第一章-第五章微生物化妝品

日用化工產(chǎn)品檢驗(yàn)與分析員培訓(xùn)

微生物檢驗(yàn)部分微生物概述化妝品與微生物化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法日用化工產(chǎn)品檢驗(yàn)分析員培訓(xùn)講座（微生物檢驗(yàn)）

第一章概述

一、微生物的概念

二、微生物的特點(diǎn)任何一種化妝品，在生產(chǎn)、保存、運(yùn)輸和使用過(guò)程中，由于各種不同的原因，其產(chǎn)品質(zhì)量可能發(fā)生質(zhì)變。其原因之一就是由微生物造成的，微生物是一群形體極微小的生物，如細(xì)菌、酵母菌、霉菌和病毒等?；瘖y品受到微生物的污染，可引起產(chǎn)品物理性狀(如色澤、氣味等)變化，改變產(chǎn)品有效成分，有的還會(huì)引起致敏、毒素和病毒感染，因此必須嚴(yán)格控制化妝品中的微生物，微生物對(duì)化妝品所產(chǎn)生的作用和影響愈來(lái)愈受到重視。在本書中將介紹與化妝品有關(guān)的一些微生物學(xué)基本知識(shí)。微生物的概念微生物是一類個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，肉眼不可見或不清楚的微小生物的統(tǒng)稱。與人類密切相關(guān)。例：（1）自來(lái)水（2）流行性疾?。杭t眼病、非典、禽流感

（3）化妝品：口紅、眼霜（皮膚?。?/p>

（4）食品方面：食用醋——醋酸桿菌味精——棒狀桿菌啤酒——酵母菌面包——酵母菌

（6）日用化工方面：加酶洗滌劑、加酶牙膏（產(chǎn)品質(zhì)量好，生產(chǎn)率高）（7）醫(yī)藥方面：青霉素、鏈霉素——產(chǎn)黃青霉菌、放線菌（8）農(nóng)業(yè)方面：發(fā)酵飼料等等。微生物類群十分龐雜，包括病毒、細(xì)菌、放線菌、支原體、酵母菌、霉菌等。與化妝品關(guān)系密切的微生物主要是細(xì)菌（金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、綠膿桿菌、破傷風(fēng)桿菌等）和霉菌。微生物的特點(diǎn)特點(diǎn)——微生物廣泛地應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)1．分布廣、種類多2．生長(zhǎng)旺、繁殖快3．適應(yīng)強(qiáng)、易變異4．代謝強(qiáng)、轉(zhuǎn)化快微生物的形態(tài)一、細(xì)菌二、霉菌與化妝品關(guān)系密切的微生物多是細(xì)菌和真菌類的霉菌。本章主要介紹細(xì)菌和霉菌兩類微生物。一、細(xì)菌

（一）細(xì)菌的分類

革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌——G+

革蘭氏陰性細(xì)菌——G-顯微鏡下菌體革蘭氏染色反應(yīng)陰性細(xì)菌——紅色G-

革蘭氏染色陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)菌——深紫色G+（二）細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌的種類繁多，其基本形態(tài)可分為球狀、桿狀與螺旋狀三種，分別稱為球菌、桿菌和螺旋菌。

1、球狀——球菌（呈球形或橢圓形）單球菌、雙球菌、鏈球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌、葡萄球菌（細(xì)胞無(wú)定向分裂，猶如串葡萄。）球菌形態(tài)桿菌螺旋菌

2、桿狀—桿菌細(xì)胞呈桿狀或圓柱形短桿菌近似球狀，長(zhǎng)的桿菌近絲狀。桿狀菌是細(xì)菌中種類最多的，也有不少是致病菌。

3、螺旋狀——螺旋菌（再分為弧菌和螺旋菌兩種狀態(tài)）。桿菌螺旋菌形態(tài)(三)細(xì)菌的大小

細(xì)菌大小隨種類不同差別很大，平均大小為1～3μm

球菌大小以其直徑表示0.5～2μm

桿菌和螺旋菌以其長(zhǎng)度與寬度表示

1～5μm×0.15～1.5μm(四)細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)菌的結(jié)構(gòu)可分為基本結(jié)構(gòu)和特殊結(jié)構(gòu)兩部分1.基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、擬核、核糖體和內(nèi)含物，2.特殊結(jié)構(gòu)：鞭毛、莢膜、芽孢和氣泡等，只在部分細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)。

