免疫實驗診斷課件

免疫學實驗診斷

臨床免疫學檢查及意義

免疫學檢查由于具有特異性和敏感性，在實驗診斷中應用越來越廣泛。常應用于體液免疫、細胞免疫、感染免疫、腫瘤免疫、變態(tài)反應、移植免疫等相關疾病診斷和預后觀察。免疫學檢查意義：應用免疫學理論和技術研究疾病的病因、發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸，幫助疾病診斷和預防治療。

AntigenB-lymphocytephagocyte

T-lymphocyte

PrimedTLcytokine

PlasmacellantibodyTmemorycellBmemorycellReviewimmuneresponseNKcomplementTumormarker其它做免疫學檢查思考點特異性、靈敏性性別、年齡檢測物質(zhì)性質(zhì)地域性時效性免疫抑制劑等藥物影響介紹常用免疫學檢測方法凝集沉淀試驗流式細胞技術ELISA發(fā)光物標記技術生物芯片技術快速金標技術免疫印跡PCR第一節(jié)：免疫球蛋白檢測

免疫球蛋白合成、分泌及特性：合成分泌特性IgG脾和淋巴結(jié)中漿細胞抗細菌、抗病毒、抗毒素可通過胎盤、可被動免疫IgA腸系淋巴組織中漿細胞抗細菌、抗病毒、抗毒素，尤其分泌型在消化道、呼吸道等管腔抗感染IgM脾和淋巴結(jié)中漿細胞感染后最早出現(xiàn)，殺菌、溶菌、溶血、凝集作用明顯IgE粘膜固有層中漿細胞分泌參與I型變態(tài)反應IgGIgAIgMIgE特性主要特性生理變化IgG占總Ig70-80%，能通過胎盤，次級免疫應答孕期含量與母體基本相同，出生3-4月最低，16歲前達成人水平IgA分為血清和分泌型，血清型占總Ig10-15%，SIgA與局部抗感染相關新生兒含量很低，16歲前達成人水平IgM初級免疫應答，可以五聚體形式存在，占總Ig5-10%20周起合成，新生兒為成人10%，8-10歲達成人水平IgE血清中含量最低Ig，占總Ig0.002%新生兒含量極低，12歲前達成人水平IgGIgAIgMIgE病理變化增高降低IgG慢性感染、慢性肝炎、肝硬化、淋巴瘤、和某些自身免疫性疾病（如SLE)，免疫增殖疾?。ㄈ鏜M）先天免疫缺陷，獲得性免疫缺陷（如腎病綜合征，營養(yǎng)不良，甲亢），使用免疫抑制劑，重鏈和輕鏈病等

IgA慢性感染、慢性肝炎、肝硬化、淋巴瘤、和某些自身免疫性疾病（如SLE)，免疫增殖疾病（如MM），腎病IgA降低見于呼吸道反復感染者，先天免疫缺陷，獲得性免疫缺陷（如腎病綜合征，營養(yǎng)不良，甲亢），重鏈和輕鏈病等IgM同IgG外宮內(nèi)感染可急劇增高基本同IgGIgE同IgG外過敏性疾病可明顯增，寄生蟲感染，間質(zhì)性肺炎等，特異性IgE增高與過敏原相關基本同IgGIgG亞類檢測IgG亞類分為4種，血液中含量IgG1>IgG2>IgG3>IgG4，最高和最低可差10倍以上，亞類增高或減低通常與總IgG相關，但有些患者亞類異常，而總IgG正常或與亞類異常情況反相。

IgG1缺失常見于免疫缺陷疾病，導致反復感染IgG2缺陷為IgG亞類缺陷中最常見者，且多見于兒童，可引起呼吸道反復感染IgG3缺陷見于成人反復性呼吸道感染IgG4缺陷與IgG2和IgA缺乏有關。IgG4水平升高見于異位性皮炎、哮喘和某些寄生蟲疾病。M蛋白檢測臨床意義M蛋白或稱單克隆免疫球蛋白，是由一種單克隆B細胞異常增殖時產(chǎn)生，一般不具抗體活性。陽性主要見于

1.多發(fā)性骨髓瘤2.巨球蛋白血癥

3.重鏈病4.半分子病

5.惡性淋巴瘤6.良性M蛋白血癥蛋白電泳第二節(jié)：補體檢測（complement）

補體是主要由巨噬細胞分泌存在于新鮮血液中具有酶樣活性的球蛋白，補體不耐熱易降解，故補體檢測須用新鮮血清。補體有C1-C9(經(jīng)典途徑）及BF、DF、PF（旁路途徑）和補體調(diào)節(jié)因子組成。臨床常作總補體活性（CH50）和單一因子C3、C4、BF及C1q檢測?？傃a體溶血活性（CH50)檢測

