HPV基因診斷試劑盒

子宮頸癌與人乳頭瘤病毒〔HPV〕的研討進展一、宮頸癌的概述及其病因學研討進展二、HPV的生物學研討三、宮頸癌的早期篩查四、宮頸病變的治療一、宮頸癌的概述及其病因學研討進展宮頸癌－－最常見的婦科惡性腫瘤據世界范圍內統(tǒng)計，每年大約有50萬左右的宮頸癌新發(fā)病例，占一切癌癥新發(fā)病例的5%，其中80%的病例發(fā)生在開展中國家。我國每年宮頸癌新發(fā)病例約13.15萬，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數的28.8%，發(fā)病率僅次于乳腺癌位居第二。隨著篩查制度的建立，世界宮頸癌的發(fā)病率和死亡率曾經大幅下降。我國由70年代的10.28/10萬下降到90年代的3.25/10萬，但在高發(fā)病區(qū)，死亡率仍高居不下。地區(qū)死亡率(/10萬）世界8.00中國3.25北京2.54上海3.8山西陽城36.00患病年齡更趨于年輕化〔發(fā)病年齡提早到45歲〕，發(fā)病史縮短。如吉林省在80年代統(tǒng)計宮頸癌患者中小于35歲的婦女占4.8％，而2000年曾經占到34.1％子宮頸癌的危險要素：行為危險要素：如性生活過早、多個性伴侶、多孕多產、社會經濟位置低下、營養(yǎng)不良及性混亂等；生物學要素：如細菌、病毒和衣原體等各種微生物的感染。目前僅有少量研討闡明宮頸癌能夠存在著家族聚集景象。宮頸癌的生物學病因研討進展：

*早在十九世紀四十年代，一位意大利醫(yī)生RegoniStern最早提出結婚與否與宮頸癌的發(fā)生能夠有關；

*60－70年代，人們的主要研討對象是HSV,HCMV等病原體；

*1974年zurHausen初次提出HPV感染與宮頸腫瘤有親密關系；

*1977年Laverty在電鏡中察看到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭狀瘤病毒〔Humanpapillomavirus，HPV〕顆粒；

*1995年IARC專題討論會：高危型HPV繼續(xù)感染是宮頸癌的主要病因。

---99.7％的宮頸癌患者都能發(fā)現高危型HPV感染。

二、HPV的生物學研討人乳頭瘤病毒〔HumanPapillomaviruses,HPV〕雙鏈DNA無包膜病毒環(huán)狀DNA，約8Kb；病毒顆粒直徑為50～55nm；依托宿主細胞進展復制、轉錄和翻譯。

HPV病毒電鏡圖型別：已發(fā)現100多種不同的亞型〔假設DNA序列同源性小于90％，那么定為新的亞型〕。其中超越35種可以感染人類的生殖器官，約30種與腫瘤有關。

1〕低危型：宮頸上皮內低度病變，引起外生殖器濕疣等良性性病〔HPV6、11、42〕；

2〕高危型：宮頸上皮內高度病變，與宮頸癌的發(fā)生有關〔HPV16、18、31、33、35、39

、45、51、52、53、56、58、59、66及68〕；

分布：有些亞型和地域、宮頸癌的病理類型有關。

HPV45在非洲西部很常見，HPV39和59在美洲中部和南部常見，HPV52，58在中國常見。

在宮頸鱗狀上皮細胞癌中以HPV16〔占51％〕，在腺癌和腺鱗癌中HPV18分別占56％和39％。型別與分布表HPV型別與宮頸病變常見HPV型別宮頸病變6，11濕疣，CINI16CIN,18CIN30，40，58，69CIN31，33，35，39CIN45，51，52，56CINI42，43，44CINI53正常宮頸上皮54尖銳濕疣55鮑溫樣丘疹病59VIN61，62，64，67VaIN66鱗癌70外陰乳頭狀瘤HPV在歐洲的常見分型和感染率最常見的低危型〔HPV6、11〕最常見的高危型〔HPV16、18、31、33、45、58〕HPV16HPV18HPV45HPV31HPV33Other宮頸癌患者中高危型HPV感染率(歐州2000年資料)深圳不同HPV亞型的檢出頻率統(tǒng)計〔WHO工程〕