(五)細(xì)菌的繁殖

吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生化合成反應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)變成新的細(xì)胞物質(zhì)細(xì)胞物質(zhì)和細(xì)胞體積的增加，新的細(xì)胞壁物質(zhì)的合成，使菌體開始了繁殖過(guò)程，而最后形成兩個(gè)新的細(xì)胞。裂殖是細(xì)菌最普遍、最主要的繁殖方式，(六)細(xì)菌的菌落將細(xì)菌接種到培養(yǎng)基上，若條件適宜，便迅速生長(zhǎng)繁殖，由于細(xì)胞受到固體培養(yǎng)基表面和深層的限制，繁殖的菌體常以母細(xì)胞為中心聚集在一起，形成一個(gè)肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)菌群體，稱為菌落。不同的菌種所形成的菌落有不同的形態(tài)，稱之為菌落特征。菌落特征包括大小、形狀、隆起形狀、邊緣情況、表面狀態(tài)、表面光澤、質(zhì)地、顏色、透明程度等，如金黃色葡萄球菌的菌落為金黃色，靈桿菌的菌落呈紅色。因此菌落的特征可以應(yīng)用于細(xì)菌的鑒定和分類。但需注意，菌落的特征還受到培養(yǎng)條件尤其是培養(yǎng)基成分的影響。

二、霉菌霉菌是一些“絲狀真菌”的統(tǒng)稱，屬真核微生物。霉菌在自然界分布極廣，土壤、水域、空氣、動(dòng)植物體內(nèi)外均有它的蹤跡。它們同人類的生產(chǎn)、生活有著密切的關(guān)系：(1)有益的方面：生產(chǎn)酒精、青霉素、維生素、植物生長(zhǎng)刺激素等(2)有害的方面：食品、谷物由于霉菌引起霉變；霉菌能產(chǎn)生多種毒素如由黃曲霉菌產(chǎn)生的黃曲霉素致癌；霉菌可引起化妝品霉變，是化妝品變質(zhì)的主要原因。(一)霉菌的形態(tài)霉菌菌體是由分枝或不分枝的菌絲構(gòu)成。許多菌絲交織在一起，稱為菌絲體。霉菌的菌絲有兩類(如圖5－5所示)：

(1)無(wú)膈膜菌絲，如根霉、毛霉等；

(2)多數(shù)為有膈膜菌絲，如青霉菌、曲霉菌均屬此類。霉菌的菌絲(二)霉菌的繁殖霉菌的繁殖能力一般都很強(qiáng)，而且方式多樣，主要靠形成無(wú)性和有性孢子。無(wú)性孢子的繁殖是無(wú)性繁殖，是不經(jīng)過(guò)兩性細(xì)胞的配合，只是營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的分裂或營(yíng)養(yǎng)菌絲的分化而形成同種新個(gè)體的過(guò)程。（普遍）有性孢子繁殖是經(jīng)過(guò)兩個(gè)性細(xì)胞結(jié)合而產(chǎn)生新個(gè)體的過(guò)程，稱為有性繁殖。微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)微生物同其他生物一樣，需要不斷地從它的外部環(huán)境中吸收所需要的各種物質(zhì)，使機(jī)體能進(jìn)行正常的生長(zhǎng)與繁殖，保證生命能夠維持與延續(xù)下去。那些能夠滿足機(jī)體生長(zhǎng)、繁殖和完成各種生理活動(dòng)所需要的物質(zhì)通常稱為微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。微生物獲得與利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程常稱為營(yíng)養(yǎng)。一、微生物細(xì)胞的化學(xué)組成

微生物細(xì)胞和其他高等動(dòng)植物細(xì)胞一樣，也是由碳、氫、氧、氮、磷、硫、鉀、鈉、鎂、鈣、鐵、錳、銅、鈷、鋅、鉬等化學(xué)元素組成。微生物細(xì)胞中的這些元素主要以水、有機(jī)物和無(wú)機(jī)鹽的形式存在于細(xì)胞中。

水是細(xì)胞中的一種主要成分，一般可占細(xì)胞干重的90％以上。

二、微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

及其功能

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):碳源物質(zhì)、氮源物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子水。(一)碳源物質(zhì)凡是可以被微生物用來(lái)構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)的或代謝產(chǎn)物中碳素來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱為碳源物質(zhì)。

碳源物質(zhì)通常也是機(jī)體生長(zhǎng)的能源物質(zhì)。能作為微生物生長(zhǎng)的碳源物質(zhì)的種類極其廣泛，既有簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)含碳化合物如CO2和碳酸鹽等，也有復(fù)雜的天然的有機(jī)含碳化合物。在化妝品中微生物所能利用的碳源有：

1．碳水化合物與糖甙。如淀粉、糊精和糖。

2．醇類。如甘油、甘露醇、脂肪醇。

3．脂肪酸及其脂類。如動(dòng)植物油脂及蠟。

4．甾固醇。如膽固醇和羊毛脂。(二)氮源物質(zhì)凡是能被微生物用來(lái)構(gòu)成菌體物質(zhì)中或代謝產(chǎn)物中氮素來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通稱為氮源物質(zhì)。