增高急性感染、急性組織損傷、惡性腫瘤和風濕病早期，補體增高常與其它血漿蛋白改變相伴隨。降低自身免疫性疾病SLE的活動期急性腎小球腎炎冷球蛋白血癥等嚴重肝病變先天性缺乏SRBCAbcSRBCc3、c4、c1q、B因子檢測參與途徑降低增高C3經(jīng)典、旁路1）合成障礙2）消耗過多3）先天缺乏1）急性炎癥2）急性組織損傷3）排異反應C4經(jīng)典C1q經(jīng)典B因子旁路第三節(jié)細胞免疫檢查簇分化抗原CD（Clusterofdifferentiation）:細胞在發(fā)育分化過程中，細胞表面抗原物質(zhì)發(fā)生變化，CD抗原即指細胞變化過程中不同時期產(chǎn)生的抗原。目前臨床CD4（TH）與CD8（TS）檢測應用廣泛。簇分化抗原檢測方法目前較多采用流式細胞儀技術進行分析，流式細胞免疫分析技術為特異抗體加標記技術加單細胞檢測。特點：特異性、靈敏性高、檢測精密度均較以前手工操作高很多。流式細胞儀檢測簡介

淋巴細胞表面標志檢測E玫瑰花形成實驗TCSRBCSRBCSRBCSRBCSRBCSRBCSERSERSERSERSERSERT細胞表面標志檢測CD3（總T細胞）、E玫瑰花試驗檢測臨床意義

增高：甲亢、淋巴細胞性甲狀腺炎、重癥肌無力、器

官移植后排異反應

減低：AIDS、胸腺發(fā)育不良、聯(lián)合免疫缺陷、也可見

于放療和化療及免疫抑制類藥物治療

CD4、CD8檢測臨床意義

CD4+增高：類風濕關節(jié)炎活動期，自身免疫疾病

CD4+減低：AIDS等病毒感染、免疫抑制劑治療、嚴重

創(chuàng)傷、大手術等

CD8+增高：傳染性單核細胞增多癥和巨細胞病毒感染

急性期、慢性乙型肝炎

CD8+降低：部分自身免疫性疾病、Ⅰ型糖尿病等B細胞表面標志檢測B細胞表面抗原和表面受體檢測臨床意義

表面抗原CD19、CD20、CD21、CD22

CD19增高：B細胞系統(tǒng)惡性腫瘤

CD19降低：體液免疫缺陷疾病

CD21為EB病毒和CD3受體

CD20在B細胞激活后逐步降低

CD22在B細胞激活時逐步增高

SmIgB細胞表面特異性標志

SmIg增高：B細胞惡性增殖相關疾病，如慢淋、毛細胞白血病、巨球蛋白血癥。

SmIg降低：體液免疫缺陷相關疾病CD4/CD8測定臨床意義CD4/CD8測定臨床意義

增高：多見于自身免疫性疾病，如類風關活動期、多發(fā)性硬化癥、SLE、器官移植后排異反應、膜性腎小球腎炎等

降低：AIDS、瘤型麻風病、惡性腫瘤發(fā)作期、傳染性單核細胞增多癥、巨細胞病毒感染急性期、血吸蟲病等。淋巴細胞功能檢測T淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗意義

