9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中鏈霉索.雙氫鏈毐紊.R那痗素A的含坫以質(zhì)貴分?jǐn)?shù)w,計(jì).單位為毫克付千克(mR/kg)t標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)按公式(1〉計(jì)箅;單點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(2)計(jì)算。_p,XV,XVXw W,~V2XmX1000 式屮：p. 由基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中待測(cè)物質(zhì)貨濃度的數(shù)值，單位為納克毎奄升(ng/mL)；V一混合提取溶液體積的數(shù)値，笮位為毫升(mL)tV| -最終洗脫休積的數(shù)值，單位為奄升(mL)；n 試樣凈化液稀釋后的倍數(shù)；v2——固相萃取凈化時(shí)備用液體積的數(shù)值，單位為奄升(mLhm-試樣質(zhì)S的數(shù)值.單位為克(g).A.XP.XV,XVXW ”、W,_<XV:XmX鵬 -式中：A.——試樣溶液中待測(cè)物的色譜吟面積；p, 瑤質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物質(zhì)坩濃度的數(shù)值，單位為納克毎奄升(ng/mL);V——混合提取溶液體積的數(shù)值，單位為毫升<mL)；V,——最終洗脫體積的數(shù)值，單位為奈升(mL)；n 試樣凈化液稀釋后的倍數(shù)tV,-—固相萃取掙化時(shí)備用液體積的數(shù)值，單位為毫升(mL)iAn-革質(zhì)匹0(!標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物的色譜峰面積；m一試樣質(zhì)?的數(shù)依，單位為克(g).腳定結(jié)果以平行測(cè)定的算水平均值表水.保留3位奇效數(shù)宇，10精密度在巫虹性條件下，2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)左位不大T該筇術(shù)平均依的20%.附錄A(資料性)

鏈霉素、雙氫鏈霉素和卡那番素A基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液定堡離子色譜圖基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液定莆離子色譜圖見(jiàn)閣A.1，pu?E5K.4OtK263JDOIh取判」&?■ 62(SIV.l)420220?22.1^_4_1^1??*|11(TwkSpr?lM?m_Max4467,0cp*(97鏈?zhǔn)Y*

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