多數(shù)霉菌能直接利用無(wú)機(jī)氮如氨、硝酸鈉作為氮源。

在化妝品中微生物所能利用的氮源有：蛋白質(zhì)、聚肽、膠朊和氨基酸。(三)無(wú)機(jī)鹽這些金屬元素在機(jī)體中的生理作用：有參與酶的組成、構(gòu)成酶的最大活性、維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)與維持細(xì)胞的滲透壓平衡、控制細(xì)胞的氧化還原電位和作為某些微生物生長(zhǎng)的能源物質(zhì)等。一般微生物生長(zhǎng)所需要的無(wú)機(jī)鹽有硫酸鹽、磷酸鹽、氯化物以及含有鈉、鉀、鎂、鐵等金屬元素的化合物。重金屬元素（微生物生長(zhǎng)所需要的微量元素），一定要控制在正常的濃度范圍內(nèi)。(四)生長(zhǎng)因子某些微生物不能從普通的碳源、氮源物質(zhì)合成，而需要另外加入少量的才能滿足機(jī)體生長(zhǎng)需要的有機(jī)物質(zhì)。這種有機(jī)物質(zhì)叫做生長(zhǎng)因子。根據(jù)生長(zhǎng)因子的化學(xué)結(jié)構(gòu)與它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)的生理作用，可以說(shuō)生長(zhǎng)因子的本質(zhì)是維生素，許多維生素都能起生長(zhǎng)因子的作用，它們中的大部分是構(gòu)成酶的輔基或輔酶，它們是酶活性所需要的成分。微生物不同所需要的生長(zhǎng)因子也不同。(五)水水在機(jī)體中的生理作用有：

1．水是微生物細(xì)胞的重要組成部分，占生活細(xì)胞總量的90％左右。

2．機(jī)體內(nèi)的一系列生理生化反應(yīng)都離不開水。

3．營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收與代謝產(chǎn)物的分泌都是通過(guò)水來(lái)完成的。

4．由于水的比熱高，又是熱的良好導(dǎo)體，故能有效地控制細(xì)胞內(nèi)溫度的變化。

微生物的生長(zhǎng)、抑制和死亡一、自然環(huán)境中的微生物微生物在適宜的環(huán)境條件下，不斷地吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并按照自己的代謝方式進(jìn)行代謝活動(dòng)，細(xì)胞質(zhì)的量不斷增加，體積得以加大，其表現(xiàn)即為細(xì)胞的生長(zhǎng)。

微生物是自然界中分布最廣的一群生物，無(wú)論是在高山、陸地、淡水、海洋、空氣以及動(dòng)植物體內(nèi)外，都有它們的存在，這是微生物的重要特性之一，而這是由于微生物形體微小，易于傳播；以及因微生物營(yíng)養(yǎng)類型多，適應(yīng)能力強(qiáng)，故可在各種不同的環(huán)境中生長(zhǎng)。土壤＞水＞空氣二、影響微生物生長(zhǎng)和死亡的因素在化妝品的生產(chǎn)、保存及使用時(shí)，應(yīng)制訂增進(jìn)或降低、甚至完全破壞微生物生命活動(dòng)的有效措施。1.防腐：它是一種抑菌作用。利用某些理化因子，使物體內(nèi)外的微生物暫時(shí)處于不生長(zhǎng)、繁殖但又未死亡的狀態(tài)。這是一種防止食品、化妝品和其他物質(zhì)發(fā)生腐敗霉變的技術(shù)措施。如低溫、干燥、鹽腌、糖漬等等。(例)2.消毒：

是指殺死或消除所有病原微生物的措施，可達(dá)到防止傳染病傳播的目的。如將物體煮沸(100℃)10分鐘或60～70℃加熱處理30分鐘，就可殺死病原菌的營(yíng)養(yǎng)體，但絕非殺死所有的芽孢。還有利用某些化學(xué)制劑進(jìn)行消毒。(例)3.滅菌：是指用物理或化學(xué)因素，使存在于物體中的所有生活微生物，永久性地喪失其生活力，包括最耐熱的細(xì)菌芽孢。這是一種徹底的殺菌措施，通過(guò)滅菌的物品，不再存在任何有生命的有機(jī)體。影響微生物的因素有：溫度、PH、干燥、氧化還原電位(Φ)、輻射、滲透壓、超聲波、有機(jī)化合物、鹵族元素及其化合物、表面活性劑第二章化妝品與微生物影響化妝品質(zhì)量的原因很多，但受微生物污染而使其變質(zhì)是非常普遍的一個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題。因微生物的廣泛存在，它無(wú)處不有，無(wú)處不藏，在化妝品的生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯存及使用過(guò)程中，化妝品都極易遭到微生物的污染。因而防止和消除微生物對(duì)化妝品的污染，在化妝品的研究及生產(chǎn)中是一個(gè)很受重視的問(wèn)題。一、化妝品中的主要微生物在化妝品中存在的微生物其影響大的主要是致病菌，它們是病源細(xì)菌和致病真菌。(一)病源細(xì)菌1．革蘭氏陽(yáng)性菌

(1)葡萄球菌。（感染）金黃色葡萄球菌→生癤子、化膿性炎癥，眼部引起麥粒腫、結(jié)膜炎等炎癥。(2)鏈球菌→急性咽喉炎、風(fēng)濕熱與急性腎炎等病癥。(3)雙球菌：肺炎雙球菌→肺炎、腦膜炎、腹膜炎和結(jié)膜炎。(4)芽孢桿菌→食物中毒癥;炭疽桿菌→炭疽病。(5)梭狀芽孢桿菌:破傷風(fēng)梭狀桿菌→破傷風(fēng)。(6)棒狀桿菌:白喉棒狀桿菌→白喉病。