細胞生物學功能的體外試驗，應用于免疫缺陷、增強、移植等。實驗要求較高。

轉(zhuǎn)化率增高：Down氏綜合癥

轉(zhuǎn)化率降低：細胞免疫功能低下或缺陷相關疾病

NK細胞活性測定意義

NK細胞無需抗原刺激可直接殺傷靶細胞，可釋放IFN-r、TNF-B和GM-CSF,在機體抗腫瘤和抗感染免疫中發(fā)揮重要作用

增高：感染早期，器官移植干擾素等免疫增強劑治療

降低：惡性腫瘤，免疫缺陷疾病，使用免疫抑制劑。細胞因子檢查細胞因子種類繁多，功能復雜，多種因子可具有相同功能，各種細胞因子間可互相作用，細胞因子功能同時受到細胞因子受體功能影響，因此在選擇檢測項目和結(jié)果分析時要綜合考慮。細胞因子產(chǎn)生細胞靶細胞對靶細胞主要作用IL-2TLTLNKBL促進生長和細胞因子產(chǎn)生促進生長和活化生長及抗體合成IL-6MC、TL、內(nèi)皮細胞TL&BL成熟BL肝臟輔助刺激濟生長急性期反應物（纖維蛋白原）TNFMC、TLPMN內(nèi)皮細胞丘腦下部肝臟肌肉脂肪TL&BL活化（炎癥）活化（炎癥、凝集）發(fā)熱急性期反應物（血清淀粉樣A蛋白）分解蛋白（惡病質(zhì)）輔助刺激劑IFN纖維母細胞、MC所有NK抗病毒，抑制細胞增殖，加強MHC1類表達和活化腫瘤標志物的概念一般而言，TM是指存在于腫瘤細胞內(nèi)或腫瘤細胞表達及脫落的物質(zhì)，或是宿主對腫瘤反應而產(chǎn)生的物質(zhì)。由于腫瘤發(fā)生、發(fā)展原因至今尚未完全解決，提示腫瘤的標志也并未完全明確，所以腫瘤標志物概念還有待補充和修正。Tumormarkersaresubstances,usuallyproteins,thatareproducedbythebodyinresponsetocancergrowthorbythecancertissueitself.Sometumormarkersarespecific,whileothersareseeninseveralcancertypes.Manyofthewell-knownmarkersarealsoseeninnon-cancerousconditions.Consequently,thesetumormarkersarenotdiagnosticforcancer.第四節(jié)：腫瘤標志物本質(zhì)廣義上腫瘤標志物是指與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、消亡相關的各種物質(zhì)。包含遺傳物質(zhì)（如致癌或抑癌基因）、病毒（如EBV-IgA與鼻咽癌)、酶（NSE)、激素（HCG)和臨床應用廣泛的一些腫瘤抗原（CEA、AFP)等。腫瘤細胞本身產(chǎn)生的腫瘤標志物常分為兩類：1）當理化、病毒、遺傳等因素引起正常細胞內(nèi)基因突變而發(fā)生癌變時，癌變細胞內(nèi)及表達在其表面的蛋白質(zhì)等成份發(fā)生某種變化，形成腫瘤抗原，這種抗原可以表達在正常細胞，而腫瘤細胞表達高，也可因腫瘤導致組織結(jié)構(gòu)變化，腫瘤抗原進入血液，如PSA；或僅在胚胎組織中表達，正常成人細胞中不表達，在發(fā)生腫瘤時又重新表達，如AFP、CEA。2）由腫瘤細胞產(chǎn)生的特殊抗原，這種抗原在性質(zhì)上與正常細胞所表達的抗原不同。癌基因的發(fā)現(xiàn)證明正常細胞有癌基因存在，只是處于不表達狀態(tài)，其一旦被激活，就失去正常調(diào)控，使細胞發(fā)生癌變。而由于癌基因表達產(chǎn)物與腫瘤抗原的關系至今未完全清楚，所以目前未發(fā)現(xiàn)很特異的腫瘤抗原（基因理論和動物實驗得到證實）。腫瘤標志物的分類

瘤標志物目前有100多種。尚未有統(tǒng)一全面的分類標準。常分為血清/血漿腫瘤標志物和組織腫瘤標志物。理想腫瘤標志物的要求TM檢測臨床意義輔助臨床早發(fā)現(xiàn)、早診斷幫助區(qū)分區(qū)分良性與惡性腫瘤協(xié)助臨床腫瘤類型鑒定及腫瘤部位鑒別幫助臨床對腫瘤病程判斷治療效果觀察，提前判斷復發(fā)幾種腫瘤標志物檢測意義標志物性質(zhì)相對特異腫瘤其它腫瘤其它疾病AFP甲胎蛋白胚胎類糖蛋白原發(fā)性肝細胞癌睪丸癌、畸胎瘤肝炎、肝硬化等CEA癌胚抗原胚胎類糖蛋白直腸癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌乳腺癌、肺癌等腸道息肉、炎癥，肝、肺等炎癥PSA前列腺額特異抗原具有酶樣活性蛋白前列腺癌腎癌、膀胱癌前列腺肥大和炎癥、泌尿生殖系統(tǒng)疾病CA15-3糖蛋白乳腺癌肺癌、腎癌等肝、腸等非腫瘤疾病CA125糖蛋白卵巢癌乳腺癌、胰腺癌等卵巢囊腫、肝炎等CA199糖蛋白胰腺癌胃癌、結(jié)腸癌等急性胰腺炎、肝硬化等幾種腫瘤標志物檢測意義標志物性質(zhì)相對特異腫瘤其它腫瘤其它疾病CA72-4糖蛋白胃癌結(jié)腸癌、卵巢癌SCC糖蛋白鱗狀上皮細胞癌抗原胚胎類糖蛋白子宮頸癌肺癌、鼻咽癌肝炎、結(jié)核TPA組織多肽抗原胚胎類糖蛋白支氣管癌膀胱癌肝炎PAP前列腺酸性磷酸酶酶前列腺癌前列腺肥大或炎癥NSE神經(jīng)元特異性烯醇化酶酶小細胞肺癌其他非小細胞肺癌、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤等血小板和紅細胞中存在腫瘤標志物的選擇建議TM肝癌①AFP②CEA