注：1.本表統(tǒng)計樣本數為1153例，其中陽性樣本數為119例；由于檢測樣本中存在復合感染，故亞型的檢出頻率＝〔該亞型的檢出次數/一切亞型的檢出次數〕×100％，一切亞型檢出次數為226。2.本表統(tǒng)計數據由WHO深圳工程提供，HPV分型基因檢測試劑由亞能生物技術〔深圳〕提供。浙江12000例HPV檢測初步結果分型情況：16型占26%左右，其他依次為58、33、52、45、18。與其他地域的統(tǒng)計有明顯差別。高危人群陽性率在30%左右，普通人群在11%左右。溫州地域麗水地域陽性率明顯高于省內其他地域。進一步的研討正在進展中。HPV基因構造按功能可分為早期區(qū)(E區(qū))、晚期區(qū)(L區(qū))和非編碼區(qū)〔LCR〕三個區(qū)域。E區(qū)分為E1～E7開放閱讀框架，主要編碼與病毒復制、轉錄、調控和細胞轉化有關的蛋白〔HPV無E3〕。L區(qū)分L1和L2，分別編碼主要衣殼蛋白和次要衣殼蛋白。LCR是E區(qū)與L區(qū)間-6.4～1.0Kb的DNA片段，可擔任轉錄和復制的調控HPV的致癌機理HPV以游離態(tài)感染上皮細胞后，可以繼續(xù)存在于染色體外，不引起任何病變，或引起良性病變和低度病變，如鋒利濕疣或輕度不典型增生等。而癌變那么與病毒DNA整合入宿主染色體親密相關。高危型HPVDNA鏈通常在E1或E2的開放讀碼框內斷裂，使HPVDNA整合入染色體脆弱區(qū)。E6和E7具有促進和維持整合形狀的功能。HPVE6蛋白間接抑制p53活性，妨礙細胞對DNA損傷的反響?！藏撓蛘{理細胞的生長和分化〕HPVE7蛋白與pRb結合后使其功能失活，改動細胞周期的正常調控。國內對不同亞型感染致病性研討近況北京大學第一臨床醫(yī)院趙健等對1715例患者研討闡明：在高危型中，致癌性最強的是16型，其次是33和31型?！彩骞リP資助工程〕。在北京中日友好醫(yī)院進展的591例研討中，發(fā)現多重感染患者發(fā)生宮頸癌的危險性明顯高于單一感染者，對放療敏感性差，無進展生存期和帶瘤生存期比單一感染者明顯縮短。HPV感染途徑及危險要素感染途徑：主要為性傳播和直接皮膚接觸特別案例：母親分娩過程中傳播至嬰兒的口腔危險要素：1、年齡要素：30歲以后HPV感染率下降，但危險性提高。2、性行為的影響：初次性交年齡越小，性伴侶數量越多，感染率越高；3、避孕方法：尚無一致意見；4、免疫抑制形狀使HPV感染的危險性添加：如HIV感染后、腎移植等。三、宮頸癌的早期篩查未見上皮內病變－－鱗狀上皮細胞異常－－腺上皮細胞異常ASC〔AtypicalSquamousCells)：非典型鱗狀上皮細胞ASC-US〔ASCofUndeterminedSignification〕:意義不明確的非典型鱗狀上皮細胞ASC-H〔ASCcannotexcludeHSIL〕：意義不明確的非典型鱗狀上皮細胞不除外高度鱗狀上皮內病變L-SIL〔Low－gradeSquamousIntraepithelialLesion〕：低度鱗狀上皮內病變－－－HPV感染、CINIH-SIL〔High－gradeSIL〕：高度鱗狀上皮內病變－－－與CINII、CINIII或原位癌含義一致SCC〔SquamousCellCarcinoma〕：鱗狀細胞癌AGC〔AtypicalGlandularCells)：非典型腺上皮細胞AIS〔AdenocarcinomaInSitu)：腺原位癌ACA〔Adenocarcinoma〕：腺癌組織學檢查的分類：CIN〔CervicalIntraepithelialNeoplasm)：宮頸上皮內瘤變CINI：輕度不典型增生CINII：中度不典型增生CINIII：重度不典型增生、原位癌2001年版TBS〔TheBethesdaSystem)報告分類中常見的細胞學診斷宮頸癌前病變的幾個術語解釋：正常婦女HPV暴露主要是性傳播感染幾率：>40％HPV年齡<30歲一過性，80％平均8個月年齡>30歲平均8~24個月CINI〔組織學〕CINII/III〔組織學〕無細胞學改動/HPV消除子宮頸浸潤癌機體免疫機制輔助致癌要素圖HPV感染與宮頸病變的自然過程埋伏感染期亞臨床感染期臨床病癥期HPV相關腫瘤期8－10年臨床提示，從HPV的繼續(xù)感染到普通的宮頸癌前病變并最終開展為宮頸癌大約需求8-10年。因此，必需采取適當的預防和篩查措施，才可以阻止宮頸癌的發(fā)生并有望最終消滅宮頸癌。在現代醫(yī)學技術的支持下，婦科醫(yī)生應該大有作為。篩查是早診早治關鍵篩查間隔時間（年）1233～55～10>10陽性病變風險系數122.5349備注：1～3年篩查間隔比較平安，隨著篩查間隔的添加，風險大幅度添加。表：篩查間隔時間與陽性病變風險系數表表：不同的篩查頻率，可以降低的宮頸癌的累積發(fā)病率篩查頻率累積發(fā)病率的降低〔％〕每年篩查一次90-93每兩年篩查一次86-91每三年篩查一次75-88終身篩查5次61-74終身篩查3次35-55終身篩查2次29-42終身篩查一次17-32摘自：GoldieSJ,etal.2001.13；篩查戰(zhàn)略所運用方法包括：1-VIA檢查，2-HPV檢測，3-巴氏涂片。篩查對象：三年以上性行為或21歲以上有性行為的婦女。起始年齡：經濟興隆地域：25～30歲，經濟欠興隆地域：35～40歲，高危人群起始年齡應相應提早。終止年齡：65歲以上危險性極低。篩查間隔：每年一次，假設延續(xù)兩次HPV和細胞學篩查均為正常，可延伸篩查間隔時間至5～8年。興隆國家：16—68歲，HPV+TCT，間隔3—5年。中國癌癥研討基金會〔CCRF〕宮頸癌篩查及早診早治指南中國癌癥研討基金會〔CCRF〕