2．革蘭氏陰性菌(1)奈瑟氏菌:腦膜炎奈瑟氏菌→腦膜炎，而淋病奈瑟氏菌→淋病。(2)假單孢菌:綠膿桿菌→使燒傷病人感染(該菌還可引起肺炎)。(3)沙門氏菌:沙門氏傷(副傷)寒桿菌→傷(副傷)寒。(4)弧菌:霍亂弧菌→霍亂病。(5)嗜血桿菌:流感嗜血桿菌→流感、小兒腦膜炎、慢性支氣管炎。(6)埃希氏桿菌:大腸桿菌→引起腹瀉、腎盂、腎炎和膀胱炎。是檢驗(yàn)化妝品的一個(gè)重要生物指標(biāo)。(7)志賀氏桿菌：志賀氏痢疾桿菌→菌痢疾。(8)分枝桿菌：結(jié)核桿菌→結(jié)核病；麻瘋分枝桿菌→麻瘋病。3．螺旋體螺旋體和螺菌不同，它是介于細(xì)菌與原生動(dòng)物(原蟲)之間的單細(xì)胞原核生物，它具有特殊的形狀、結(jié)構(gòu)和運(yùn)動(dòng)方式，用普通染色方法不易著色，用顯微鏡可以看見。(1)色幼氏螺旋體、回歸熱螺旋體→回歸熱?。晃纳下菪w→咽炎和牙齦潰瘍。(2)鉤端螺旋體：黃疸型出血性鉤端螺旋體→黃疸病。(3)密螺旋體、梅毒螺旋體→梅毒病。病源細(xì)菌:革蘭氏陽(yáng)性菌革蘭氏陰性菌螺旋體(二)致病真菌在化妝品中能引起致病的真菌有：1．表皮癬菌→皮膚生癬。2．白色念球菌→它可以進(jìn)入人體呼吸道、胃腸道粘膜，引起感染。3．新型隱球菌→（是一種酵母桿菌）腦膜炎。此外，真菌也可以引起過(guò)敏性反應(yīng)，其作用與灰塵和花粉所引起的過(guò)敏反應(yīng)是相似的。在化妝品中對(duì)這四種致病菌：金黃色葡萄球菌；大腸桿菌；綠膿桿菌和沙門氏菌特別注重，要進(jìn)行專門的檢測(cè)。另化妝品受到霉菌的污染，常見的霉菌為青霉、曲霉、根霉、毛霉等。二、化妝品中微生物的污染及抑制和殺滅(一)化妝品的微生物污染1、化妝品中微生物生長(zhǎng)？油脂、膠質(zhì)、蛋白質(zhì)等、水分、溫度、濕度－→

微生物生長(zhǎng)繁殖。2、化妝品中微生物生長(zhǎng)繁殖的結(jié)果？微生物吸收和分解了化妝品中的有效成分、排泄而產(chǎn)生了一些新的物質(zhì)－→化妝品成分被破壞－→發(fā)霉、腐?。兩?、臭味、毒素－→使消費(fèi)者遭到細(xì)菌感染和引起過(guò)敏等許多嚴(yán)重的危害

3、化妝品的微生物污染

分為兩種情形一級(jí)污染：化妝品生產(chǎn)過(guò)程中受到的微生物污染。（設(shè)備、原料、生產(chǎn)及包裝）二級(jí)污染：消費(fèi)者使用化妝品過(guò)程中受到的污染。（使用、涂沫、蓋、防腐劑）（1）生產(chǎn)設(shè)備：如各種輸送泵、研磨機(jī)、混拌機(jī)、乳化機(jī)、裝灌機(jī)等設(shè)備是微生物積聚之處，故需要進(jìn)行消毒、殺菌等處理。（2）原料：如蛋白質(zhì)、淀粉等原料及水（3）生產(chǎn)：在化妝品的生產(chǎn)制造過(guò)程如制造乳劑時(shí)，通常采用加熱滅菌法，將水加熱至90℃維持20分鐘滅菌，然后與相似溫度的油相進(jìn)行乳化。（4）包裝：在包裝室要求空氣凈化，無(wú)菌車間。包裝容器瓶、罐、管等在化妝品的包裝過(guò)程中，操作工人的人體和衣物也會(huì)受到微生物的嚴(yán)重污染，如人體的頭皮上的微生物可高達(dá)140萬(wàn)個(gè)／cm2，因此，必須對(duì)操作人員要求高標(biāo)準(zhǔn)的個(gè)人衛(wèi)生，對(duì)所穿衣、帽、鞋等也都要進(jìn)行消毒處理。