③CA19-9④AFU⑤SF胰腺癌①CA19-9②CA242③CA50④CA125

⑤CEA胃癌①CEA②CA19-9③CA72-4④PG⑤CA242⑥結(jié)直腸癌①CEA②CA19-9③CA72-4④CA242⑤TPS肺癌①NSE②CEA③CYFRA21-1④TPS乳腺癌①CEA②CA15-3③Her-2/neu④TPS女性生殖系統(tǒng)腫瘤①宮頸癌HPV,SCC②卵巢癌CA125③生殖細胞癌HCG前列腺癌①PSA②PSM③PACP惡性淋巴瘤①LDH②β2-MG

③CA125④TNFα腦膠質(zhì)瘤①NSE②

BEHAB③GFAP④VEGF鼻咽癌①VCA-IgA②EA-IgA③SCC④TPS骨轉(zhuǎn)移腫瘤①骨吸收指標②骨形成指標同一腫瘤多種腫瘤標志物選擇1000255075100靈敏度%假陽性率（1-特異度）%AFP檢測CEA檢測0255075無意義試驗ROC曲線人類具有完善的免疫系統(tǒng)，正常情況下，免疫系統(tǒng)具有識別自我與異己的功能，因而能夠防御異物入侵，而對自身組織不產(chǎn)生或產(chǎn)生極微弱的免疫應答反應，稱自身耐受。一旦機體外部或內(nèi)部因素發(fā)生改變，可使免疫耐受受到影響，導致免疫系統(tǒng)對自身組織產(chǎn)生明顯的免疫應答反應。如是低限度和非持久性，一般影響不大，高限度和持久存在則引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病血清學檢測方法很多，特異性較差，動態(tài)檢測可幫助臨床對預后及療效觀察。第五節(jié)自身抗體檢測熒光免疫技術目前常用于免疫組化和自身抗體檢測，特定可用于定位。較多用于PCR和流式細胞技術細胞核常見自身抗體檢測及臨床意義名稱 臨床意義類風濕因子（RF）類風濕性關節(jié)炎及其它免疫性疾病抗ds-DNA抗體 SLE的較特異性抗體抗Smith抗體 SLE的較特異性抗體抗組蛋白抗體 藥物性狼瘡及其它免疫性疾病 抗核糖核蛋白抗體混合結(jié)締組織病、SLE等 抗SS-A和SS-B抗體干燥綜合癥、SLE、RA等抗Scl-70抗體 系統(tǒng)性硬化癥等抗線粒體抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化等常見自身抗體檢測及臨床意義名稱 臨床意義Jo-1抗體肌炎和間質(zhì)性肺纖維化抗中性粒細胞胞漿抗體血管炎癥、自身免疫性肝病等抗甲狀腺球蛋白抗體喬本氏甲狀腺炎等甲狀腺疾病抗血小板抗體血小板減少癥抗平滑肌抗體自身免疫性肝病抗精子抗體男子不育癥抗心磷脂抗體SLE、RA等疾病HLA-B27強直性脊椎炎等第六節(jié)感染免疫檢查人體感染病原體后經(jīng)過一段時間產(chǎn)生抗體一般可持續(xù)數(shù)月或數(shù)年，因此抗體檢測可判斷現(xiàn)癥感染和既往感染情況

風濕熱是一種變態(tài)結(jié)締組織疾病，常見有風濕性心臟病、風濕性關節(jié)炎等。風濕熱常由A組溶血性鏈球菌引起，此菌可產(chǎn)生一種“O”溶血素具有抗原性，ASLO就是檢測機體產(chǎn)生的抗溶血素“O”抗體。鏈球菌感染后抗“O”的產(chǎn)生一般在一周左右，4-6周達高峰?？梢娪陲L濕性心臟病、風濕性關節(jié)炎、急性腎小球腎炎、呼吸道感染等。ASLO動態(tài)檢測對病程及療效觀察意義較大，結(jié)合CRP和ESR檢測臨床意義更大。