宮頸癌篩查及早診早治指南篩查方案：根本方案：肉眼察看＋冰醋酸實驗〔碘液實驗〕〔鄉(xiāng)村普查〕普通方案：HPV+papsmear檢測〔二級及以上醫(yī)院〕最正確方案：HPV+TCT檢測〔興隆地域〕檢查后隨訪對象：細胞學低度病變、CINI以上者、“特殊職業(yè)〞婦女人群、年齡>30歲以上的高危HPV感染者，每年定期隨訪檢查。本卷須知：1、月經來潮后10～18天為最正確檢查時間2、檢查前48h內不要做陰道沖洗，不用運用陰道內用藥物3、檢查前48h內不要行性生活宮頸癌的常規(guī)臨床檢測方法臨床檢查：如肉眼察看、陰道鏡等操作簡便，但準確率和特異性有待提高〔50-70％〕細胞學檢測：察看宮頸上皮細胞的變異，常見方法有：巴氏涂片、LCT、TCT等〔70%以上〕1〕長期宮頸糜爛可導致宮頸上皮細胞形狀變異，但非HPV引起的細胞形狀異常與宮頸癌病變沒有直接聯絡。2〕在感染早期，細胞往往不會出現形狀變化，但此時HPV對細胞內遺傳物質的損傷能夠曾經產生。病毒學檢測：HPVDNA檢測〔PCR方法〕，常見方法有：基因芯片分型檢測、HC-2、熒光PCR等特異性強、靈敏度高，操作簡便快捷(98%)宮頸分泌物HPV結果注：亞能和凱普均以13種高危型別統(tǒng)計假設以23種型別計算，亞能HPV陽性129例，陽性率為11.3％。共剔除18例13種型別以外的型別HPV基因分型快速診斷試劑運用膜雜交技術建立的敏感、特異、簡便的檢測方法，可同時對23種HPV亞型(18種高危型及5種低危型)進展檢測。