(二)化妝品的消毒與滅菌由于化妝品受到微生物的一級(jí)污染，故必須對(duì)原料、設(shè)備、成品、包裝材料、容器用具以及操作環(huán)境等進(jìn)行消毒和滅菌。通常使用的方法有熱力、紫外線及化學(xué)藥劑等。1．熱力滅菌(消毒)法

(1)火焰滅菌法：酒精火焰3次每次數(shù)秒鐘。(2)干熱滅菌法：電烘箱160～170℃1小時(shí)；(3)高壓蒸汽滅菌：利用高壓水蒸汽

(4)常壓蒸汽滅菌：滅菌時(shí)間40～60分鐘。

2．紫外線滅菌(消毒)法紫外線中265nm波長(zhǎng)段具有最強(qiáng)的殺菌作用。（1）紫外線對(duì)室內(nèi)空氣消毒，注意紫外線輻射對(duì)人體有影響。（2）紫外線可以殺死水中的微生物，常用的方法是在紫外光管加一玻璃套管，將要處理的水從紫外管與玻璃管之間流過(guò)，一般30W的紫外光管，水的流速為250～500毫升／分，這樣可殺死水中的大腸桿菌，（3）包裝物及器皿用紫外線消毒，是將所要處理的物件放于紫外光管下10cm處，照射10～15分鐘，需兩面照射。由于紫外線的穿透力較差，對(duì)于要求殺菌高的情況，就需用其它穿透力較強(qiáng)的輻射光如γ-射線，鈷-輻射等來(lái)進(jìn)行殺菌處理。3．化學(xué)方法的滅菌消毒化學(xué)制劑對(duì)微生物的作用有殺菌、抑菌、抗菌、防腐等?；瘜W(xué)制劑的消毒方式可分為液相方式與氣相方式兩種。液相方式涂抹、浸泡或噴灑，如通常室內(nèi)地面、墻面、衣物、用具進(jìn)行消毒多采用這種方式；氣相方式熏蒸等方式進(jìn)行滅菌和消毒，這種方式使化學(xué)藥物直接作用于微生物，其作用強(qiáng)且迅速。常用的化學(xué)制劑消毒劑有乙醇、甲酚、甲醛等制劑。(三)化妝品的防腐對(duì)于化妝品的微生物二次污染的消除，其主要手段是在化妝品中加入防腐劑，防止化妝品腐敗變質(zhì)。防腐劑主要是化學(xué)制劑。1．防腐劑對(duì)微生物的作用機(jī)理防腐劑對(duì)微生物的作用在于它能選擇性地作用于微生物新陳代謝的某個(gè)環(huán)節(jié)，使其生長(zhǎng)受到抑制或致死，但對(duì)人體細(xì)胞無(wú)害。(1)抑制微生物細(xì)胞壁的形成(2)影響細(xì)胞膜的功能。(3)抑制蛋白質(zhì)合成和致使蛋白質(zhì)變性。2．防腐劑的選擇化妝品的理想防腐劑其性能應(yīng)具有：(1)具有廣譜的抗菌活性(2)良好的配伍性(3)良好的安全性。無(wú)毒性的，無(wú)過(guò)敏性和對(duì)皮膚無(wú)刺激的，即防腐劑在使用濃度下保證對(duì)消費(fèi)者是安全的。(4)具有良好的水溶性(5)對(duì)溫度和酸、堿(pH值)應(yīng)是穩(wěn)定的。(6)防腐劑在使用濃度下，應(yīng)是無(wú)色、無(wú)臭、無(wú)味。(7)防腐劑應(yīng)是較容易制得且價(jià)格低廉的。？1、紫外燈？2、化妝品中加入的防腐劑主要有那些？3、設(shè)備消毒方法？4、化妝品廠常檢微生物有那些？5、原料消毒方法有那些？6、美白祛斑凱松、咪唑烷基脲系列、尼泊金系列（油系）新潔爾滅液

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身體

微生物學(xué)

工作第三章化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB7916—87

1總則

1．1為向廣大消費(fèi)者提供符合衛(wèi)生要求的化妝品，確?；瘖y品的衛(wèi)生質(zhì)量和使用安全，加強(qiáng)化妝品的衛(wèi)生監(jiān)督管理，保障人民身體健康，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。

1．2化妝品系指涂、擦、散布于人體表面任何部位(如表皮、毛發(fā)、指甲、口唇等)或口腔粘膜，以達(dá)到清潔、護(hù)膚、美容和修飾目的的產(chǎn)品。

1．3在國(guó)內(nèi)從事化妝品生產(chǎn)、銷售都必須遵守本標(biāo)準(zhǔn)。進(jìn)口化妝品也必須符合本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

1．4地、市以上(含地、市)衛(wèi)生防疫部門負(fù)責(zé)對(duì)轄區(qū)內(nèi)的化妝品生產(chǎn)實(shí)行衛(wèi)生監(jiān)督；縣以上(含縣)衛(wèi)生防疫部門負(fù)責(zé)對(duì)所轄區(qū)內(nèi)的化妝品銷售實(shí)行衛(wèi)生監(jiān)督。2化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