抗鏈球菌溶血素“O”檢測（anti-streptolysinOASLO）

傷寒是由傷寒桿菌引起的急性腸道傳染病。傷寒桿菌有兩種抗原，即菌體抗原“O”抗原和鞭毛抗“H”原。肥達氏反應就是檢測由上述兩種抗原刺激機體產(chǎn)生的抗體。肥達氏反應用于輔助診斷傷寒和副傷寒感染，由于抗體產(chǎn)生需要一定時間，故第一周陽性率10%，第二周達60%-70%，第四周達90%。臨床常以二次標本（早期和中期或恢復期）的凝集效價變化來判斷是否感染。傷寒病人的“O”抗體較“H”出現(xiàn)早，存在時間短，“H”相反。預防接種可引起“H”增高，“O”正常。肥達氏試驗OH可能情況升高正常傷寒發(fā)病早期、或其它沙門氏菌感染交叉反應正常升高預防接種、既往感染升高升高患傷寒可能性較大升高A/B/C升高可能患副傷寒甲、乙、丙肥達氏試驗

結(jié)核分枝桿菌主要引起細胞免疫，但也可引起體液免疫產(chǎn)生特異性IgG抗體，臨床常用ELISA方法檢測特異性IgG抗體，PCR方法檢測結(jié)核DNA，但兩種方法均存在部分假陽性，樣本找結(jié)核桿菌方法最為經(jīng)典。結(jié)核抗體和DNA檢測幽門螺桿菌檢測幽門螺桿菌（Hp）感染是人類最常見的慢性感染之一，與胃十二指腸等消化系統(tǒng)疾病密切相關。由于HP感染具較大危害性，故近幾年HP檢測方法被高度重視，也取得飛速發(fā)展。目前診斷幽門螺桿菌感染的方法很多，依據(jù)是否需做內(nèi)窺鏡檢查分為侵入性和非侵入性兩大類

。侵入性常做尿素酶試驗。非侵入性試驗除C13或C14

呼氣試驗外，目前血清學HP是診斷現(xiàn)癥感染較好方法，易于兒童HP感染檢測和體檢普查。梅毒血請學檢測當機體感染梅毒螺旋體后，會產(chǎn)生二種抗體，一種為抗類脂抗體，另一種為抗螺旋體抗原抗體，后者較前者特異性強。由于目前螺旋體體外培養(yǎng)較難，故血清學檢測是目前臨床常用檢查方法。常用方法有快速血漿素反應（RPR）和梅毒螺旋體血凝試驗（TPPA），后者特異性高一般用于確定試驗，RPR一般作過篩試驗和既往感染標志。TORCH感染免疫學檢測病原類型常規(guī)檢測引起主要疾病弓形蟲toxoplasmagondii寄生蟲IgM抗體人畜共患。胎兒感染，可引起流產(chǎn)、中樞神經(jīng)疾病等風疹病毒RubellavirusRNAIgG/IgM抗體胎兒感染，可引起流產(chǎn)、畸形等巨細胞病毒CytomegalovirusDNAIgG/IgM抗體，核酸成人99%感染過CMV,免疫功能低下者易再感或復燃，CMV可通過胎盤感染胎兒,影響較大單純皰疹病毒HerpssimplexvirusDNAIgG/IgM抗體皰疹性口腔炎、角膜炎、腦膜炎等，孕婦感染可導致流產(chǎn)等日本血吸蟲抗體檢測機體感染血吸蟲后可產(chǎn)生特異抗體，可作血清IgG、IgM、IgE檢測，幫助臨床診斷和流行病調(diào)查。常用方法：環(huán)卵沉淀試驗，ELISA法特異抗體檢測血吸蟲感染早期引起肝、脾腫大，晚期發(fā)展為門脈高壓、巨脾和腹水。簡介囊蟲抗體檢測豬肉絳蟲的幼蟲寄生人體,機體產(chǎn)生特異抗體.寄生蟲感染免疫學檢測

CRP是一種急性時相蛋白，由肝臟合成，能激活補體促進細胞吞噬等免疫功能。近年來CRP檢測被廣泛應用。CRP增高特點為：急性期增高明顯，預后降低迅速，且受其它因素影響很小，特異性較差。明顯增高：急性細菌性感染、嚴重創(chuàng)傷、燒傷、大手術、風濕病活動期等。輕度增高：病毒感染、惡性腫瘤、心血管疾病、肝炎、移植等。冷球蛋白特征：37C溶解，溫度降低凝固