基因芯片〔GeneChip〕就是將大量不同序列的探針分子固定于支持物的不同位置上，然后與已做標志的樣本進展雜交，經過檢測雜交信號的強度和分布來進展分析。高度的靈敏性和準確性快速簡便同時檢測多種疾病HPV基因分型快速診斷試劑操作流程采集樣本提取DNAPCR擴增雜交顯色結果判別檢測結果：HPV16、HPV43檢測結果：HPV33、HPV35〔一〕宮頸病變的篩查1、HPV檢測的最大優(yōu)勢之一在于發(fā)現高危型HPV陽性而細胞學涂片正常的婦女，由于這一人群中10％會在四年內開展成CINⅢ。2、篩查并濃縮高風險人群，便于進展有效監(jiān)控，早期發(fā)現宮頸癌。3、HPV檢測的陰性預測值為99％，可將篩查間隔延伸至3年一次，大大地降低了檢查本錢。敏感性：88－100％特異性：98％陰性預測值：幾乎100％HPV檢測的臨床意義圖：德、法、英三個國家研討數據總概HPV〔＋〕是宮頸病變的重要根據，繼續(xù)的HPV感染是CINII/CINIII的重要條件，相對于TCT檢測，HPV檢測敏感度更高，更有臨床意義，在歐洲曾經作為首選篩查方法。GC-HPV與TCT的差別GC-HPVTCT兩種檢測的差異病原學檢測細胞學檢測兩種檢測對宮頸癌篩查的提示全程提示即時提示臨床意義提示有患癌的可能，確定已經發(fā)生細胞形態(tài)改變者的病因判斷是否進入亞臨床期或臨床期〔二〕ASCUS和低度病變的分流1、HPV檢測經過排除可疑的或低度病變，從而提高診斷的可信度，降低漏診的風險。2、把具有潛在宮頸癌風險的婦女從低風險的婦女中區(qū)分出來，指點陰道鏡的合理運用。3、比起復查細胞學，HPV檢測提供了更快捷的結果，從而很有自信心地把HPV陰性的婦女重新放回常規(guī)篩查人群中。

病例數：3000例，圖顯示HPV的相對風險隨CIN的級別上升而明顯添加〔三〕HPV檢查提供了CIN治療后隨診手段1、可預測病變惡化或術后復發(fā)的風險，有效指點術后追蹤。2、術后6個月、12個月檢測HPV陰性，提示病灶切除干凈，可最大限制減少病人的焦慮。3、假設術后HPV檢測陽性，提示有殘留病灶及有復發(fā)的能夠。

CIN患者：勝利治療率達90～95％，復發(fā)率10％；但比正常人發(fā)生浸潤癌的幾率仍高4－5倍；危險期：8年左右；

病變進展〔惡化〕繼續(xù)〔穩(wěn)定〕衰退〔逆轉〕級別單純HPVCINICINIICINIII風險率(%)5153045持續(xù)率(%)15373556消退率(%)80574332CIN級別開展為CC的風險評價闡明：CIN級別越高，其衰退和逆轉的時機越小。各型CINⅢ和宮頸癌中高危型HPV感染率達98%以四、宮頸病變的治療“治病〞即“治毒〞----郎景和教授語錄一、物理治療：電凝、冷凍、微波、激光等。二、手術治療：L