2．1一般要求

2．1．1化妝品必須外觀良好，不得有異臭。

2．1．2化妝品不得對(duì)皮膚和粘膜產(chǎn)生刺激和損傷作用。

2．1．3化妝品必須無(wú)感染性，使用安全。2．2對(duì)原料的要求

2．2．1禁止使用表2中所列物質(zhì)為化妝品組分。

2．2．2凡以表3至表6中所列物質(zhì)為化妝品組分的，必須符合表中所作規(guī)定。

2．2．3凡使用兩種以上表3至表6中所列物質(zhì)為化妝品組分時(shí)，必須符合如下規(guī)定：具有同類作用的物質(zhì)，其用量與表中規(guī)定限量之比的總和不得大于1。2．3對(duì)產(chǎn)品的要求

2．3．1

化妝品的微生物學(xué)質(zhì)量應(yīng)符合下述規(guī)定：

2．3．1．1

眼部、口唇、口腔粘膜用化妝品以及嬰兒和兒童用化妝品細(xì)菌總數(shù)不得大于500個(gè)／m1或500個(gè)／g。

2．3．1．2

其他化妝品細(xì)菌總數(shù)不得大于1000個(gè)／m1或1000個(gè)／g。

2．3．1．3

每克或每毫升產(chǎn)品中不得檢出糞大腸菌群、綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌。

2．3．2化妝品中所含有毒物質(zhì)不得超過(guò)表1中規(guī)定的限量。表1化妝品中有毒物質(zhì)限量有毒物質(zhì)限量ppm備注汞鉛(以鉛計(jì))砷(以砷計(jì))甲醇140100.2％含有機(jī)汞防腐劑的眼部化妝品除外(見表4)含乙酸鉛的染發(fā)劑除外(見表6)2．4

化妝品包裝材料必須無(wú)毒和清潔。2．5

化妝品標(biāo)簽上應(yīng)用中文注明產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)地，包裝上要注明批號(hào)。對(duì)含藥物化妝品或可能引起不良反應(yīng)的化妝品尚需注明使用方法和注意事項(xiàng)。

2．6

對(duì)演員化妝品的某些特殊要求另訂。3化妝品的衛(wèi)生檢驗(yàn)和監(jiān)督

3．1

對(duì)化妝品衛(wèi)生指標(biāo)的檢驗(yàn)按(GB7917．1～7917．4—87)《化妝品衛(wèi)生化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法)和

(GB7918．1～7918．5—87)／：

化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》進(jìn)行。3．2

對(duì)化妝品原料和產(chǎn)品的安全性評(píng)價(jià)按GB7919—87《化妝品安全性評(píng)價(jià)程序和方法》進(jìn)行。3．3

化妝品監(jiān)督部門有權(quán)派員到所轄區(qū)化妝品生產(chǎn)廠檢查生產(chǎn)過(guò)程的衛(wèi)生情況以及抽樣檢查產(chǎn)品的衛(wèi)生質(zhì)量。3．4

監(jiān)督人員抽檢的樣品，必須立即貼上封條，并貼標(biāo)簽注明采樣地點(diǎn)、日期、采樣人和其他有關(guān)事項(xiàng)。3．5

監(jiān)督部門應(yīng)有計(jì)劃地對(duì)化妝品生產(chǎn)和銷售的衛(wèi)生管理和產(chǎn)品的安全衛(wèi)生問(wèn)題進(jìn)行不定期的檢查。第四章

化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法總則

GB7918．1—871樣品的采集及注意事項(xiàng)

1．1

所采集的樣品，應(yīng)具有代表性，一般視每批化妝品數(shù)量大小，隨機(jī)抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝單位。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別從兩個(gè)包裝單位以上的樣品中共取10g或10ml。包裝量小的樣品，取樣量可酌減。

1．2

供檢樣品，應(yīng)嚴(yán)格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗(yàn)前不得啟開，以防再污染。

1．3

接到樣品后，應(yīng)立即登記，編寫檢驗(yàn)序號(hào)，并按檢驗(yàn)要求盡快檢驗(yàn)。如不能及時(shí)檢驗(yàn)，樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。

1．4

若只有一個(gè)樣品而同時(shí)需做多種分析，如細(xì)菌、毒理、化學(xué)等，則宜先取出部分樣品作細(xì)菌檢驗(yàn)，再將剩余樣品作其他分析。

1．5

在檢驗(yàn)過(guò)程中，從開封到全部檢驗(yàn)操作結(jié)束，均須防止微生物的再污染和擴(kuò)散，所用器皿及材料均應(yīng)事先滅菌，全部操作應(yīng)在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行?；蛟谙鄳?yīng)條件下，按無(wú)菌操作規(guī)定進(jìn)行。

1．6

如檢出糞大腸菌群或其他致病菌，自報(bào)告發(fā)出起該菌種及被檢樣品應(yīng)保存一個(gè)月備查。述2供檢樣品的制備

2．1培養(yǎng)基和試劑生理鹽水、SCDLP液體培養(yǎng)基2．2儀器2．3不同類型樣品的檢樣制備（制成1：10稀釋液）2．3．1液體樣品2．3．1．1

水溶性的液體樣品，可量取10ml加到90ml滅菌生理鹽水中，如樣品少于10ml。仍按10倍稀釋法進(jìn)行。如為5ml則加45ml滅菌生理鹽水，混勻后，制成1：10稀釋液。

2．3．1.2油性液體。取樣品10ml，先加5ml滅菌液體石蠟混勻，再加10ml滅菌的吐溫80，在40～44℃水浴中振蕩混合10min，加入滅菌的生理鹽水75ml(在40～44℃水浴中預(yù)溫)，在40～44℃水浴中乳化，制成l：10的懸液。

2．3．2膏、霜、乳劑半固體狀樣品2．3．2．1親水性的樣品，稱取10g，加到滅菌的帶玻璃珠加有90ml滅菌生理鹽水的錐形瓶中，充分振蕩混勻，放32℃水浴靜置15min。用其上清液作為1：10的稀釋液。

2．3．2．2疏水性的樣品，稱取10g，放到滅菌的研缽中，加10ml滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀，再加10ml滅菌吐溫80，研磨待溶解后，加70ml滅菌生理鹽水，在40~44℃水浴中充分混合，制成1：10稀釋液。

2．3．2．3固體樣品，稱取10g，加到滅菌的生理鹽水稀釋瓶中，振蕩混勻，使其分散混懸后，放30～32℃水浴中，15min后取出，充分振蕩混合，再放到30～32℃水浴中靜置15min，取上清液作為1，10的稀釋液。如有均質(zhì)器，上述水溶性膏、霜、粉劑等，可稱10g樣品加90ml滅菌生理鹽水，均質(zhì)1～2min。

疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱10g樣品加90mlCDLP液體培養(yǎng)基，或1g樣品加1ml滅菌液體石蠟、1ml滅菌吐溫80、7ml滅菌生理鹽水，均質(zhì)3～5min?；瘖y品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法

細(xì)菌總數(shù)測(cè)定

GB7918．2—87

細(xì)菌總數(shù)系指lg或1ml化妝品中所含的活菌數(shù)量。測(cè)定細(xì)菌總數(shù)可用來(lái)判明化妝品被細(xì)菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、操作者的衛(wèi)生狀況，是對(duì)化妝品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。

本標(biāo)準(zhǔn)采用標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法。標(biāo)準(zhǔn)平板培養(yǎng)計(jì)數(shù)法

(一)設(shè)備和材料冰箱、恒溫水浴、天平、電爐、吸管、廣口瓶或三角燒瓶、玻璃珠、平皿（培養(yǎng)皿、二重皿）、試管、酒精燈、均質(zhì)器或乳缽、試管架、滅菌刀或剪刀、滅菌鑷子、酒精棉球、玻璃蠟筆、恒溫培養(yǎng)箱、放大鏡等。(二)培養(yǎng)基和試劑

營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、75％乙醇、生理鹽水或其他稀釋液。(三)菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序

(四)操作步驟

1．檢樣稀釋及培養(yǎng)(1)以無(wú)菌操作，將檢樣１０g(或１０mL)剪碎放于含有９０mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：1０的均勻稀釋液。(2)用1mL滅菌吸管吸取1:1０稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液)，振搖試管混合均勻，做成1:1００的稀釋液。(3)另取1mL滅菌吸管，做1０倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。(4)根據(jù)產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)?biāo)本污染情況的估計(jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度，分別在做1０倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。(5)稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將晾至46℃營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(可放置46℃±1C水浴保溫)注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾人加有1mL稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內(nèi)做空白對(duì)照。(6)待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h取出，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即為每克(或毫升)樣品所含菌落總數(shù)。2．菌落計(jì)數(shù)方法

做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡(5~10倍)檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)。3．菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告

(1)平板菌落數(shù)的選擇。選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。(2)稀釋度的選擇：a．應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見表例1)。b．若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30—300之間，則視二者之比如何來(lái)決定，若其比值小于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字(見表例2及例3)。c．若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見表例4)。d.

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見表例5)。e．若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于(<)1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見表例6)。f．若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時(shí)，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見表例7)。g.若所有的稀釋度均無(wú)菌生長(zhǎng)，報(bào)告數(shù)為每克或每毫升小于10個(gè)。(3)菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)據(jù)報(bào)告；大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五人方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來(lái)表示(五)注意事項(xiàng)

(1)檢驗(yàn)中所用玻璃器皿必須是完全滅菌的，(2)用作樣品稀釋的液體，每批都要有空白對(duì)照。(3)檢佯的稀釋液可用滅菌鹽水或其他稀釋液進(jìn)行稀釋。(4)注意每遞增稀釋一次，必須另?yè)Q一支lmL滅菌吸管等.思考：樣品中細(xì)菌總數(shù)的檢驗(yàn)選擇1∶1000，1∶10000稀釋度

1、準(zhǔn)備玻璃器皿洗凈二重皿5套，三角瓶二個(gè)，試管3支，1ml的移液管4支、10ml的移液管1支及200ml的容量瓶。2、包扎培養(yǎng)皿用紙包好；3支試管裝水9ml塞好棉塞并用紙包好；其中一三角瓶裝水225ml，并放入玻璃珠5～6粒，塞好棉塞并用紙包好；移液管用紙包好。3、制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基100ml，用另一三角瓶裝好，塞上棉塞，并用紙包扎好。4、滅菌：把所用玻璃器皿（10ml的移液管及200ml的容量瓶除外）和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，滅菌條件分別為160℃2小時(shí)和115℃、20分鐘。5、檢樣稀釋及培養(yǎng)（1）無(wú)菌操作，稱10g奶粉放入裝有90ml滅菌水的三角瓶?jī)?nèi)，充分搖勻得1∶10的均勻稀釋液。（2）用1ml滅菌移液管吸取1∶10稀釋液1ml，注入9ml滅菌水的試管內(nèi)，搖勻成1：100稀釋液。（3）另用一支1ml滅菌移液管，按上述操作順序做10倍遞增的稀釋液，每遞增稀釋液一次，即換用一支移液管，制備1∶1000；1∶10000稀釋液。（4）選擇1∶1000，1∶10000稀釋度各以1ml之量加入滅菌平皿中；接著立即倒入約15ml培養(yǎng)基于平皿中搖勻，另取一空白平皿倒入培養(yǎng)基作空白對(duì)照。（5）培養(yǎng)基凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)。6、菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法糞大腸菌群GB7918．3一87（28）化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法金黃色葡萄球菌GB7918．5—87化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法綠膿桿菌OB7918．4—87無(wú)菌室無(wú)菌程度的測(cè)定一般采用平板法。

(1)將已滅菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基分別倒人已滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿約15mL培養(yǎng)基，啟開皿蓋暴露于無(wú)菌室內(nèi)的不同地方，l0min后，蓋好皿蓋。

(2)將培養(yǎng)皿倒置于37C培養(yǎng)24h后，觀察菌落情況，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)。

(3)如果每個(gè)皿內(nèi)菌落不超過(guò)4個(gè)，則可以認(rèn)為無(wú)菌程度良好，若菌落數(shù)很多，則應(yīng)對(duì)無(wú)菌室進(jìn)一步滅菌，再重復(fù)以上步驟。1、高壓蒸汽滅菌使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)：①必須將滅菌鍋內(nèi)的冷空氣完全排除，才能達(dá)到預(yù)期的真實(shí)溫度，否則會(huì)造成假象而滅菌不徹底。②待滅菌的物質(zhì)在鍋內(nèi)不要放得太擠，以免影響蒸汽的流通和滅菌效果。③滅菌完畢應(yīng)緩慢減壓，至壓力表為“零”時(shí)再打開鍋蓋，否則蒸汽外溢會(huì)造成燙傷，瓶?jī)?nèi)的液體也會(huì)突然沸騰，將棉花塞頂出或弄濕。2、顯微鏡的結(jié)構(gòu)與使用

①結(jié)構(gòu)：顯微鏡的結(jié)構(gòu)包括機(jī)械部分與光學(xué)部分。機(jī)械部分：鏡筒、鏡座、回轉(zhuǎn)盤、傾斜關(guān)節(jié)、調(diào)節(jié)螺旋、載物臺(tái)和光圈。光學(xué)部分：目鏡、接物鏡、集光器和反光鏡。顯微鏡的性能取決于物鏡的分辨率，分辨率是根據(jù)區(qū)分開物體上兩點(diǎn)之間的最小距離決定的，因此，顯微鏡對(duì)物體的放大倍數(shù)是目鏡放大倍數(shù)與物鏡放大倍數(shù)的積。分辨率愈高的顯微鏡性能愈好。②使用：將顯微鏡置于平穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡檢者坐姿要端正，一般以左眼觀察，右眼繪圖。光線應(yīng)避免直射陽(yáng)光。反光鏡有凹平兩面，在光線較強(qiáng)的天然光源，宜用平面鏡，光線較弱的光源或人工光源，宜用凹面鏡。3、染色技術(shù)細(xì)菌染色法有單染色法和復(fù)染色法兩種。革蘭氏染色屬于復(fù)染色法。具體操作：①涂片基本步驟：涂片一干燥一固定。②革蘭氏染色步驟：滴加革蘭氏染色第一液(結(jié)晶紫)染色1分鐘，水洗；滴加第二液(碘液)作用1分鐘，水洗；滴加第三液(95％乙醇)脫色0.5~1分鐘，水洗；滴加第四液(碳酸復(fù)紅)復(fù)染0.5分鐘、水洗、干燥。鏡檢：革蘭氏陽(yáng)性菌為紫色，革蘭氏陰性菌為紅色。培養(yǎng)基的分裝擺斜面或倒平板